3. ðỊ Að IỂM, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 1 ðịa ủiểm, thời gian nghiờn cứu
3.3.Phương phỏp nghiờn cứu
3.3.1. Phương phỏp nghiờn cứu ngoài ủồng ruộng
* ðiều tra thành phần ruồi ủục lỏ và thành phần ong ký sinh của chỳng
Thực hiện theo phương phỏp của Phạm Văn Lầm (1997) [15], ủiều tra ngẫu nhiờn trờn ủồng ruộng, khụng cốủịnh ủiểm (càng nhiều càng tốt), mỗi tuần
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 22
1 lần hoặc vào thời ủiểm cõy ký chủ trờn ruộng bị ruồi ủục lỏ gõy hại nặng. + Thời gian thu mẫu từ thỏng 08/2008 ủến thỏng 08/2009.
+ Mẫu sõu non, nhộng ủược thu riờng từng loại cõy trồng ủem về
phũng, tiếp tục nuụi ủể thu trưởng thành ruồi ủục lỏ và ong ký sinh, rồi ngõm vào cồn 70o.
+ Thu thập tất cả trưởng thành cỏc loài ruồi ủục lỏ trờn từng loại cõy trồng ủem về phũng và ngõm cồn 70o (ghi rừ ủịa ủiểm, ngày thu bắt, cõy trồng) ủể phõn loại.
Cỏc mẫu ngõm ủược ủể riờng từng loại qua quan sỏt sơ bộ hỡnh thỏi của trưởng thành.
* ðiều tra diễn biến mật ủộ ruồi ủục lỏ Liriomyza sativae Blanchard và tỷ
lệ ký sinh trờn ủậu rau tại ða Tốn – Gia Lõm – Hà Nội
+ ðiều tra tỡnh hỡnh gõy hại của ruồi ủục lỏ Liriomyza sativae
Blanchard chỳng tụi tiến hành trờn ủồng ruộng theo phương phỏp ủịnh kỳ (7 ngày/1 lần) trờn mỗi ruộng cố ủịnh ủậu cụve. Phương phỏp ủiều tra 5 ủiểm chộo gúc, mỗi ủiểm 5 cõy, mỗi cõy 5 lỏ. ðếm số ủường ủục, số giũi sống, số
giũi chết trờn lỏ.
+ Tỷ lệ ký sinh: mỗi lần ủi ủiều tra kết hợp với thu mẫu (30 - 100 mẫu),
ủếm số giũi cú trờn lỏ, ghi chộp số liệu, theo dừi trong phũng thớ nghiệm cho
ủến khi ong vũ hoỏ ủể tớnh tỷ lệ ký sinh.
3.3.2. Phương phỏp nghiờn cứu trong phũng thớ nghiệm
Nhõn nuụi vật chủ ruồi ủục lỏ L. sativae và ong ký sinh sõu non ruồi
ủục lỏ ủược thực hiện theo quy trỡnh của Giang, Uend (2002) [41].
* Phương phỏp nhõn nuụi ký chủ ruồi ủục lỏ Liriomyza sativae Blanchard
Nhõn nuụi ký chủ là một việc làm hết sức quan trọng ủũi hỏi phải ủược quan tõm ngay từ khõu ủầu tiờn bởi vỡ ký sinh và ký chủ luụn song song tồn tại, “chất lượng” của ký sinh phụ thuộc vào “chất lượng” của ký chủ.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 23
Chỳng tụi tiến hành trồng cõy ủậu cụve trong chậu trồng cõy loại nhỏ,
ủặt trong lồng lưới giỳp cõy trồng cú ủủ ỏnh sỏng, lỏ cõy cứng và cỏch li ruồi
ủục lỏ. Khi cõy ủược 2 lỏ ủơn chỳng tụi tiến hành thả trưởng thành ruồi ủục lỏ vào, khi ấy chỳng sẽủẻ trứng trong nhu mụ lỏ, rồi trứng nở thành sõu non, sõu non ủẫy sức sẽ húa nhộng, nhộng sẽ vũ húa thành con trưởng thành. Cứ như
vậy, quy trỡnh nhõn nuụi ruồi ủục lỏ ủược tiến hành một cỏch liờn tục ủảm bảo
ủủ số lương ký chủ ủể giỳp cho việc nhõn nuụi ong ký sinh ruồi ủục lỏ một cỏch cú hiệu quả.
- Trồng cõy ký chủ sạch: hàng ngày gieo 10 - 20 cõy ủậu cụve trong chậu trồng cõy nhỏ, ủặt trong lồng lưới ủể cỏch li.
