Trên cơ sở nguồn vật liệu nhập nội từ Ấn độ, theo ựịnh hướng chọn lọc các dòng bông mang gen Bt kháng sâu xanh ựục quả, chúng tôi ựã chọn Margo, Moonson và YRCH3 làm vật liệu nghiên cứu. Hạt F1 của 03 vật liệu này ựược gieo trồng với 500 cá thể/vật liệu trên ựồng ruộng trong vụ Khô 2010, tại khu thực nghiệm của Viện Nghiên cứu Bông và Phát triển nông nghiệp Nha Hố - Ninh Thuận. Sau khi cây bông ựược 25 ngày tuổi, chúng tôi tiến hành thử kháng sinh kanamycine ựể phát hiện nhanh các cá thể mang gen Bt kháng sâu. Kết quả thử kanamycine ựược thể hiện ở bảng 4.1:
Bảng 4.1. Kết quả thử kanamycin của các vật liệu (Nha Hố, Vụ Khô 2010)
TT Tên vật liệu Tổng số cây Số cây dương tắnh Số cây âm tắnh % cây kháng kanmycine 1 Margo 500 350 150 30 2 Moonson 500 385 115 23 3 YRCH3 500 305 195 39 4 C118 (đ/c 1) 500 500 0 0 5 TM1 (đ/c 2) 500 0 500 100
Kết quả bảng 4.1 cho thấy, vật liệu YRCH3 có tỷ lệ cây kháng kanamycine ựạt cao nhất trong 3 vật liệu nghiên cứu với tỷ lệ cây kháng là 39%, kế ựến là Margo 30% và thấp nhất là Moonson 23%. Sau khi thử kanamycine, chúng tôi ựã chọn 150 cá thể của vật liệu Margo, 115 cá thể Moonson và 195 cá thể YRCH3 ựưa ựi kiểm tra bằng kỹ thuật PCR.
Các giống bông Bt trồng thương mại ựầu tiên trên thế giới mang gen Bt
CryIAc, các giống dòng/giống bông Bt kháng sâu nhập vào Việt Nam hầu hết số
mang gen này. Bằng việc sử dụng cặp mồi ựặc hiệu của gen CryIAc ựể xác sự hiện diện của gen CryIAc trong các vật liệu nhập nội, kết quả thu ựược ở các hình 4.1, 4.2 và 4.3.
Hình 4.1. Kết quả ựiện di ựồ sản phẩm PCR nhân gen CryIAc của vật liệu Margo Kết quả thu ựược ở hình 4.1 cho thấy, trên ựiện di ựồ kiểm tra sản phẩm PCR nhân gen CryIAc cho các cá tuyển của vật liệu Margo, ựã xác ựịnh ựược 13 cá thể với các giếng ựều xuất hiện một băng duy nhất. điều ựó chứng tỏ 13 cá thể này có mang gen Bt kháng sâu ở dạng ựồng hợp tử.
Trong khi ựó, tại hình 4.2, kết quả ựiện di ựồ kiểm tra sản phẩm PCR nhân
gen CryIAc cho các cá tuyển Moonson, ựã xác ựịnh ựược 19 cá thể với các giếng
ựều xuất hiện một băng duy nhất. điều ựó chứng tỏ 19 cá thể này có mang gen Bt kháng sâu ở dạng ựồng hợp tử.
Hình 4.2. Kết quả ựiện di ựồ sản phẩm PCR nhân gen CryIAc của vật liệu Moonson Tại hình 4.3, kết quả ựiện di ựồ kiểm tra sản phẩm PCR nhân gen CryIAc
cho các cá tuyển YRCH3, ựã xác ựịnh ựược 22 cá thể với các giếng ựều xuất hiện một băng duy nhất. điều ựó chứng tỏ 22 cá thể này có mang gen Bt kháng sâu ở dạng ựồng hợp tử.
Hình 4.3. Kết quả ựiện di ựồ sản phẩm PCR nhân gen CryIAc của vật liệu YRCH3
Tất cả các cá thể mang gen kháng sâu của 3 vật liệu này ựược tự thụ triệt ựể, tạo hạt cho thắ nghiệm vụ sau.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
Hình 4.4. Kết quả thử kháng sinh Kanamycine