Phần chiết n-hexan AP1 (10 g) được hoà tan trong CH2Cl2 sau đú được hấp phụ trờn silica gel (Merck, cỡ hạt 63-200 àm). Khuấy đều cho đến khi silica gel hấp phụ đều hết dung dịch mẫu cho đến khi khụ đều.
Cho silica gel (Merck, cỡ hạt 63-200 àm) vào n-hexan và khuấy đều cho đến khi hết bọt khớ. Sau đú đổ silica gel ở dạng bột nhóo vào cột sắc ký (Φ = 3 cm i.d.) đến chiều cao 30 cm. Cho dung mụi n-hexan đi qua cột nhiều lần để nộn đều cột đến khi lớp silica gel hoàn toàn ổn định.
Đưa mẫu đó tẩm trờn silica gel lờn cột CC. Rửa giải cột sắc ký gradient bằng hệ dung mụi n-hexan-axeton 19:1, 9:1, 6:1, 3:1 và 1:1 (v/v). Cỏc phõn đoạn được thu theo 50 ml/phõn đoạn. Kiểm tra quỏ trỡnh rửa giải sắc ký bằng TLC, kết quả thu được 24 nhúm phõn đoạn được ký hiệu từ AP1.1 đến
AP1.24.
Cỏc nhúm phõn đoạn AP1.11 (150 mg) và AP1.12 (670 mg) được rửa nhiều lần bằng n-hexan cho chất AP1.11 (101 mg) và AP1.12 (203 mg) dưới dạng bột vụ định hỡnh màu trắng.
Nhúm phõn đoạn AP1.15 (44 mg) được rửa bằng n-hexan cho chất
AP1.15 (25 mg) dưới dạng tinh thể hỡnh kim màu trắng nhạt.
Nhúm phõn đoạn AP1.18 (1,1 g) được phõn tỏch sắc ký CC (2 cm i.d. x 20 cm) trờn silica gel (Merck, cỡ hạt 40-63 àm) với hệ dung mụi gradient n- hexan-axeton 6:1 đến 1:1 cho chất AP1.18.3 (321 mg) dưới dạng tinh thể hỡnh kim màu vàng nhạt.
Nhúm phõn đoạn AP1.20 (1,13 g) được cho chạy sắc ký cột CC (2 cm i.d. x 25 cm) trờn silica gel (Merck, cỡ hạt 63-100 àm), hệ dung mụi gradient
n-hexan-axeton 7:1 và 5:1 cho năm nhúm phõn đoạn chớnh sau cỏc phõn tớch
TLC từ AP1.20.1 đến AP1.20.5. Cỏc nhúm phõn đoạn AP1.20.3 và AP1.20.4
được gộp lại và phõn tỏch CC (2 cm i.d. x 20 cm) với gradient n-hexan-axeton 7:1, 5:1 và 3:1 (silica gel Merck cỡ hạt 40-63 àm). Kết quả thu được chất
AP1.20.3.2 (356 mg) dưới dạng tinh thể hỡnh kim màu vàng ỏnh.
Nhúm phõn đoạn AP1.22 (190 mg) được rửa bằng axeton cho chất
AP1.22 (23 mg)dưới dạng bột vụ định hỡnh màu trắng.