CC, gradient, silica gel
4.4.5Phân tích phần chiết điclometan vỏ thân cây Vông nem (EB2)
THỰC NGHIỆM
4.4.5Phân tích phần chiết điclometan vỏ thân cây Vông nem (EB2)
Hệ dung môi triển khai là điclometan - etyl axetat với các tỷ lệ 49:1, 19:1 và 10:1.
Kết quả phân tích TLC phần chiết n-hexan vỏ thân cây Vông nem (EB2) được trình bày ở Bảng 5, Mục 3.3, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
4.4.6 Phân tích phần chiết etyl axetat gỗ cây Vông nem (EW1)
Hệ dung môi triển khai là điclometan-etyl axetat với tỷ lệ 19:1.
Kết quả phân tích TLC phần chiết n-hexan gỗ cây Vông nem (EW1) được trình bày ở Bảng 6, Mục 3.3, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
4.5 PHÂN TÁCH CÁC PHẦN CHIẾT VÀ PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT
4.5.1 Phân tách phần chiết n-hexan lá cây Vông nem (EL1)
Phần chiết n-hexan (EL1) (15 g) được phân tách bằng sắc ký cột trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm). Rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton với các tỷ lệ 95:5, 10:1, 6:1 và 3:1, thu được 30 phân đoạn, mỗi phân đoạn 100 ml. Cuối cùng dội cột bằng MeOH.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 8 nhóm phân đoạn từ EL1.1 đến EL1.8.
Nhóm phân đoạn EL1.4 (3,2 g) được rửa bằng n-hexan cho chất bột vô định hình màu trắng kí hiệu là M (15 mg).
Nhóm phân đoạn EL1.5 (0,7 g) được rửa bằng n-hexan cho chất bột vô định hình màu trắng kí hiệu là C (0,3 g)
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan (EL1) được trình bày trong Sơ đồ 2, Mục 3.4.1, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
Phần chiết điclometan(EL2) (11 g) được phân tách bằng sắc ký cột trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm). Rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton với tỷ lệ 20:1, 10:1 và 6:1, thu được 33 phân đoạn, mỗi phân đoạn 50 ml. Cuối cùng dội cột bằng MeOH.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 13 nhóm phân đoạn từ EL2.1 đến EL2.13.
Phân đoạn EL2.11 (0,2 g) được phân tách bằng sắc ký cột với hệ dung môi n- hexan-EtOAc 4:1 thu được 34 phân đoạn, mỗi phân đoạn 5 ml. Tiếp tục khảo sát sắc ký lớp mỏng, gộp các phân đoạn giống nhau, thu được 4 nhóm phân đoạn EL2.11.1
đến EL2.11.4 trong đó nhóm phân đoạn EL2.11.3 (phân đoạn 18-23) là chất bột vô
định hình màu trắng kí hiệu là A (20 mg).
Quá trình phân tách phần chiết điclometan (EL2) được trình bày trong Sơ đồ 3, Mục 3.4.2, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
4.5.3 Phân tách phần chiết etyl axetat lá cây Vông nem (EL3)
Phần chiết etyl axetat(EL3) được kết tinh trong EtOAc cho một chất bột màu vàng, chất này được rửa lần lượt với các dung môi n-hexan và điclometan cho chất R
(0,2 g).
Phần chiết etyl axetat (EL3) (5 g) được phân tách bằng sắc ký cột trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm), rửa giải với hệ dung môi n-hexan-etyl axetat-axit fomic với tỷ lệ 20:20:1 cho 18 phân đoạn, mỗi phân đoạn 50 ml. Cuối cùng dội cột bằng MeOH.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 4 nhóm phân đoạn từ EL3.1 đến EL3.4.
Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat (EL3)được trình bày trong Sơ đồ 4, Mục 3.4.3, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
Từ dịch chiết n-hexan (EB1) kết tủa được một chất bột màu trắng. Bột này được rửa với các dung môi n-hexan và điclometan thu được S là hỗn hợp phức tạp của các tecpen glycosid (phổ 1H-NMR).
