Phần 2 Ph‡ơng pháp nghiên cứu

Phơng pháp nghiên cứu của chúng tơi lμ ph†ơng pháp khơng truyền thống với việc triển khai nghiên cứu ứng dụng trên cơ sở áp dụng những tiến bộ kỹ thuật nhằm tạo ra sản phẩm cĩ chất l†ợng ngoại, giá thμnh nội cĩ tính cạnh tranh cao phục vụ cho sản xuất vμ đời sống. Ph†ơng pháp nghiên cứu trên cĩ thể rút ngắn thời gian nghiên cứu xuống rất nhiều lần, mặt khác cĩ tác dụng thúc đẩy quá trình hội nhập vμ gĩp phần vμo việc giảm khoảng cách tụt hậu của n†ớc ta so với các n†ớc trong khu vực.

2.1. Ph‡ơng pháp đánh giá chất l‡ợng khơng khí trong phịng mổ phịng mổ

Để đánh giá chất l†ợng khơng khí trong phịng mổ, phân loại tiêu chuẩn phịng sạch vμ chỉ tiêu kỹ thuật thiết bị chúng tơi lựa chọn các ph†ơng pháp sau:

2.1.1. Phơng pháp đếm vi khuẩn trong khơng khí:

Cĩ rất nhiều ph†ơng pháp nh† hút bụi, đập bụi, lắng bụi. Ph†ơng pháp đơn giản vμ thơng dụng hiện nay lμ ph†ơng pháp để lắng bụi Cốc (Kock).

2.1.1.1. Chuẩn bị mơi trờng vμ kiểm tra:

- Thạch th†ờng để kiểm tra tổng số vi khuẩn †a khí. - Thạch máu để kiểm tra vi khuẩn †a máu

- Thạch Saburơ hay thạch glucoza cĩ pH 4-5 để kiểm tra nấm mốc.

Đổ thạch ra hộp Pêtri (1 hộp độ 12-15mlthạch) để tủ lạnh, mỗi lần kiểm tra khơng khí dùng 3 đĩa thạch. Tr†ớc khi đặt mơi tr†ờng ra ngoμi khơng khí, phải để thạch vμo tủ ấm để cho thạch ấm lại vμ mặt thạch khơ.

Đến nơi định kiểm tra khơng khí, mở các hộp thạch ra (nắp Pêtri úp nghiêng bên cạnh hộp thạch) để trong 5-10 hay 15 phút, tuỳ tình hình dự kiến mức độ ơ nhiễm của khơng khí nơi kiểm tra.

Thí dụ: ở nhμ mổ, bệnh viện thì chỉ cần để hộp thạch mở 15 phút, nếu kiểm tra khơng khí trong chợ, ngoμi đ†ờng phố đơng ng†ời thì chỉ nên để trong 3 phút vμ nếu kiểm tra ở một nhμ ăn cĩ thể để độ 10 phút. Sau thời gian quy định, đậy nắp hộp Pêtri lại, để vμo tủ ấm 380C, các hộp thạch máu, thạch th†ờng, cịn các đĩa thạch Saburơ để kiểm tra nấm mốc thì để vμo tủ ấm 25-280C.

Muốn khơng khí trong bất kỳ một cơ sở nμo, nên để ở nhiều nơi khác nhau, th†ờng nên để 3 đĩa (thạch máu, thạch th†ờng, thạch Saburơ) ở giữa giμn nhμ vμ 4 gĩc nhμ, mỗi gĩc 3 đĩa thạch khác nhau.

Nếu kiểm tra ở đ†ờng phố, ngoμi sân, nên tránh chỗ cĩ ánh nắng, để nhiều đĩa thạch trong nhiều tr†ờng hợp khác nhau, lúc ít ng†ời vμ lúc đơng ng†ời qua lại. Đối với các kho tμng, ít ánh sáng, độ ẩm cao, nên chú ý kiểm tra chất mốc.

