3.2.1. Phân lập các hợp chất
Phần trên mặt đất cây chó đẻ răng ca (10,0kg), đợc phơi khô, xay nhỏ và ngâm chiết kiệt với metanol ở nhiệt độ phòng (7 ngày). Dịch chiết đợc cất thu hồi dung môi thu đợc cao metanol (502g). Phân bố cao metanol trong nớc, sau
đó lắc lần lợt với cloroform, n-butanol. Cất thu hồi dung môi thu đợc các cặn dịch chiết là 255, 95g, tơng ứng.
Cao cloroform đợc phân tách bằng sắc ký cột nhồi silicagel, dung môi giải hấp là cloroform:metanol (99: 1: 40:1; 30:1:; 20:1) thu đợc 10 phân đoạn chính. Phân đoạn 4 tinh chế lại bằng sắc ký cột thu đợc chất 51 (2092mg). Phân đoạn 5 tiếp tục phân tách bằng sắc ký cột trên silicagel, dung môi rửa giải là cloroform:metanol 15:1 thu đợc các chất 52 (368mg).
Sơ đồ 3.1: Phân lập các hợp chất từ cây chó đẻ răng ca
Cao n-butanol đợc phân tách trên bằng sắc ký nhồi silicagel, dung môi giải hấp là cloroform:metanol: nớc (40:1: 0,05; 30:1: 0,05; 20:1: 0,05; 10:1: Phần trên mặt đất cây chó đẻ (10,0 kg). Cao metanol (502g) Cloroform (225 g) Nớc 53 Cao butanol (95g) SKC cloroform : metanol - Phân bố trong nớc
- Chiết lần lợt với cloroform, butanol
SKC
cloroform : metanol:nớc
0,05) thu đợc 12 phân đoạn chính. Phân đoạn 3 tinh chế lại bằng sắc ký cột thu đợc chất 53 (92mg).
3.2.2. Các số liệu về phổ tử ngoại, phổ khối và phổ cộng hởng từ hạt nhân
của chất đã phân lập.
Hợp chất 51: Tinh thể hình kim dài, đ.n.c. 137-1380C. Phổ ESI-MS m/z: 431 [M+H]+.
Phổ 1H-NMR và 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ (ppm): xem bảng 4.1.
Hợp chất 52: Tinh thể hình kim màu vàng, đ.n.c. 270-273oC.
Phổ UVλmaxMeOHnm (logε): 213 (4,59), 254 (4,75), 271 (4,47), 311 (4,00), 349 (4,04), 400 (3,97). Phổ ESI-MS m/z: 335 [M]+. Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,59 (1H, s, 5-OH), 7,55 (2H, dd, J = 8,5, 2,0 Hz, H-2', 6'), 6,85 (1H, d, J = 8,8 Hz, H-5'), 6,38 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-8), 6,19 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-6) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ (ppm): xem bảng 4.2. Hợp chất 53: Tinh thể màu vàng, đ.n.c. = 214-215oC.
Phổ UVλmaxEtOHnm (logε): 256 (4,14), 267 (4,11), 293 (4,02), 346 (3,83).
Phổ IRνmaxKBrcm-1: 3415 (OH), 1660 (C=O), 1500, 1490 (C=C), 1060 (C-O), 1015.
Phổ ESI-MS (positive) m/z: 611 [M+H]+.
Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,59 (1H, s, 5-OH), 7,55 (2H, dd, J = 8,5, 2,0 Hz, H-2', 6'), 6,85 (1H, d, J = 8,8 Hz, H-5'), 6,38 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-8), 6,19 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-6), 5,34 (1H, d, J = 7,0 Hz, glc H-1), 4,38 (1H, brs, rham-1), 3,71-3,05 (các proton của đờng) v 1,00 à
(3H, d, J = 6,0, rham-CH3).
Chơng 4