3.4.1.1 Phương pháp giám định thành phần nấm bệnh, nấm Alternaria
padwickii trên mẫu lúa giống và tỷ lệ nảy mầm của hạt lúa.
Phương pháp giấy thấm – Theo phương pháp của ISTA (International Seed Testing Association, 1996).
- Lấy 200 hạt/mẫu, chia thành 8 phần, mỗi phần 25 hạt.
- Chuẩn bị đĩa petri và giấy thấm:
+ Đĩa petri đã được hấp khử trùng, 8 đĩa/mẫu.
+ Giấy thấm (Blotter paper) trong hộp đã khử trùng.
- Lấy 3 tờ giấy thấm, nhúng vào nước sao cho toàn bộ giấy thấm ướt đều, sau đó đặt vào hộp petri (3 tờ/hộp).
- Cách đặt hạt: 25 hạt/đĩa, đặt thành 3 vòng, vòng ngoài 15 hạt, vòng giữa 9 hạt, 1 hạt ở trung tâm của đĩa, khoảng cách giữa các vòng cách đều nhau. Sau khi đặt xong phải ghi mã số mẫu hoặc tên giống, ngày đặt và ngày kiểm tra lên trên mặt đĩa, đem toàn bộ số đĩa hạt đã đặt để trong phòng nuôi cấy (incubation room), điều kiện phòng nuối cây: nhiệt độ 20oC, ánh sáng đèn huỳnh quang hoặc đèn gần cực tím (near untraviolet), thời gian chiếu sáng 12 giờ tối xen kẽ 12 giờ sáng. Sau 7 ngày nuôi cấy, đem kiểm tra kỹ từng hạt dưới kính hiển vi soi nổi, khi
phát hiện thấy nấm ở trên hạt tiến hành dùng kim khêu nấm, đặt lên lam kính để kiểm tra dưới kính hiển vi quang học.
- Chỉ tiêu theo dõi: tổng số hạt bị nhiễm nấm Alternaria padwickii trên tổng số hạt kiểm tra, tỷ lệ nảy mầm.
3.4.1.2 Phương pháp nghiên cứu và quan sát, mô tả đặc điểm hình thái của nấm Alternaria padwickii:
- Chuẩn bị môi trường PDA:
Thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Khoai tây: 200 gram
+ Glucose: 20 gram + Agar : 20 gram + Nước cất: 1000 ml
- Môi trường PGA:
Thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường) + Khoai tây: 200 gram
+ Glucose: 20 gram + Agar: 20 gram + Nước cất: 1000 ml
- Môi trường PCA (cho 1 lít môi trường) + Khoai tây: 20 gram
+ Cà rốt:20 gram + Agar: 20 gram + Nước cất: 1000 ml
- Môi trường WA (cho 1 lít môi trường) + Agar: 150 gram
+ Nước cất: 1000 ml
- Từ các hạt bị nhiễm nấm Alternaria padwickii, tách lấy bào tử nấm đem cấy trên môi trường PDA đã chuẩn bị, phân lập nấm thuần, sau đó
cấy lại trên môi trường PDA, quan sát sự phát triển của nấm trên môi trường PDA, dùng kim khêu sợi nấm và bào tử nấm dưới kính hiển vi quang học, mô tả đặc điểm hình thái của nấm.
- Cấy nấm Alternaria padwickii trên các môi trường trên và theo dõi sự phát triển của tản nấm sau khi cây 1,2,3,4,5 ngày bằng cách đo đường kính của tản nấm trên các môi trường, từ đó xác định môi trường thích hợp cho nấm sinh trưởng và phát triển. Đơn vị đo (mm).