3.3.1. Cây tầm gửi Macrosolen cochinchinensis
- Thân cây bị nhiễm bệnh
- Thân cành, lá, hoa, quả cây tầm gửi
3.3.2. Hoá chất và thiết bị cần thiết
Hoá chất dùng trong giải phẫu mô - Safranin, xniline, xylen
- Cồn theo tỷ lệ: 1/10, 3/10, 5/10, 7/10 - Cồn nguyên chất
Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm - Kính hiển vi
- Máy cắt mẫu - Dao cắt - Lame - Bình tam giác - Dao đục, búa - Kim bơm 3.4. Phƣơng pháp
3.4.1. Nội dung 1: Điều tra mức độ nhiễm bệnh tầm gửi trên cây cao su tại Nông trƣờng Ông Quế - Đồng Nai
Phƣơng pháp điều tra: Tùy theo diện tích của mỗi lô đã chọn, điều tra 5-10 điểm trên hai đƣờng chéo góc (hoặc theo đƣờng zigzag), mỗi điểm điều tra 100 cây.
Chỉ tiêu điều tra:
Tổng số cây bệnh
Tỷ lệ bệnh (%) = --- * 100 Tổng số cây điều tra
∑(N1*1 + N2*2 + …+ Nn*n) Chỉ số bệnh (%) = --- N*n N1: Số cây bệnh ở cấp 1 N2: Số cây bệnh ở cấp 2 Nn: Số cây bệnh ở cấp n N: Tổng số cây điều tra
n: Trị số bệnh cao nhất trong bảng phân cấp bệnh
Theo TS Trần Văn Cảnh có thể phân cấp vết bệnh nhƣ sau: - Cấp 0: không có vết bệnh - Cấp 1: có từ 1-3 vết bệnh - Cấp 2: có từ 4-5 vết bệnh - Cấp 3: có từ 6-8 vết bệnh - Cấp 4: có từ 9-10 vết bệnh - Cấp 5: có trên 10 vết bệnh
Tỷ lệ tầm gửi phân bố trên các vị trí của tán cây: - Chọn lô L3 để điều tra
- Điều tra 5 – 10 điểm theo hai đƣờng chéo góc (hoặc đƣờng zigzag), mỗi điểm điều tra 100 cây.
- Điều tra ghi nhận số liệu theo 3 vị trí nhiễm bệnh trên cây: cành cấp 1, cành cấp 2 và trên thân cây.
Hình 3.1. Sơ đồ vị trí phân bố vết bệnh trên cây - Chỉ tiêu thu đƣợc:
Tỷ lệ phân bố trên cành cấp 1 Tỷ lệ phân bố trên cành cấp 2 Tỷ lệ phân bố trên thân cây
Xử lý số liệu: Số liệu về tỷ lệ bệnh, chỉ số bệnh và tỷ lệ tầm gửi phân bố trên các vị trí tán của cây đƣợc tính theo đơn vị phần trăm (%) sau đó vẽ biểu đồ trên phần mềm Microsoft Office Excel 2003.
3.4.2. Nội dung 2: Định danh các loài tầm gửi gây bệnh họ Loranthaceae
- Lấy mẫu: thân cành, hoa, lá, quả
- Quan sát hình thái bên ngoài và định danh dựa theo bảng phân loại cây tầm gửi trong “Cây cỏ miền Nam”(Phạm Hoàng Hộ, 2000) và bài báo cáo của Lê Hoàng Hải tại Diễn đàn trƣờng Đại học Cần Thơ ngày 13/1/2006 cùng với sự hƣớng dẫn của thầy Lê Văn Việt – Khoa Sinh học Trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên.
- Các chỉ tiêu quan sát: + Hình dạng
+ Màu sắc
3.4.3. Nội dung 3: Khảo sát sự nảy mầm và chu trình phát triển của loài tầm
gửi Macrosolen cochinchinensis
Khảo sát khả năng nảy mầm:
- Do số lƣợng hạt có giới hạn nên thí nghiệm đƣợc tiến hành khảo sát ngẫu nhiên với 3 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức thực hiện trên 1 cây, số hạt gieo trên mỗi cây là 2 hạt.