Phần chiết n-hexan (EB1) (14 g) được phân tách bằng sắc ký cột trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm). Rửa giải với hệ dung môi điclometan-EtOAc với các tỷ lệ là 49:1, 19:1 và 10:1, thu được 25 phân đoạn, mỗi phân đoạn 50 ml. Cuối cùng dội cột bằng EtOAc.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 8 nhóm phân đoạn từ EB1.1 đến EB1.8.
Nhóm phân đoạn EB1.3 (1 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 9:1, thu được 70 phân đoạn, mỗi phân đoạn 5 ml. Sắc ký lớp mỏng cho phép gộp các phân đoạn thành 9 nhóm phân đoạn từ EB1.3.1 đến
EB1.3.9 trong đó nhóm phân đoạn EB1.3.6 (phân đoạn 24-33) là chất bột vô định
hình màu trắng (15 mg) và được định tính là chất M nhận được từ phần chiết n-hexan lá cây Vông nem (phân tích TLC và co-TLC).
Các nhóm phân đoạn EB1.4 và EB1.5 được rửa bằng n-hexan cho tinh thể hình kim màu trắng (100 mg). Phân tích định tính sắc ký lớp mỏng với mẫu chuẩn β- sitosterol chúng tôi cho kết quả chất mới được phân lập này β-sitosterol (C). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phân đoạn EB1.6 (1,5 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 6:1, thu được 65 phân đoạn, mỗi phân đoạn 5 ml. Phân tích sắc ký lớp mỏng đã gộp các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau thành 5 nhóm phân đoạn EB1.6.1 đến EB1.6.5. Tiếp tục sử dụng phương pháp sắc ký cột thường với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 8:1 để phân tách nhóm phân đoạn EB1.6.2 thu được 23 phân đoạn. Từ 2 nhóm phân đoạn 7-17 và 19-23 kết tinh cho 2 loại tinh thể màu xanh nhạt, hình kim và màu trắng, hình nấm. Rửa các tinh thể bằng n-hexan và kết tinh lại trong điclometan thu được 2 chất tinh khiết, kí hiệu là T (130 mg) và X (20 mg).
Nhóm phân đoạn EB1.8 (0,5 g) được rửa bằng n-hexan thu được tinh thể hình kim màu trắng, kí hiệu là H (0,1 g).
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan vỏ thân cây Vông nem (EB1) được trình bày trong Sơ đồ 5, Mục 3.4.4, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
4.5.5 Phân tách phần chiết etyl axetat gỗ cây Vông nem (EW1)
Phần chiết etyl axetat (EW1) (4 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm). Rửa giải với hệ dung môi điclometan- EtOAc với các tỷ lệ là 49:1, 19:1 và 10:1, thu được 11 phân đoạn, mỗi phân đoạn 50ml. Cuối cùng dội cột bằng EtOAc.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 5 nhóm phân đoạn từ EW1.1 đến EW1.5.
Nhóm phân đoạn EW1.2 (0,45 g) được rửa bằng n-hexan cho chất bột vô định hình màu trắng (10 mg) và được định tính là chất M nhận được từ phần chiết n-hexan lá cây Vông nem (phân tích TLC và co-TLC).
Nhóm phân đoạn EW1.3 (0,1 g) được rửa bằng n-hexan cho tinh thể hình kim màu trắng (50 mg). Phân tích định tính sắc ký lớp mỏng với chuẩn β-sitosterol chúng tôi cho kết quả chất mới được phân lập này là β-sitosterol (C).
Nhóm phân đoạn EW1.4 (0,5 g) được rửa bằng n-hexan cho tinh thể hình kim màu trắng (40 mg). Phân tích sắc ký lớp mỏng so sánh (TLC và co-TLC) với chất H nhận được từ phần chiết n-hexan của vỏ thân cây Vông nem (EB1) cho thấy chất mới được phân lập là H.
Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat gỗ cây Vông nem(EW1) được trình bày trong Sơ đồ 6, Mục 3.4.5, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
4.6 HẰNG SỐ VẬT LÝ VÀ DỮ KIỆN PHỔ CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐƯỢC
PHÂN LẬP
Bột vô định hình màu trắng.
Rf = 0,57 (TLC, silica gel, hệ dung môi n-hexan-EtOAc 5:1), hiện màu tím với thuốc hiện 1% vanilin/ H2SO4 đặc .
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz, 29-CH3), 1,18-1,36 (50H, brs, 2H-3→2H-27), 1,55 (2H, quintet, J = 7,0 Hz, 2H-2), 3,63 (2H, dt, J = 5,5 Hz, 6,5 Hz, 2H-1).
Apigenin (A)
Bột vô định hình màu vàng nhạt.
Rf = 0,88 (TLC, silica gel, hệ dung môi n-hexan-EtOAc 10:1), hiện màu tím với thuốc hiện 1% vanilin/ H2SO4 đặc .
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 6,18 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,47 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,76 (1H, s, H-3), 6,92 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-2', H-6'), 7,91 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-3', H-5'), 12,95 (1H, s, 5-OH).
β-Sitosterol (C)
Tinh thể hình kim màu trắng, đ.n.c. 135-136oC.
Rf = 0,3 (TLC, silica gel, hệ dung môi n-hexan-axeton 10:1), hiện màu tím với thuốc hiện 1% vanilin/ H2SO4 đặc .
Vitexin ( R) Bột vô định hình màu vàng. ESI-MS: m/z 433,67 (C21H21O10, [M + H]+). 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 3,25-3,39 (2H, m, H-3", H-4", H-5"), 3,53 (1H, t, J = 5,0 Hz, H-6"a), 3,77 (1H, brd, J = 9,0 Hz, H-6"b), 3,85 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-2"), 4,58 (1H, brs, -OH), 4,69 (1H, d, J = 10,0 Hz, H-1"), 4,96 (2H, brs, 2-OH), 6,28 (1H, s, H-6), 6,77 (1H, s, H-3), 6,89 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3', H-5'), 8,02 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2', H-6'), 13,2 (1H, brs, 5-OH). 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ 61,3 (t, C-6"), 70,5 (d, C-4"), 70,8 (d, C- 2"), 73,4 (d, C-1"), 78,6 (d, C-3"), 81,8 (d, C-5"), 98,1 (d, C-6), 102,4 (d, C-3), 104,0 (s, C-8), 104,6 (s, C-10), 115,8 (d, C-3', C-5'), 121,6 (s, C-1'), 128,9 (d, C-2', C-6'),
155,9 (s, C-9), 160,4 (s, C-5'), 161,1 (s, C-4'), 162,5 (s, C-7), 163,9 (s, C-2), 182,1 (s, C-4).
Soyasapogenol B (H)
Tinh thể hình kim màu trắng, đ.n.c. 257-258oC. ESI-MS: m/z 459,09 (C30H51O3, [M + H]+).
Rf = 0,16 (TLC, silica gel, hệ dung môi n-hexan-EtOAc 4:1), hiện màu tím đậm với thuốc hiện 1% vanilin/ H2SO4 đặc .
