CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của thành phần pha động
Việc lựa chọn được hệ pha động phù hợp cĩ ý nghĩa quan trọng trong phương pháp phân tích bằng thiết bị sắc ký lỏng cao áp. Pha động thích hợp sẽ giúp nâng cao hiệu quả phân tích cũng như tăng khả năng phân tách chất và độ thu hồi mẫu. Thành phần của pha động cĩ thể ảnh hưởng mạnh đến thời gian lưu và diện tích peak của chất cần phân tích.
thời gian lưu cũng khơng được quá lâu vì kéo dài thời gian phân tích sẽ làm giảm độ thu hồi mẫu bởi tương tác của mẫu với pha tĩnh mạnh hơn. Bên cạnh đĩ mất quá nhiều thời gian phân tích mẫu, tốn pha động.
Hình 3.3.Đồ thị thời gian lưu-diện tích peak của Carbaryl khi thay đổi tỷ lệ ACN:H2O Từ đồ thị trong hình trên ta thấy khi ta tăng lượng Acetonitrile trong thành phần pha động thì diện tích peak thu được tăng lên đồng thời thời gian lưu giảm xuống. Điều này cĩ thể giải thích một cách dễ dàng do Acetonitrile là dung mơi rửa cột nên khi tăng lượng Acetonitrile lên thì tốc độ cũng như hàm lượng Carbaryl được rửa giải ra khỏi cột tăng lên.
Ta thấy ở hệ pha động 40%Acetonitrile:60%Nước thời gian lưu tăng lên rất cao (11.374 ± 0,038) phút so với khi sử dụng pha động với tỷ lệ 55/45.
Ở các hệ pha động 70/30, 85/15 diện tích peak cĩ tăng lên nhưng khơng đáng kể, bên cạnh đĩ kết quả đo ra cĩ độ lặp lại khơng cao.
Ở hệ pha động cĩ tỷ lệ Acetonitrile là 55% ta thấy thời gian lưu khơng quá ngắn cũng khơng quá dài (6.291 ± 0.084 phút), độ lặp lại cao, hình dạng peak đối xứng. Vì vậy khi phân tích Carbaryl ta chọn hệ pha động với tỷ lệ 55%Acetonitrile-45%nước để cho kết quả phân tích tốt nhất.
Hình 3.4.Đồ thị thời gian lưu-diện tích peak của Dimethoate khi thay đổi tỷ lệ ACN:H2O
Đối với Dimethoate khi sử dụng hệ pha động 70% acetonitrile 30% nước, diện tích peak tăng lên đáng kể so với khi dùng hệ pha động 55% acetonitrile-45% nước tuy nhiên kết quả đo được cĩ độ lặp lại khơng cao.
Ở hệ pha động 55%Acetonitrile-45%nước thời gian lưu của Dimethoate khơng quá ngắn (3,973 ± 0,064) phút, tách ra so với peak của Carbaryl và của các thành phần khác trong rau, diện tích peak thu được tương đối cao. Bên cạnh đĩ khi sử dụng cùng hệ pha động 55%Acetonitrile-45%Nước ta cĩ thể tiến hành phân tích đồâng thời cả hai chất, giúp tiết kiệm thời gian thay pha động cũng như giúp tiết kiệm lượng dung mơi tiêu hao. Đồng thời cĩ cơ sở so sánh với số liệu thực nghiệm trong các luận văn đã thực hiện trước đây.
Do đĩ để thuận tiện ta sử dụng cùng hệ pha động 55%Acetonitrile-45%nước cho cả Dimethoate và Carbaryl. Đây là hệ pha động cĩ thành phần acetonitrile tương đối, khơng quá cao nhưng vẫn cĩ thể rửa giải tốt các chất ra khỏi cột phân tích. Đường nền ổn định, peak thu được đều hẹp, đối xứng. Thời gian lưu của các chất ở chế độ pha động này khơng quá dài, diện tích peak thu được cĩ độ lặp lại chấp nhận được (độ lệch chuẩn tương đối khơng quá 5%).
Tuy nhiên nếu cĩ điều kiện ta nên phân tích Dimethoate với pha động 70/30 để tăng độ thu hồi mẫu.