- Mẫu thí nghiệm: hạt tầm gửi Macrosolen cochinchinensis tƣơi. Nghiệm thức Giống cây Thời gian
theo dõi
1 GT 1 4 tuần
2 PB235 4 tuần
3 Cây khác 4 tuần
Chu trình phát triển: mang hạt tầm gửi Macrosolen cochinchinensis tƣơi gieo lên cây. Sau khi hạt bắt đầu nảy mầm, quan sát sự sinh trƣởng của cây.
Chỉ tiêu quan sát: - Thời gian hạt nảy mầm - Khả năng nảy mầm của hạt
3.4.4. Nội dung 4: Giải phẫu hình thái
- Phƣơng pháp:
Thu mẫu bệnh
Cắt thành từng khối nhỏ hình chữ nhật (1-2×3-4 cm)
Cho vào bình tam giác rồi đun cách thuỷ cho đến mềm
Dùng dao cắt thành những lát thật mỏng
Lần lƣợt rửa với cồn: 10%, 30%, 50%, 70%và cồn nguyên chất
Nhuộm các mẫu với thuốc nhuộm Safranin, aniline, xylen
Lên tiêu bản và mang sấy khô Xem trên kính hiển vi và chụp hình
- Chỉ tiêu quan sát: cấu tạo của các tia gỗ
3.3.5. Nội dung 5: Bƣớc đầu thử nghiệm xử lý tầm gửi với hóa chất Garlon 250 EC
Lô thực hiện thí nghiệm: - Tên lô: N1/Đ1. - Diện tích: 23,72 ha. - Dòng vô tính: PB 235. - Năm trồng: 1986. - Năm khai thác: 1992.
- Địa điểm lô: Thuộc đội 1 Nông trƣờng Ông Quế - Đồng Nai.
Phƣơng pháp chọn cây: Chọn các cây có đồng nhất các chỉ tiêu sau: - Đều là những cây đã khô miệng cạo.
Phƣơng pháp:
- Dùng dao đục tạo một lỗ tròn nhỏ đƣờng kính khoảng 3 cm, chiều sâu 4-5 cm ngay dƣới gốc cây cao su cách mặt đất 15-20 cm (Hình a).
- Lấy ống bơm thuốc vào lỗ (Hình b). - Đậy kín miệng lỗ (Hình c).
Hình 3.2. (a), (b), (c) – Các bƣớc thí nghiệm
Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, với 4 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức thực hiện trên 1 cây.
Nghiệm thức Nồng độ Garlon 250
EC (ml) Thời gian theo dõi
1 2 7 tuần
2 4 7 tuần
3 6 7 tuần
4 8 7 tuần
Chƣơng 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Kết quả điều tra mức độ nhiễm bệnh tầm gửi trên cây cao su tại nông trƣờng Ông Quế - Đồng Nai.