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 0,85 (1H, m, H-5), 0,85 (3H, s, 30-CH3), 0,91 (3H, s, 29-CH3), 0,92 (3H, s, 25-CH3), 0,95 (3H, s, 26-CH3), 0,98 (1H, m, H-19a), 1,03 (3H, s, 28-CH3), 1,11 (3H, s, 27-CH3), 1,23 (1H, m, H-1a), 1,23 (3H, s, 23-CH3), 1,25 (1H, m, H-15a), 1,37 (1H, m, H-16a), 1,40 (1H, m, H-6b), 1,40 (1H, m, H-7b), 1,40 (1H, m, H-21a), 1,44 (1H, m, H-21b), 1,48 (1H, m, H-7a), 1,54 (1H, brs, H-9), 1,60 (1H, m, H-19b), 1,64 (1H, m, H-6a), 1,66 (1H, m, H-1b), 1,71 (1H, m, H-16b), 1,75 (1H, m, H-15b), 1,86 (2H, m, H2-11), 2,06 (1H, brd, J = 12,5 Hz, H-18), 3,32 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-24a), 3,39 (1H, dd, J = 12,0 Hz, 4,5 Hz, H-3), 3,41 (1H, dd, J = 8,0 Hz, 3,5 Hz, H-22), 4,19 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-24b), 5,3 (1H, t, J = 3,5 Hz, H- 12). 13C-NMR (125 MHz, CDCl3): δ 16,0 (q, C-25), 16,8 (q, C-26), 18,3 (t, C-6), 19,6 (q, C-30), 22,3 (q, C-23), 23,6 (t, C-11), 24,9 (q, C-27), 25,7 (t, C-15), 27,2 (t, C-2), 28,2 (q, C-28), 28,4 (t, C-16), 30,3 (s, C-20), 32,2 (q, C-29), 33,1 (t, C-7), 36,6 (s, C-10), 37,3 (s, C-17), 38,3 (t, C-1), 39,5 (s, C-8), 41,1 (s, C-14), 42,0 (t, C-21), 42,3 (s, C-4), 44,9 (d, C-18), 46,0 (t, C-19), 47,7 (d, C-9), 55,8 (d, C-5), 64,3 (t, C- 24), 76,2 (d, C-22), 80,3 (d, C-3), 122,3 (d, C-12), 143,7 (s, C-13). Scandenon ( T)
Tinh thể hình kim màu vàng lục, đ. n. c. 162-164oC.
Rf = 0,44 (TLC, silica gel, hệ dung môi n-hexan-axeton 5:1), hiện màu xanh lục với thuốc hiện 1% vanilin/ H2SO4 đặc . (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 1,47 (6H, s) (4''-CH3, 5''-CH3), 1,68 (3H, s, 5'''- CH3), 1,81 (3H, d, 4'''-CH3), 3,39 (2H, d, J = 7,5 Hz, H-1'''), 5,18 (1H, t, J = 7,5 Hz, H-2'''), 5,62 (1H, d, J = 10,0 Hz, H-2''), 5,84 (1H, brs, 4'-OH), 6,73 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-1''), 6,81 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3', H-5'), 7,33 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2', H-6'), 7,88 (1H, s, H-2), 13,0 (1H, s, 5-OH) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3): δ 17,9 (q, 4'''-CH3), 21,3 (t, C-1'''), 25,7 (q, 5'''- CH3), 28,2 (q, 4''-CH3, 5''-CH3), 77,8 (s, C-3''), 105,5 (s, C-6), 105,9 (s, C-10), 107,6 (s, C-8), 115,7 (d, C-3', C-5'), 115,9 (d, C-1''), 121,9 (d, C-2'''), 122,9 (s, C-1'), 123,4 (s, C-3), 128,1 (d, C-2''), 130,3 (d, C-2', C-6'), 131,7 (s, C-3'''), 152,7 (d, C-2), 154,8 (s, C-9), 154,9 (s, C-5), 156,1 (s, C-7), 157,0 (s, C-4'), 181,5 (s, C-4). 6,8-Điprenylgenistein ( X) Bột vô định hình màu trắng.
Rf = 0,37 (TLC, silica gel, hệ dung môi n-hexan-axeton 5:1), hiện màu vàng nhạt với thuốc hiện 1% vanilin/ H2SO4 đặc .
