- Dựa trên các kết quả ựạt ựược chúng tôi bước ựầu ựề xuất quy trình sản xuất GlcNAc sử dụng hai enzyme tái tổ hợp endochitinase và βhexosaminidasẹ
PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3.4. Xác ựịnh pH tối ưu và ựộ bền pH của β-hexosaminidase
4.3.4.1. pH tối ưu của β-hexosaminidase
Ảnh hưởng của pH ựến hoạt tắnh của β-hexosaminidase ựược thể hiện trong hình 4.11.
Hình 4.11: Ảnh hưởng của pH ựến hoạt tắnh β-hexosaminidase
Qua hình 4.11 nhận thấy hoạt tắnh của enzyme β-hexosaminidase tăng dần từ pH 4 ựến pH 6 sau ựó giảm dần khi tiếp tục tăng pH. Ở pH 6 hoạt tắnh của β- hexosaminidase ựạt 22,98 U/ml tương ựương với 100%. Tuy nhiên ở các giá trị liền kề là pH 5,5 hoạt tắnh của enzyme giảm không ựáng kể (còn khoảng 93%), như vậy có thể kết luận rằng khoảng pH tối thắch cho hoạt ựộng của β-hexosaminidase là từ pH 5,5 ựến pH 6. Nghiên cứu của Nguyễn và cộng sự (2012) pH tối thắch của β- hexosaminidase của chủng Lactococcus lactis ssp. lactis IL1403 là pH 5,5 [32].
Như vậy, có thể sử dụng khoảng pH 5,5 ựến pH 6 cho việc ứng dụng β- hexosaminidase thủy phân chitooligosaccharide thu GlcNAc.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 46
4.3.4.2. độ bền pH của β-hexosaminidase
Tiến hành khảo sát ựộ bền hoạt tắnh của β-hexosaminidase ở một số ựiểm pH. Kết quả xác ựịnh ựộ bền pH ựược thể hiện trong hình 4.12.
Hình 4.12. đồ thị biểu diễn ựộ bền pH của β-hexosaminidase
Qua hình 4.12 nhận thấy ở pH 5, pH 7 ựộ bền enzyme thấp, thời gian bán hủy của β-hexosaminidase chỉ khoảng 7 giờ; với pH 6,5 chu kì bán hủy của enzyme cao hơn pH 5, cụ thể là khoảng 9 giờ, chu kì bán hủy của enzyme ở pH 5,5, pH 6 là gần tương ựương nhau và chu kì bán hủy dài hơn các pH còn lại, thời gian bán hủy là khoảng 16 giờ.
Nghiên cứu của Nguyễn và cộng sự (2012) thời gian bán hủy β- hexosaminidase tái tổ hợp trong ựệm citrate phosphat 50mM, pH 6 từ chủng
Lactococcus lactis ssp. lactis IL1403 ở pH 6 là 55 giờ. Như vậy, thời gian bán hủy của β-hexosaminidase trong nghiên cứu của chúng tôi ngắn so với nghiên cứu của Nguyễn và cộng sự (2012), có thể do enzyme này không thực sự bền trong ựệm NaH2PO4 50 mM, pH6.
Qua kết quả trên chúng tôi nhận thấy rằng β-hexosaminidase bền ở ựệm NaH2PO4 các giá trị pH từ 5,5 ựến pH 6. đây cũng là giá trị pH tối thắch cho hoạt ựộng của β-hexosaminidasẹ Vì thế, có thể sử dụng khoảng pH này cho việc ứng dụng β-hexosaminidase trong sản xuất GlcNAc.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 47