đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1 đối tượng nghiên cứu
đối tượng nghiên cứu là hai giống lợn Duroc và Piétrain dòng ReHal (với các kiểu gen NN và Nn) ựược nuôi dưỡng và khai thác sử dụng thường xuyên tại Xắ nghiệp Chăn nuôi đồng Hiệp Ờ Hải Phòng.
Tổng số gồm 18 con ựực giống, trong ựó giống Piétrain có 14 con( 5 con thế hệ I, 9 con thế hệ II), giống Duroc có 4 con.
Các ựực giống Duroc và Piétrain ựược nuôi dưỡng, chăm sóc theo quy trình của Xắ nghiệp Chăn nuôi đồng Hiệp Ờ Hải Phòng. Thức ăn của ựực giống là thức ăn sử dụng theo ựơn ựặt hàng của Xắ nghiệp với Công ty thức ăn gia súc Cargill có giá trị dinh dưỡng như sau: năng lượng trao ựổi là 3.000 kcal ME/kg thức ăn, protein tối thiểu là 15%, xơ thô là 6%, Catừ 0,8 Ờ 1%, Pmax 0,7%, muối từ 0,2 Ờ 1%, ẩm ựộ 14%, ngoài ra khi cần thiết có thể bổ sung các chất theo công thức sau vào khẩu phần ăn của ựực giống:
Biomin 1kg/tấn
Calci 1kg/tấn
Bột trứng 12kg/tấn Vitamin C 0,8kg/tấn Vitamin E 1,2kg/tấn
+ Nước uống sử dụng vòi uống tự ựộng
+ Khẩu phần ăn cho ựực giống là 2,0 Ờ 2,5 kg/con/ngàỵ
Mỗi ựực giống ựược nuôi ở một ô chuồng có diện tắch 12 m2, có máng ăn, nước uống riêng.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 31
Các ựực giống ựược tiêm vacxin ựịnh kỳ như: vacxin tụ dấu, vacxin lở mồm long móng, vacxin dịch tả lợn, vacxin PRRS và ựịnh kỳ tiêm bổ xung các vitamin quan trọng cho ựực giống. Ngoài ra chuồng trại còn ựược phun thuốc tiêu ựộc khử trùng thường xuyên theo quy trình của xắ nghiệp ựặt rạ
+ Chế ựộ khai thác sử dụng là từ 3 Ờ 5 ngày/lần tuỳ thuộc vào ựộ tuổi lợn
3.2 Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.2.1 Nội dung
Theo dõi và xác ựịnh các chỉ tiêu phẩm chất tinh dịch của hai giống lợn Piétrain và Duroc:
+ Thể tắch tinh dịch: V (ml)
+ Hoạt lực của tinh trùng: A, (0 ≤ A ≤ 1) + Nồng ựộ tinh trùng: C (triệu / ml)
+ Tổng số tinh trùng tiến thẳng: VAC (tỷ/lần) + Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình: K (%)
+ Sức kháng: R (lần) + Giá trị pH của tinh dịch
Thu thập số liệu về số lượng và chất lượng tinh dịch của hai giống từ tháng 01/2009 ựến tháng 10 năm 2010.
3.2.2 Phương pháp kiểm tra các chỉ tiêu số lượng và chất lượng tinh dịch * Thể tắch tinh dịch V (ml): Là lượng tinh xuất ra trong một lần khai
thác.Tinh dịch ựược ựong bằng cốc ựong thủy tinh có vạch chia thể tắch và ựược ựo ngay sau khi lấy tinh ựã bỏ keo phèn.
* Hoạt lực của tinh trùng A (0 ≤ A ≤ 1): Là sức hoạt ựộng của tinh
trùng. Chỉ tiêu này ựược xác ựịnh ngay sau khi khai thác bằng kắnh hiển vi có ựộ phóng ựại 100 Ờ 300 lần.