Đối với các bệnh viện, nhμ mổ, phịng thí nghiệm, cần chú ý kiêm tra các vi khuẩn.

2.1.1.2. Phơng pháp tính tốn kết quả:

Tr†ớc khi đếm số l†ợng các vi khuẩn lạc vi khuẩn †a khí, vi khuẩn tan máu, nấm mốc, cần chọn các khuẩn lạc điển hình, nhuộm Gram, soi kính vμ ghi vμo sổ kiểm nghiệm, hình thái các loại khuẩn lạc, hình thái vi khuẩn trên phiếu đồ, Gram (-) Gram (+), cách sắp xếp, .v.v..

Theo quy định của V.Omealianski thì tổng số vi khuẩn trên diện tích 100cm2 thạch để trong thời gian 5 phút bằng tổng số vi khuẩn trong 10 lít khơng khí.

Chúng ta cĩ thể quy ra trong 1m3 khơng khí với cơng thức nh† sau: Au 100 u 100

X=

S u K

X= tổng số vi sinh vật trong 1m3 khơng khí A= tổng số vi sinh vật trong đĩa thạch S= Diện tích đĩa Pêtri (tính ra cm2)

K= Thời gian để đĩa Pêtri tính ra với hệ số

5 phút = 1 10 phút = 2 15 phút = 3 100: Diện tích quy †ớc

100: Hệ số nhân để tính ra kết quả trong 1m3 khơng khí (vì mỗi đĩa Pêtri = 10 lít khơng khí).

Thí dụ: Ta đếm trên đĩa thạch với diệ tích 80cm2 thấy cĩ 32 khuẩn lạc vi khuẩn vμ ta đã để đĩa thạch mở ra ngoμi khơng khí trong 10 phút. Vậy tổng số vi sinh vật trong 1 m3 khơng khí sẽ lμ:

= 32u100u100 2000 vi sinh vật. 80u2

Th†ờng thì khơng khí trong các nhμ ăn cơng cộng, các nhμ bếp, các cơ sở bán thực phẩm chúng ta hay gặp các loại B.subtilis, E. coli, Proteus, tụ cầu khơng gây bệnh,...

ở các bệnh viện, chúng ta hay gặp các loại tụ cầu vμng, liên cầu tan máu, trực khuẩn mủ xanh, ở các nơi gần đ†ờng, chúng ta hay gặp các loại nh† Welchia perfrigens CI, sprogenes...

ở các kho, các nhμ lạnh, chúng ta hay gặp các loại nấm nh† Penicillium, aspergillus, Sporotrichum...

2.1.1.3. Cĩ thể sử dụng máy đo vi khuẩn trong khơng khí hút với tốc độ 10l/giây, trên mμng lọc vi khuẩn, sau đĩ đ†ợc đ†a vμo mơi tr†ờng nuơi cấy để tìm 10l/giây, trên mμng lọc vi khuẩn, sau đĩ đ†ợc đ†a vμo mơi tr†ờng nuơi cấy để tìm vi khuẩn gây bệnh.

2.1.2. Phơng pháp xác định hμm lợng bụi trong khơng khí.

- Cĩ rất nhiều ph†ơng pháp nh† : Hút bụi, đập bụi, lắng bụi, đếm số l†ợng hạt bụi khi cho khơng khí đi qua máy đếm bụi.

- ở đây chúng tơi lựa chọn ph†ơng pháp đếm số l†ợng hạt bụi trong khơng khí bằng máy P5 của Hãng Misubisi Japan xác định đ†ợc các hạt bụi cĩ đ†ờng kính < 10Pm.

2.1.2.1. Chuẩn bị mơi trờng vμ kiểm tra.

a/ Đối với phịng tr†ớc khi lắp đặt thiết bị vơ trùng khơng khí.

- Cho phịng ở chế độ hoạt động bình th†ờng khơng cĩ thiết bị sử lý khơng khí.