Mức độ nhiễm bệnh tầm gửi
Trong quá trình thực hiện đề tài, mức độ nhiễm bệnh tầm gửi trên cây cao su đã đƣợc tiến hành điều tra tại Nông trƣờng Ông Quế - Công ty Cao su Đồng Nai. Các lô đƣợc chọn để thực hiện là: N1, L3, M1, đây là những lô thuộc đội 1 quản lý. Những lô này có diện tích khá lớn (khoảng trên 23 ha) và chủ yếu là trồng bằng dòng vô tính PB 235 đƣợc khai thác theo chế độ S/2 và d3. Hầu hết những lô này tập trung gần nhau, cách xa vùng dân cƣ, xung quanh không có vƣờn cây ăn trái hoặc các loại cây khác. Vì thế đây là một môi trƣờng tốt cho các loài chim ăn quả trú ngụ và gieo rắc hạt. Kết hợp với quá trình tiến hành điều tra về mức độ nhiễm bệnh còn có ghi nhận thêm về sự phân bố các vết bệnh trên cây của lô L3. Tiến hành điều tra một lần và thu đƣợc kết quả nhƣ sau:
Bảng 4.1. Kết quả điều tra mức độ nhiễm bệnh tầm gửi trên cây cao su tại nông trƣờng Ông Quế - Đồng Nai
Lô điều tra Giống cây Diện tích (ha) Số cây điều tra (cây) Số cây nhiễm bệnh (cây) Tỷ lệ bệnh (%) Chỉ số bệnh (%) N1 PB 235 23,72 378 185 48,94 25,45 L3 PB 235 24,23 454 279 64,45 23,61 M1 PB 235 và GT 1 24,45 480 199 41,46 13,08
48.94 64.45 41.46 13.08 23.61 25.45 N1 L3 M1 Lô % Tỷ lệ bệnh Chỉ số bệnh
Biểu đồ 4.1. Biểu đồ thể hiện mức độ nhiễm bệnh tầm gửi trên cây cao su
Số liệu ở bảng 4.1 cho thấy tỷ lệ bệnh biến động từ 41,46% đến 64,45% và chỉ số bệnh từ 13,08% đến 25,45%. Ở đây mức độ nhiễm bệnh giữa các lô N1, L3, M1 không có sự chênh lệch lớn. Hầu hết cả ba lô đều nhiễm bệnh tƣơng đối nặng. Riêng lô L3 bị nhiễm bệnh nặng nhất với tỷ lệ bệnh là 64,45% và chỉ số bệnh 23,61%. Lô N1 nhiễm bệnh tƣơng đối cao với tỷ lệ bệnh 48,94% và chỉ số bệnh 25,45%. Riêng lô M1 là có tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh tƣơng đối thấp hơn (TLB: 41,46% và CSB: 13,08%). Với tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh khá cao của các lô, biểu hiện bên ngoài của những cây bị nhiễm bệnh là xuất hiện u lồi trên thân cành, tại vị trí bị nhiễm bệnh cành cây phát triển chậm hơn , kích thƣớc cành nhỏ hơn và yếu ớt dễ bị gãy rụng. Lô N1 và L3 có 100% là dòng vô tính PB 235, còn lô M1 vừa có dòng vô tính PB 235 vừa có dòng vô tính GT 1 nên tỷ lệ nhiễm bệnh thấp hơn.
Dòng vô tính PB 235 có đặc điểm là thân thẳng tròn, vỏ trơn láng, góc phân cành rộng, lá màu xanh vàng, tán rộng lúc còn nhỏ, tán cao thoáng lúc cây trƣởng thành, rụng lá mùa mƣa và thay lá sớm, khi bộ lá phát triển trở lại thì nhiễm hai lần bệnh phấn trắng. Trong khi đó giống cây GT1 lại có góc phân cành hẹp, lá xanh đậm và tán gọn, thay lá muộn và phát triển bộ lá đồng đều [1], [12]. Có thể sự khác nhau cơ bản về đặc điểm của hai giống cây này là nguyên nhân làm cho các lô chủ yếu
35.33%
41.57% 23.10%
Cành cấp 1 Cành cấp 2 Trên thân cây
trồng bằng dòng vô tính PB 235 bị nhiễm bệnh tầm gửi. Tán cây rộng và thoáng, đặc biệt là thay lá sớm là điều kiện thuận lợi cho hạt tầm gửi bám dính và phát bệnh.