ESI-MS: 407,14 (C25H27O6), [M+H]+). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 1,74 (3H, d, J = 1,0 Hz, 3''-CH3), 1,76 (3H, d, J = 1,0 Hz, 3''-CH3), 1,83 (3H, s, 3'''-CH3), 1,84 (3H, s, 3'''-CH3), 3,47 (4H, brt, J = 6,0 Hz) (H-1'', H-1'''), 5,23 (1H, brt, J = 6,0 Hz), 5,27 (1H, brt, J = 6,0 Hz) (H-2'', H-2'''), 6,85 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3', H-5'), 7,36 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2', H-6'), 7,89 (1H, s, H-3), 13,1 (1H, s, 5-OH). 13C-NMR (125 MHz, CDCl3): δ 17,8 (q), 17,9 (q), (C-4'', C-5''), 21,7 (t, C-2'', C-2'''), 25,7 (q), 25,8 (q) (C-4'', C-5'''), 105,4 (s, C-10), 105,8 (s, C-8), 110,3 (s, C-6), 115,6 (d, C-3', C-5'), 121,3 (d, C-2''), 121,6 (d, C-2'''), 123,21 (s, C-1'), 123,24 (s, C- 3), 130,4 (d, C-2', C-6'), 134,1 (s, C-3''), 135,5 (s, C-3'''), 152,6 (d, C-2), 153,4 (s, C- 9), 155,9 (s, C-5), 157,6 (s, C-7), 159,6 (s, C-4'), 181,4 (s, C-4).
KẾT LUẬN
Luận văn thạc sĩ “Nghiên cứu hóa thực vật cây Vông nem (Erythrina
orientalis (L.) Murr., Fabaceae” thực hiện các nghiên cứu thành phần hóa học của cây
Vông nem và đã thu được các kết quả nghiên cứu chính và có các đóng góp mới sau: 1. Đã xây dựng được quy trình chiết phân lớp các hợp chất hữu cơ theo độ phân cực tăng dần và phân bố các hợp chất hữu cơ từ lá, vỏ thân và gỗ cây Vông nem (Erythrina orientalis (L.) Murr., Fabaceae) vào các phần chiết với các hiệu suất chiết tương ứng so với lượng mẫu nguyên liệu khô là n-hexan (EL1, 2%), điclometan (EL2, 0,57%) và etyl axetat (EL3, 0,25%) (từ lá cây Vông nem); n-hexan (EB1, 1,3%) và etyl axetat (EB2, 2%) (từ vỏ thân cây Vông nem) và etyl axetat (EW1, 1,3%) (từ gỗ cây Vông nem).
2. Đã phân tích sắc kí lớp mỏng (TLC) các phần chiết nhận được để xác định các điều kiện sắc kí định tính các phần chiết và xác định các hệ dung môi thích hợp cho phân tách sắc kí gradient các phần chiết.
3. Đã xây dựng các quy trình phân tách sắc ký cột gradient CC theo độ phân cực và các phương pháp tinh chế (sắc ký và kết tinh) để phân lập được 7 hợp chất thành phần chính từ các phần chiết từ lá (EL1, EL2 và EL3); từ vỏ thân (EB1) và từ gỗ cây Vông nem (EW1).
4. Đã xác định được cấu trúc của các hợp chất được phân lập bằng các phương pháp sắc ký (β-sitosterol, TLC và co-TLC) và các phương pháp phổ (ESI-MS và 1H- NMR, 13C-NMR, DEPT, 1H-1H COSY, HSQC và HMBC) là 1-octacosanol, apigenin, vitexin, soyasapogenol B, scandenon và 6,8-điprenylgenistein.
Ngoài các hợp chất flavon được prenyl hóa đặc trưng cho các loài Erythrina,
scandenon và 6,8-điprenylgenistein, apigenin và dẫn xuất C-glucosid của hợp chất này, vitexin, soyasapogenol B, một aglycon của một số hợp chất glycosid và 1- octacosanol đã lần đầu tiên được phân lập từ chi Erythrina (Fabaceae).