- Іa máy vμo trong phịng điều chỉnh máy ở chế độ chuẩn vμ đặt chu kỳ cho máy một thời gian xác định, khi máy chạy hết khoảng thời gian nμy máy sẽ dừng đếm. Cho máy hoạt động khi đĩ số hạt bụi cĩ trong khơng khí sẽ nhảy tăng dần trên mμn hình, hết thời gian một chu kỳ số liệu trên mμn hình sẽ lμ số l†ợng hạt bụi cĩ trong mơi tr†ờng trong khoảng thời gian một chu kỳ ứng với thể tích khơng khí đi qua máy.

- Để kiểm tra khơng khí trong phịng mổ, chúng tơi để ở nhiều nơi khác nhau, ở đây để: ở giữa gian nhμ 1 điểm vμ 4 gĩc nhμ 4 điểm các điểm đ†ợc cho ở độ cao 80 cm cách sμn nhμ. Với mỗi điểm đ†ợc đo 03 lần sau đĩ lấy số trung bình cộng của 03 lần đĩ.

- Đĩng kín cửa phịng vμ cho thiết bị hoạt động tr†ớc khi tiến hμnh đo bụi 20 phút.

- Sau khoảng thời gian ổn định trên cho máy vμo đo. Cách thức vμ vị trí đo t†ơng tự nh† đối với phịng tr†ớc khi lắp đặt thiết bị vơ trùng khơng khí.

c/ Ph†ơng pháp tính tốn kết quả.

Với máy P5 số l†ợng hạt bụi cĩ trong 1 m3 khơng khí đ†ợc tính theo cơng thức:

X = (A u1000uK) / S

Trong đĩ X = Tổng số hạt bụi cĩ trong 1 m3 khơng khí. A = Tổng số hạt bụi đếm đ†ợc trong 1 chu kỳ. K = Chu kỳ của máy, ở đây đặt chu kỳ lμ 1 phút. S = Thể tích khơng khí đi qua máy trong một chu kỳ.

2.1.2.2. Một số tiêu chuẩn vi sinh vật trong khơng khí của phịng mổ sạch.

Hiện nay chúng ta ch†a cĩ tiêu chuẩn qui định về số l†ợng vi sinh vật trong khơng khí áp dụng cho các phịng mổ. Để tham khảo, chúng tơi giới thiệu ở đây một số tμi liệu quốc tế.

Preobrajenski cho rằng khơng khí sạch thì số vi sinh vật khơng quá 1000vsv trong 1 m3.

Ginoscova chuyên trách về vi khuẩn học trong khơng khí, sau nhiều năm nghiên cứu cho lμ:

a) Khơng khí tốt: Trong 1 đĩa Petri để trong 10 phút cĩ 5 khuẩn lạc vi sinh vật. b) Khơng khí vừa: Trong 1 đĩa Petri để trong 10 phút cĩ 10-15 khuẩn lạc vi sinh vật.

c) Khơng khí xấu: Trong 1 đĩa Petri để trong 10 phút cĩ trên 15 khuẩn lạc vi sinh vật.

Vμ d†ới đây lμ một bảng tổng kết của Romanovici.

Bảng 6 –Tiêu chuẩn chất lợng khơng khí trong sản xuất thực phẩm của Romanovici

Cơ sở sản xuất thực phẩm Tổng số

Vi khuẩn Mốc nấm

Khơng khí rất tốt D†ới 20 khuẩn lạc 0 Khơng khí tốt 20-50 khuẩn lạc 2

Khơng khí khá 50-70 khuẩn lạc 5

Khơng khí xấu Trên 70 khuẩn lạc >5

lúc tr†ớc mổ lμ 500 vi khuẩn/m3 khơng khí, vμ sau mổ lμ 1000 vi khuẩn/m3, khơng cĩ các vi khuẩn gây bệnh vệ sinh thì đạt tiêu chuẩn sạch vi sinh. Các vi khuẩn gây bệnh vệ sinh khơng khí lμ những vi khuẩn trong máu đ†ợc xác định lμ Saureus, Stropygenes, P.aeruginosa vμ các nấm mốc.