Tỷ lệ phân bố trên các vị trí của tán cây (Bảng 4.2):
Bảng 4.2. Kết quả điều tra tỷ lệ nhiễm bệnh trên các vị trí của tán cây
Lô điều tra Diện tích (ha) Giống cây Tổng số cây bị nhiễm bệnh (cây) Tổng số vết bệnh Tỷ lệ cành cấp 1 (%) Tỷ lệ cành cấp 2 (%) Tỷ lệ trên thân cây (%) L3 24,23 PB 235 279 1.169 41,57 35,33 23,1
Biểu đồ 4.2. Biểu đồ thể hiện vị trí phân bố vết bệnh trên tán cây cao su
Qua biểu đồ trên đã thể hiện rất rõ tỷ lệ phân bố ở các vị trí trên tán cây, vết bệnh trên cành cấp 1 chiếm tỷ lệ cao nhất 41,57%, tiếp theo là cành cấp 2 chiếm 35,33%, cuối cùng chiếm tỷ lệ thấp nhất là vết bệnh trên thân cây 23,10%. Vì lô thí nghiệm đƣợc trồng hoàn toàn là dòng vô tính cao su PB 235 có tán rộng và cao thoáng nên các vết bệnh phân bố ở cành cấp 1 và 2 là đa số, còn nhiễm trên thân cây thì ít hơn. Hạt của cây tầm gửi có chất nhầy, có khả năng bám rất chặt vào các cành cây và khó bị tiêu hóa trong đƣờng ruột của chim, vì vậy khi chim thải ra hạt vẫn còn nguyên khả năng nảy mầm, những cây có tán thƣa và rộng tạo nhiều thuận lợi cho sự phát tán lây lan của tầm gửi (Angie Ng), (trích tài liệu “Bird Ecology Study Group,
Nature Society”). Mặt khác, đa số các loài chim đều thích đậu trên các cành cây cao hơn nên tỷ lệ nhiễm bệnh trên cành cấp 1 và cành cấp 2 cao hơn.
4.2. Kết quả định danh các loài tầm gửi họ Loranthaceae
Sau khi sƣu tầm đƣợc một số mẫu các loại cây tầm gửi, cùng sự hƣớng dẫn của thầy Lê Văn Việt khoa Sinh học trƣờng Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, căn cứ vào sự mô tả của Phạm Hoàng Hộ trong “Cây cỏ miền Nam”, cùng với nghiên cứu viên Lê Hoàng Hải 6 loài tầm gửi đã đƣợc định danh gồm: Macrosolen cochinchinensis, Viscum articulatum, Dendrophtoe pentandra, Taxillus chinensis,
Macrosolen tricolor, Helixanthera cylindrica. Sau đây là hình ảnh và đặc điểm các loài đã đƣợc định danh.
4.2.1. Macosolen cochinchinensis (Lour) van Tiegh: Đại cán Nam Bộ
Hình 4.1. Loài M. cochinchinensis
Là dạng bụi bán ký sinh có chồi, lá có phiến bầu dục thon, to 6-8 x 2,5-5 cm, dày, không có lông; cuống 2-3 mm. Chùm hoa đứng cao 2-3 cm; lá hoa 1; vành hình túi phù, cao 25-45 mm, tai 6; tiểu nhụy 6. Phì quả tròn.
Thông thƣờng loài này đƣợc phân bố ở đồng bằng Bắc – Trung – Nam. Trái nhị to; lá dùng nhƣ trà; nhựa tống nhau sau sanh.
4.2.2. Viscum articulatum Burm. F: Chùm gửi dẹt, ghi có đốt
Hình 4.2. Loài V. articulatum
Loài cây này có dạng bụi thòng, bán ký sinh, dài 40-60 cm; thân có đốt dẹp, dể gãy ở mắt, không có lá. Hoa ở mắt, chụm 3, hoa giữa cài hoa bên đực; đài 3-4 phân; bao phấn gắn trên lá đài. Phì quả màu trắng, to 3-4 mm.
Phạm vi phân bố của loài này đƣợc Phạm Hoàng Hộ (1999-2000) ghi nhận từ Phan Rang vào Nam. Trong dân gian hoặc trong y học cổ truyền thƣờng dùng để đắp nơi bị dập, gãy xƣơng, đứt; trị sốt; phấn dƣơng.
4.2.3. Dendrophtoe pentandra (L) Miq: Mộc ký ngũ hùng; Scaly flowered
Loranthus. 4.2.4. Hình 4.3. Loài D. pentandra
Là dạng bán ký sinh có nhánh to, lá mọc xen; phiến đa hình, đầu tà hay nhọn, đáy tà, không lông và dày nhƣ da. Chùm ngắn ở nách lá; lá hoa 1, nhỏ; cánh hoa 5, dính thành ống hơi phù, phía trong đỏ. Trái có hình xoan tròn, cao đến 1 cm.
