Để nhận biết được hiệu quả của phương pháp Agro-infiltration ra sao thì biểu hiện gen Gus trong vector pPNT289_Gus biểu hiện song song với gen 27aa_LTB. Gen Gus mã hoá enzyme β-glucuronidase có khả năng phân huỷ cơ chất glucuronidase thành sản phẩm tạo màu xanh lam dễ nhận biết. Sau hai ngày, thu mẫu lá được tiêm A. tumefaciens mang gen Gus được nhuộm bởi X- Gluc đã xuất hiện những đốm màu xanh lam đặc trưng, chứng tỏ sự có mặt của gen Gus trong lá thuốc lá (hình 3.13).
Hình 3.13. Mẫu lá tiêm gen Gus được nhuộm bởi X-Gluc
Kết quả biểu hiện tạm thời của gen Gus trên đã thể hiện phương pháp
Agro-inflitration trong lại hiệu quả tốt trong việc biểu hiện tạm thời gen. Do vậy sự biểu hiện tạm thời đoạn 27aa_LTB cũng được tiến hành bằng một phương pháp hiệu quả nhất định. Trong thời gian tới chúng tôi sẽ tiếp tục kiểm tra sự biểu hiện tạm thời của peptit kháng nguyên 27aa và LTB trong cây thuốc lá này.
KẾT LUẬN
Từ những kết quả thu được trong quá trình nghiên cứu như trên chúng tôi rút ra được kết luận như sau:
1. Nhân được đoạn 27aa từ virut VNNB, đoạn LTB từ plasmid chứa LTB và ghép nối 2 đoạn
2. Thiết kế vector pET21_27aa_LTB biểu hiện đoạn peptit kháng nguyên 27 aa và LTB trong E.coli
3. Thiết kế vector pCB_27aa_LTB biểu hiện đoạn peptit kháng nguyên 27 aa và LTB trong thực vật
4. Biểu hiện protein tái tổ hợp trong E.coli
KIẾN NGHỊ
1. Tiếp tục biểu hiện protein tái tổ hợp trong tế bào thực vật 2. Tinh sạch protein tái tổ hợp biểu hiện trong E.coli và thực vật 3. Thử khả năng gây miễn dịch của protein tái tổ hợp