- Tiến hành nhiễm ruồi trưởng thành Liriomyza sativae trờn ủậu cụve khi cõy ủược 2 lỏ ủơn, sau 24 giờ thay cõy sạch vào ủể ruồi tiếp tục ủẻ trứng và ủảm bảo khả năng nở ủồng loạt của trứng, cõy ủó cú ruồi ủẻ trứng ủược
ủưa vào lồng cỏch li, ghi ngày ruồi ủẻ trứng. Nếu số lượng ruồi trưởng thành nhiều (> 30 con), rỳt ngắn thời gian tiếp xỳc nhằm giảm số lượng sõu non sau khi nở trờn 1 lỏ (1- 3 con), ủảm bảo ủủ dinh dưỡng cho sõu non hoàn thành pha phỏt dục. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Sau khi sõu non ủược 3 ngày tuổi, cắt lỏ cú sõu non ủặt vào hộp nhựa hoặc ủĩa petri cú trải giấy ẩm ủảm bảo ủủẩm cho sõu non hoỏ nhộng.
- Nhộng ủược ủưa vào hộp petri cú lút giấy ẩm với số lượng 20 nhộng/ủĩa hoặc ủể vào ống nghiệm với số lượng 5 nhộng/ống. Khi nuụi nhộng phải chỳ ý tựy vào diện tớch mặt ủỏy ống nghiệm mà bố trớ số lượng nhộng cho phự hợp, nếu bố trớ quỏ nhiều nhộng thỡ khi húa trưởng thành sẽ bị cỏc nhộng khỏc “chốn ộp” khú cú thể thoỏt lờn ủược và nú cú thể gõy chết trưởng thành.
- Trưởng thành vũ hoỏ ủược ủưa vào lồng mica tiếp tục nuụi và cho ủẻ
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 24
* Phương phỏp nhõn nuụi ong ký sinh Opius phaseoli Fischer
Khi ký chủ là sõu non ruồi ủục lỏ Liriomyza sativae ủược 3 ngày tuổi, chỳng tụi tiến hành cho trưởng thành ký sinh tiếp xỳc với ký chủ. Khi sõu non ký chủ bị ký sinh (sõu non ký chủ chết và chuyển sang màu vàng), chỳng tụi tiến hành thay cõy ký chủ mới, ủồng thời lấy cõy ký chủủó bị ký sinh ra khỏi lồng.
Nếu mục ủớch thớ nghiệm là xỏc ủịnh hỡnh thỏi, ủặc ủiểm sinh học cỏc pha phỏt dục của ong, chỳng tụi tiến hành mổ ký sinh hàng ngày ủể theo dừi.
Nếu mục ủớch thớ nghiệm nhằm duy trỡ hoặc tăng quần thể ký sinh, chỳng tụi tiếp tục theo dừi cho ủến khi sõu non húa nhộng trong ủường ủục sau ủú ngắt lỏ cho vào hộp ủể thu trưởng thành. Sau ủú lại cho trưởng thành ký sinh tiếp xỳc với sõo non ruồi 3 ngày tuổi. Cứ như vậy quy trỡnh nhõn nuụi ong ký sinh phải ủảm bảo tớnh lien tục ủể ủủ nguyờn liệu cho việc xỏc ủịnh cỏc chỉ tiờu theo dừi ký sinh.
+ Phương phỏp nghiờn cứu cỏc ủặc ủiểm hỡnh thỏi, thời gian phỏt dục cỏc pha trước trưởng thành, vũng ủời và tập tớnh hoạt ủộng ký sinh của Opius phaseoli Fischer
Thớ nghiệm cho ong tiếp xỳc ủẻ trứng ký sinh với ấu trựng 3 ngày tuổi trong thời gian lỏ 24 giờ ủược nhắc lại nhiều lần ủể cú ủủ số lượng vật chủ cho theo dừi thớ nghiệm. Thức ăn bổ sung là mật ong nguyờn chất. Hàng ngày tiến hành mổ nhộng ruồi ủục lỏ ủó bị kớ sinh, quan sỏt dưới kớnh lỳp soi nổi, theo dừi sự phỏt triển của trứng, ấu trựng, nhộng cho ủến khi ong ký sinh vũ hoỏ. Ghi nhận thời gian phỏt triển cỏc pha trước trưởng thành. ðồng thời quan sỏt mụ tả hỡnh thỏi, ủo kớch thước cỏc pha bằng thước vi trắc kế với số mẫu 30 cỏ thể cho mỗi pha. Cũn ủối với trưởng thành, chỳng tụi cho trưởng thành mới vũ
hoỏ cho vào lồng ủó cú ký chủ, theo dừi thời gian ủến khi trưởng thành ủẻ quả
trứng ủầu tiờn. Ghi số liệu, tớnh vũng ủời của ong.