Thông thƣờng đƣợc tìm thấy ở bình nguyên cho đến rừng sác, Bắc Tây Nguyên. Loài này đƣợc sử dụng để đắp trị phồng, loét.
4.2.4. Helixanthera cylindrica (Roxb) Dans: Chùm gửi trụ.
Hình 4.4. Loài H. cylindrica [23]
Loài tầm gửi này cũng là dạng bán ký sinh. Lá có phiến bầu dục đến thon, láng, dày. Chùm ở nách lá, thƣa; cọng và hoa đỏ đậm, một lá hoa nhỏ; cánh hoa 5, rời, dày, không lông; tiểu nhụy gắn trên cánh hoa, bao phấn dài, nhỏ nhƣ chỉ.
Loài này thƣờng phân bố chủ yếu ở bình nguyên [5].
4.2.5. Macrosolen tricolor (Lec) Dans: Đại cán tam sắc.
Loài tầm gửi này thuộc dạng bụi bán ký sinh, thân cành không có lông; vỏ xám, lá có phiến bầu dục, rộng 2-2,5 cm, dài, đầu tròn; cuống dài 2-3 mm. Hoa từng cặp; lá hoa 1,5 mm; đài cao 4 mm; vành hình ống dài 3-4 mm, thuỳ 6, đỏ; tiểu nhụy 6. Phì quả tròn.
Chúng thƣờng đƣợc tìm thấy ở đồng bằng phía Bắc, Nha Trang, Phan Rang. Trong dân gian thƣờng dùng bó nơi gãy xƣơng.
4.2.6. Taxillus chinensis (DC) Dans: Hạt mộc Trung Quốc.
Hình 4.6: A, B: Loài T. chinensis [22], [23]
Là loại cây bán ký sinh, nhánh non có lông vàng vàng rồi không lông, có bì khẩu trắng. Lá mọc đối; phiến bầu dục, lúc non có lông ở gân, gân-phụ 4 cặp; cuống đến 1 cm. Tú tán ở nách lá; cọng hoa ngắn hay dài; hoa dài 1,5-2,5 cm, xanh mặt ngoài, đỏ mặt trong; tai vành; tiểu nhụy 4, gắn ở miệng hoa. Phì quả tròn hay tròn dài, có u nần, cao 6-8 mm; chỉ có 1 hạt.
Thông thƣờng phân bố ở những khu rừng hoặc những nơi có độ cao đến 1.500 m, Bắc Tây Nguyên (Phạm Hoàng Hộ, 1999-2000).
4.3. Khảo sát sự nảy mầm và chu trình phát triển của loài tầm gửi
M.cochinchinensis.
Theo Radomiljac (1998) cho rằng sự nảy mầm của hạt tầm gửi ảnh hƣởng không lớn vì hạt cần phải có chất nhầy để bám dính và cần có nƣớc, oxy, nhiệt độ và ánh sáng cho sự nảy mầm và phát triển thành cây con. Tuy nhiên kích thƣớc của thân cây kí chủ có thể đủ tốt để tác động cho một hạt giống tồn tại và tạo nên một cây con (Reid, 1987, 1989; Sargent, 1995). Cây tầm gửi mọc và phát triển chủ yếu là từ hạt và hình thức lây lan nhanh nhất nhờ vào các loài chim ăn quả. Để khảo sát khả năng nảy mầm của hạt, chúng tôi khảo sát ngẫu nhiên qua sự lây nhiễm hạt tầm gửi lên cây cao su và theo dõi sự phát triển của chúng, kết quả đƣợc ghi nhận nhƣ sau:
Hạt Ngày thứ 3 Ngày thứ 7
Ngày thứ 20 Ngày thứ 30
Hình 4.7. Quá trình nảy mầm và phát triển của M. cochinchinensis
Theo nhƣ kết quả thu đƣợc (Hình 4.7), khi hạt đƣợc đặt vào cây, hạt có thể bám rất chặt nhờ vào lớp chất nhầy bên ngoài vỏ hạt. Sang ngày thứ 3, hạt bắt đầu nảy mầm và phát triển tạo thành vòi hút bám lên cây vào ngày thứ 7. Đến 20 ngày,