3.1.3. Xây dựng đường chuẩn xác định hàm lượng Carbaryl, Dimethoate trong dung dịch dịch
Đường chuẩn được xây dựng tại 5 nồng độ mẫu chuẩn 1, 2, 5, 10, 20ppm.
Với chế độ chạy sắc ký và bước sĩng hoạt động của đầu dị UV như đã lựa chọn, sắc ký đồ của các mẫu dung dịch chuẩn Carbaryl trong nước cĩ dạng như trên đồ thị hình 3.5. Sắc ký đồ của các mẫu này cho một peak duy nhất, tương đối hẹp, thời gian lưu (đỉnh peak) ổn định ở giá trị (6.288 ± 0.032) phút. Đường nền ổn định, ít nhiễu.
Diện tích peak thu được cũng cĩ độ lặp lại chấp nhận được, độ lệch chuẩn tương đối dao động dưới 5,0%.
(a) (b) (c)
Hình 3.5. Sắc ký đồ chạy đường chuẩn Carbaryl
(a) Nồng độ 1ppm (b) Nồng độ 5ppm (c) Nồng độ 10ppm
Xây dựng đồ thị diện tích peak trung bình thu được từ sắc ký đồ theo nồng độ Carbaryl trong các mẫu chuẩn, sử dụng phương pháp hồi quy tuyến tính xác định phương trình đường chuẩn. Đường chuẩn thu được cĩ hệ số tương quan R= 0.996> 0.95, là chấp nhận được.
Hình 3.6. Đường chuẩn phân tích của Carbaryl trong nước với thiết bị HPLC
Hệ số gĩc thu được sai lệch khơng nhiều so với hệ số gĩc thu được trong luận văn khố trước (hệ số gĩc ở luận văn khố trước là185947), tuy cĩ nhỏ hơn một chút song sai lệch khơng quá 1%, vẫn nằm trong vùng sai số thực nghiệm. Mặt khác qua một năm sử dụng nĩi chung hiệu năng của cột sắc ký cĩ thể bị ảnh hưởng. [7]
Đường chuẩn xác định hàm lượng Dimethoate trong dung dịch:
Thời gian lưu và diện tích peak thu được khi phân tích các mẫu chuẩn Dimethoate nằm trong ngưỡng chấp nhận được (độ lệch chuẩn tương đối khơng quá 5%). Hình dạng peak đối xứng.
Thời gian lưu này ngắn hơn hẳn so với thời gian lưu của peak thu được từ các mẫu dung dịch chuẩn Carbary, thể hiện độ phân cực của Dimethoate mạnh hơn của Carbaryl. Kết quả này cĩ thể giải thích được khi so sánh cơng thức cấu tạo của Dimethoate với Carbaryl.
Hình dạng peak và thời gian lưu cho thấy cĩ khả năng tách được Dimethoate khỏi Carbaryl với chế độ chạy sắc ký đã lựa chọn (cột sắc ký, thành phần pha động, tốc độ dịng, thể tích mẫu bơm vào hệ thống). Thời gian lưu ngắn cũng gĩp phần rút ngắn thời gian phân tích mẫu, giảm chi phí dung mơi và hư hao thiết bị.
(a) (b) (c)
Hình 3.7. Sắc kí đồ chạy đường chuẩn Dimethoate
(a) Nồng độ 1ppm (b) Nồng độ 5ppm (c) Nồng độ 20ppm
Xây dựng đồ thị diện tích peak trung bình thu được từ các sắc ký đồ theo nồng độ Dimethoate trong các mẫu chuẩn, sử dụng phương pháp hồi quy tuyến tính xác định phương trình đường chuẩn. Đường chuẩn đi qua gốc toạ độ, cĩ độ tin cậy cao, hệ số tương quan R= 0.997> 0.95, là chấp nhận được.
Hình 3.8. Đường chuẩn phân tích của Dimethoate trong hệ 55%Acetonitrile-45%nước với thiết bị HPLC
Cùng quy luật như đối với Carbaryl, hệ số gĩc thu được khi phân tích các mẫu chuẩn Dimethoate cũng nhỏ hơn hệ số gĩc thu được trong luận văn khố trước (hệ số gĩc ở luận văn khố trước là 17370).[8]