Kết hợp thớ nghiệm theo dừi tập tớnh hoạt ủộng của trưởng thành ong ký sinh Opius phaseoli.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 25
* Phương phỏp xỏc ủịnh tỷ lệ ký sinh của ong Opius phaseoli Fischer
+ Ảnh hưởng của thức ăn bổ sung ủến thời gian sống của ong trưởng
thành và tỷ lệ ký sinh
Bố trớ 5 cụng thức thớ nghiệm với 5 loại thức ăn là mật ong nguyờn chất, mật ong 50%, mật ong 10%, nước ló và ủối chứng (khụng cho ăn). Mỗi cụng thức 10 ấu trựng 3 ngày tuổi và thả 5 cặp ong (1ủực, 1cỏi) vũ hoỏ ủược 1 ngày, 3 lần nhắc lại. Cứ sau 24 giờ thay cõy cú ký chủ mới, chuyến ấu trựng
ủó bị ký sinh ra ủĩa petri cú ủặt giấy ẩm ủể thu nhộng, cho ủến khi ong trưởng thành chết sinh lý, ghi chộp số liệu ủể tớnh toỏn
+ Ảnh hưởng của tuổi vật chủ ủến tỷ lệ ký sinh, từ ủú xỏc ủịnh tuổi nào là thớch hợp nhất ủối với ong ký sinh
Cho trưởng thành ký sinh tiếp xỳc riờng với sõu non 2 ngày tuổi, 3 ngày tuổi, 4 ngày tuổi và nhộng 1 ngày tuổi. Mỗi cụng thức 20 ấu trựng và 1 cặp ong 1 ngày tuổi, 3 lần nhắc lại, thức ăn bổ sung là mật ong nguyờn chất, thời gian tiếp xỳc là 24 giờ. Ký chủ ủó bị kớ sinh ủược theo dừi cho ủến khi ong vũ
hoỏ, ghi số liệu ủể tớnh tỷ lệ ký sinh. Ở tuổi nào cú tỷ lệ ký sinh cao nhất thỡ
ủú thớch hợp nhất ủối với ong ký sinh. Bờn cạnh ủú thực hiện thớ nghiệm hỗn hợp cỏc tuổi (mỗi tuổi 10 sõu non) cho tiếp xỳc với một cặp ong trong vũng 24 h. Thớ nghiệm ủược nhắc lại 3 lần. Xỏc ủịnh hệ số lựa chọn.
+ Ảnh hưởng của mật ủộ ong ký sinh ủến hiệu quả ký sinh
Bố trớ 6 cụng thức tương ứng với số cặp ong là 1; 2; 4; 6; 8; 10 cặp ong. Mỗi cụng thức 30 sõu non, nhắc lại 3 lần, cho tiếp xỳc với ong ký sinh trong 24 giờ, ngắt lỏ ủặt ẩm ủể thu nhộng, theo dừi ủến khi ong vũ hoỏ, tớnh tỷ lệ
ong ký sinh.
* Phương phỏp xỏc ủịnh ảnh hưởng của một số loại thuốc ủối với trưởng
thành ong ký sinh Opius phaseoli Fischer
Bố trớ 3 cụng thức thớ nghiệm
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 26 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Cụng thức 2: Thuốc trừ sõu hoỏ học Padan 95SP nồng ủộ 0,10% + Cụng thức 3: Thuốc trừ sõu sinh học Boverit nồng ủộ 2,00%
Chỳng tụi pha thuốc ở nồng ủộ khuyến cỏo, sau ủú dựng một băng giấy lọc kớch thước 12 x 2 cm, nhỳng vào dung dịch thuốc rồi hong khụ, sau ủú cho vào ống nghiệm 23,5 x 2,5 cm, trong ủú ủó cú 10 ong trưởng thành 3 ngày tuổi. Sau 6 giờ tiếp xỳc chuyển toàn bộ số ong sang ống nghiệm sạch ủể quan sỏt và ủếm số ong sống sau 1, 12, 24, 36, 48 giờ xử lý. Ong ủược ăn mật ong nguyờn chất.