E.coli DH5α (λ-pir) có chứa plasmid hỗ trợ pRK600 đƣợc thêm vào hỗn hợp tiếp hợp gồm thể cho E.coli DH5α có chứa plasmid pUT-gfp và thể nhận
Pseudomonas flourescens. Plasmid hỗ trợ pRK600 có Mob+ Tra+. pRK600 còn có một điểm khởi đầu sao chép và điểm khởi đầu chuyển gene (mob) ColE1. ColE1 chỉ cho phép plasmid nhân lên trong E.coli chứ không nhân lên trong vi khuẩn vùng rễ.
Plasmid pRK600 đƣợc sử dụng để vận chuyển những plasmid lớn thông qua oriT, nó không tái bản lên, nhƣng sau một thời gian cho phép biểu hiện gene vận chuyển RK2 (S.Klein) chứa các yếu tố mob+và tra+.
3.2.1.3 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
Bộ mẫu Pseudomonas fluorescens đƣợc giữ trong tủ - 70oC thuộc bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, khoa Nông Học trƣờng đại học Nông Lâm. Các dòng đƣợc chọn đƣợc đem ra rã đông và tăng sinh trên môi trƣờng LB.
Hình 3.1: Cấu trúc plasmid pUT-gfp (Đỗ Thị Ngọc Hân, 2006).
30
Bảng 3.1 Đặc tính và nguồn gốc một số dòng vi khuẩn và plasmid liên quan trong thí nghiệm
Dòng và plasmid Đặc tính Nguồn
E.coli DH5α (λ-pir) Thi pro hsdR recA; chromosomal RP4; tra+; Sm/SpR
Simon và cộng sự, 1983
pRK2013 KmR; ColE1 ori; RK2-mob; RK2-tra
Figurski, D. and Helinski, D.,1979
pRK600 ColE1 replicon with RK2 transfer region, helper plasmid; CmR
Finan và cộng sự, 1986
pUTmini-Tn5 ApR; KmR; delivery plasmid for mini-Tn5
Herrero và cộng sự ,1990
pUC18Not ApR; lacZ; oriColE1; MCS flanked by NotI sites
Herrero và cộng sự ,1990
pGEMEX-2 (P11) ApR; T7 promoter; contains P11
Heim và cộng sự, 1994
pET22B ApR; lacI; f1 ori Novagen, Madison, WI pIC19H ApR ; lacZ Marsh, J.L., Erfle, M. and
Wykes, E.J. (1984) pRL427 ApR; psbA promoter J. Elhai and C.P. Wolk,
unpublished
pUTgfp Delivery plasmid for mini-Tn5::gfp; ApR; KmR; oriT(PR4); oriRK6
Tombolini và cộng sự, 1997
ApR gene kháng Ampicillin KmR gene kháng Kanamycin SmR gene kháng Streptomycin SpR gene kháng Spectinomycin
31