Theo tiêu chuẩn của Mỹ qui định phịng sạch cấp độ 100,1000,10.000. Phịng sạch cấp độ 100 cĩ nghĩa lμ trong mơi tr†ờng khơng khí chỉ cĩ ít hơn 3u103 hạt bụi cĩ đ†ờng kính lớn hơn 0,5Pm trong 1 m3 khơng khí, hay lớp 1000 cĩ nghĩa lμ trong khơng gian lμm việc sạch chỉ cĩ ít hơn 3u104 hạt bụi cĩ đ†ờng kính lớn hơn 0,5 Pm, hay lớp 10.000 chỉ cĩ ít hơn 3u105 hạt bụi cĩ đ†ờng kính lớn hơn 0,5 Pm. ở Nhật ng†ời ta qui định theo tiêu chuẩn JISB – 9922-89 của phịng tinh sạch lμ mức 3 vμ 6 t†ơng đ†ơng với mức 100 vμ 1000 của Mỹ. Kỹ thuật tạo phịng sạch ở Nhật phát hμnh tiêu chuẩn JISB – 9922-89, cịn tiêu chuẩn đ†ợc áp dụng rộng rãi nhất ở Mỹ lμ tiêu chuẩn 209D của Liên bang vμ tiêu chuẩn NHB5340-2 của NASA (Cơ quan hμng khơng vũ trụ Hoa Kỳ). Đối với bệnh viện, phịng giải phẫu tiệt trùng cĩ cấp độ từ 100 tới 1000 t†ơng đ†ơng với phịng sạch loại I Tiêu chuẩn GMP ASEAN, phịng giải phẫu tổng quát cấp độ từ 1000 tới 10.000 t†ơng đ†ơng với phịng sạch loại II-III Tiêu chuẩn GMP ASEAN.

Đối chiếu với các tiêu chuẩn Nhật – Mỹ vμ Liên Xơ cũ, chúng ta cĩ thể chọn tiêu chuẩn sạch loại III theo tiêu chuẩn GMP ASEAN lμm tiêu chuẩn phịng mổ sạch bệnh viện. Cĩ nghĩa lμ tiêu chuẩn phịng mổ của Liên Xơ hoμn toμn hợp với những tiêu chuẩn mμ chúng tơi khuyến cáo vμ đang thực hiện các bệnh viện của ta.

2.1.3. Các phơng pháp kiểm tra đánh giá chất lợng thiết bị khử trùng khơng khí phịng mổ. khí phịng mổ.

2.1.3.1. Kiểm tra tốc độ giĩ bằng cách dùng máy đo giĩ loại hiện số độ chính xác 0,1m/s hoặc nhỏ hơn, loại cơ học, hay loại đầu dị để ở miệng giĩ thổi ra, chính xác 0,1m/s hoặc nhỏ hơn, loại cơ học, hay loại đầu dị để ở miệng giĩ thổi ra, đo ít nhất tại 5 điểm đ†ợc chia đều trên thiết diện ngang của miệng giĩ. Số liệu trung bình lμ kết quả số đo tốc độ giĩ qua phin lọc của thiết bị.

2.1.3.2. Đo độ ồn thiết bị: Độ ồn thiết bị đ†ợc đánh giá theo TCVN5964:1995 vμ bằng máy đo độ ồn tổng với giải tần từ 80 đến 800Hz. TCVN5964:1995 vμ bằng máy đo độ ồn tổng với giải tần từ 80 đến 800Hz.

-Thiết bị đ†ợc đặt trong buồng cĩ độ ồn phịng nhỏ hơn tiêu chuẩn cần đo.