Phân lo i:
-
-
Enzyme gi i h n là các endonuclease có kh n ng phân c t DNA m ch ô i m t cách l p l i nh ng v trí xác n h.
G m 3 lo i:
Lo i 1: phân c t t i v trí cách trình t nh n bi t m t kho ng t 1000-5000 Nu
Lo i 2: phân c t ngay t i v trí nh n bi t.
1. Các lo i enzyme gi i h n lo i 2
Trình t nh n bi t :
- M i enzyme nh n bi t m t trình t nucleotide c hi u.
- G m 4 – 8 nucleotide. M t s enzyme có trình t nh n bi t không
chuyên bi t (nh ng Nu có th thay th c kí hi u là N)
- Có c u trúc palindrome: trình t trên 2 m ch hoàn toàn gi ng nhau khi c cùng m t chi u.
Ví d : trình t nh n bi t c a enzyme BamHI là
5’ G G A T C C 3’3’ C C T A G G 5’ 3’ C C T A G G 5’
1. Các lo i enzyme gi i h n lo i 2 (tt)
Các ki u c t c a enzyme gi i h n lo i 2
- C t t o u b ng (blunt ends): c t hai m ch DNA t i cùng m t i m , t o 2 u b ng.
Ví d :
- C t t o u dính (cohesive ends): c t t i v trí l ch nhau trên hai m ch DNA, t o 2 u dính ( u so le). Ví d : Eco RI G C T T A A A A T T C G
2. Thi t l p ph n n g c t
Thành ph n ph n n g c t:
- DNA c n phân c t. - Dung d ch m .
- Enzyme
- Dung d ch BSA (bovine serum albumin) - N c c t 2 l n ã h p kh trùng
L u ý:
- Venzyme≤ 1/10 t ng th tích ph n n g.ổ ể ả ứ
- S d ng dung d ch m (buffer) phù h p v i enzyme.
- ph n n g c t nhi t ho t n g t t nh t c a enzyme. - B sung enzyme vào sau cùng.ổ
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});