Cách tiến hành: Lấy một giọt tinh dịch dàn mỏng trên một phiến kắnh khô,
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 32
lượng tinh trùng tiến thẳng tại mỗi vi trường rồi lấy giá trị trung bình. Hoạt lực của tinh trùng ựược ước lượng như sau:
Hoạt lực A 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 % tinh trùng tiến thẳng 95 Ờ 100% 85 Ờ 95% 75 Ờ 85% 65 Ờ 75% 55 Ờ 65% 45 Ờ 55% 35 Ờ 45% 25 Ờ 35% 15 Ờ 25% 1 Ờ 10% 0%
* Nồng ựộ tinh trùng (triệu/ml): được xác ựịnh bằng máy Minitub SMD5 * Tỷ lệ kỳ hình K (%):
Phương pháp tiến hành: Lấy một phiến kắnh khô sạch không có vết xước trên mặt. Ghi số hiệu ựực giống, ngày kiểm tra ở một ựầu phiền kắnh, lấy một giọt tinh dịch phiến lên phiến kắnh. Dùng một phiến kắnh khô, sạch, nhẵn cạnh khác chiều rộng ựặt sao cho trùng khắt với cạnh ngang giọt tinh dịch và nghiêng một góc 450 kéo xuôi một lần nhẹ nhàng cho tinh dịch dàn ựều trên mặt phiến kắnh ựầu tiên.
Cố ựịnh tiêu bản:
+ để tự khô hoặc nhỏ cồn cố ựịnh trong 2 Ờ 3 phút. + Rửa sạch nhẹ nhàng bằng nước sạch và vẩy khô
Nhuộm bằng Xanhmetylen 5% (sạch không có cặn) khoảng 5 Ờ 7 phút. Sau ựó rửa sạch nhẹ nhàng vẩy sạch nước và thấm khô.
Quan sát trên kắnh và ựếm: ựặt tiêu bản lên kắnh hiển vi có ựộ phóng ựại 400 lần, quan sát chung hình thái tinh trùng. đếm tinh tùng có hình thái không bình thường (n1) và tinh trùng bình thường (n2) ở các vi trường khác nhaụ Yêu cầu ựếm hết tinh trùng trong một vi trường rồi mới chuyển sang vi trường khác cho ựủ tổng số tinh trùng n (n = n1 + n2; n từ 300 ựến 500). Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình ựược tắnh là:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 33
n1 K % =
n x 100
Có các dạng kỳ hình sau:
+ Kỳ hình ựầu: ựầu gẫy gập, quá to, ựầu méoẦ
+ Kỳ hình thân: thân không bình thường, có u cục, gắn lỏng lẻo với ựầu và ựuôiẦ
+ Kỳ hình ựuôi: ựuôi số 8, cụt ựuôi hoặc ựuôi không bình thườngẦ
* Sức kháng của tinh trùng (R): Dùng phương pháp 3 lọ ựể kiểm trạ
Phương pháp tiến hành như sau:
Dùng phương pháp 3 lọ ựể kiểm tra: (cả ba lọ ựược hấp sấy cẩn thận ựảm bảo khô sạch).
Lọ 1: rót 10ml NaCl 1% Lọ 2: rót 1ml NaCl 1% Lọ 3: rót 0,5ml NaCl 1%
Sau ựó: Dùng ống hút sạch hút 0,02 ml tinh nguyên cho vào lọ 1 lắc nhẹ trộn ựều, lúc này ựộ pha loãng là 500 lần (10/0,02). Hút 1ml hỗn hợp từ lọ 1 sang lọ 2 lúc này ựộ pha loãng là 1000 lần (500 x 2). Sau ựó dùng ống hút khác hút 0,5 ml hỗn hợp từ lọ 2 sang lọ 3 lúc này ựộ pha loãng là 2000 lần (1000 x 2).
Dùng ựũa thủy tinh lấy một giọt hỗn hợp của lọ 3 ựặt lên phiến kắnh ựể kiểm trạ Nếu thấy tinh trùng còn tiến thẳng thì thêm 0,5ml NaCl 1% vào và tiếp tục kiểm tra cho ựến khi nào không thấy tinh trùng còn tiến thắng nữa thì dừng lạị Ghi lại số lần cho thêm 0,5 ml NaCl 1%.
Công thức tắnh: R = R0 + nR = 2000 + 1000n Trong ựó:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 34
R0 (= 2000): là ựộ pha loãng của dung dịch tại thời ựiểm bắt ựầu
R (= 1000): là mức pha loãng của mỗi lần thêm 0,5 ml NaCl 1% về sau n: là số lần cho thêm 0,5 ml NaCl 1%
* đo ựộ pH: dùng máy ựo pH metter ựể ựọ
* Tổng số tinh trùng tiến thẳng (VAC, tỷ/lần): là tắch của 3 chỉ tiêu
V.ẠC
3.2.3 Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu ựược xử lý bằng Excel, phần mềm SAS 8.0. Các tham số thống kê cần tắnh toán:
- Trung bình: mean
- độ lệch chuẩn của mẫu: (SD) - Giá trị lớn nhất (Max)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 35