TTC
Chỳng tụi sử dụng phƣơng phỏp nhuộm TTC để đỏnh giỏ nhanh sức sống của tế bào mụ sẹo sau khi xử lý thổi khụ. Những tế bào sống sót bắt màu với thuốc nhuộm, tế bào chết khụng bắt màu, khi rửa mẫu với cồn 900
ở 600C trong 1 đến 2 giờ màu đỏ sẽ thụi ra hết dung dịch. Giỏ trị mật độ quang thu đƣợc đo ở bƣớc sóng 485nm phản ỏnh sức sống của tế bào mụ sẹo. Kết quả đƣợc trỡnh bày ở bảng 3.20 và hỡnh 3.18.
Bảng 3.20. Kiểm tra sức sống của cỏc giống lỳa cạn bằng phƣơng phỏp nhuộm TTC
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 Giỏ trị OD 485nm NN KT KM KĐ SR giống
4 giờ thổi khụ Đối chứng
Hỡnh 3.18. Đỏnh giỏ khả năng chịu mất nƣớc của mụ sẹo cỏc giống lỳa cạn
Giống Giỏ trị OD 485nm Tỷ lệ so với đối chứng
4 giờ thổi khụ Đối chứng
NN 0,25 ± 0,09 0,13 ± 0,01 1,92
KT 0,21 ± 0,02 0,15 ± 0,01 1,40
KM 0,14 ± 0,07 0,09 ± 0,01 0,16
KĐ 0,19 ± 0,04 0,14 ± 0,01 1,36
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Kết quả ở bảng 3.20 và hỡnh 3.18 Cho thấy cỏc giống đều có giỏ trị mật độ quang cao hơn so với đối chứng. Đặc biệt giống NN có giỏ trị mật độ quang vƣợt xa so với đối chứng 1,92 lần. So sỏnh với kết quả về tỷ lệ mụ sẹo sống sót ở mục 3.4.1. Thấy những giống có tỷ lệ mụ sẹo sống sót cao thƣờng có giỏ trị mật độ quang cao hơn so với đối chứng. Có thể là do sau khi xử lý thổi khụ lƣợng nƣớc trong tế bào giảm mạnh cỏc tế bào chƣa kịp phục hồi nờn khả năng hấp thụ mật độ quang kộm. Kết quả phƣơng phỏp nhuộm TTC phự hợp với kết quả của phƣơng phỏp xỏc định tỷ lệ sống sót của mụ sẹo. Kết quả mà chỳng tụi nghiờn cứu về sức sống của tế bào mụ sẹo phự hợp với kết quả nghiờn cứu của Đinh Thị Phũng (2001) [40], Nguyễn Thị Tõm (2003) [54], Bựi Thị Thu Thủy (2006) [60], Nguyễn Thị Thu Hoài (2005) [17]. Điều này cho phộp sử dụng phƣơng phỏp nhuộm TTC để xỏc định sớm khả năng chịu hạn của cỏc giống lỳa trong trƣờng hợp cần thiết.
Hỡnh 3.19. Khả năng phục hồi và tỏi sinh sau thổi khụ của cỏc giống lỳa cạn ở mức độ mụ sẹo
1; 3. Mụ sẹo phục hồi sau 3 tuần và tỏi sinh cõy sau 6 tuần của Giống NN. 2; 4. Mụ sẹo phục hồi sau 3 tuần và tỏi sinh cõy sau 6 tuần của Giống KM.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Qua nghiờn cứu khả năng chịu hạn của cỏc giống lỳa ở mức độ mụ sẹo có thể rỳt ra một số kết luận:
(1) Cả 5 giống lỳa đều có khả năng tạo mụ sẹo từ hạt và tỏi sinh cõy đỏp ứng cho nghiờn cứu tiếp liờn quan đến nuụi cấy in vitro.
(2) Mụ sẹo của 5 giống lỳa đều bị mất nƣớc nhanh khi xử lý thổi khụ ở cỏc ngƣỡng thời gian 2, 4 giờ. Từ 6 đến 8 giờ tốc độ mất nƣớc của mụ giảm dần. Sự sai khỏc về mức độ mất nƣớc giữa cỏc giống là khụng đỏng kể. Sau 8 giờ thổi khụ giống SR có độ mất nƣớc cao nhất (94,27% so với khối lƣợng tƣơi), giống NN có độ mất nƣớc thấp nhất (88,12% so với khối lƣợng tƣơi).
(3) Khả năng chịu mất nƣớc và tốc độ sinh trƣởng của mụ sẹo sau khi xử lý thổi khụ của cỏc giống nghiờn cứu có sự khỏc nhau rõ rệt, cao nhất là giống NN thấp thất là giống SR.
(4) Mụ sẹo của cỏc giống nghiờn cứu sau khi xử lý thổi khụ đều cũn giữ đƣợc khả năng tỏi sinh. Chọn lọc xử lý thổi khụ mụ sẹo của 5 giống lỳa cạn: NN, KT, KM, KĐ, SR đó thu đƣợc 130 dũng mụ có khả năng chịu hạn và 570 dũng cõy xanh có thể sử dụng cho cụng tỏc chọn dũng tiếp theo.
(5) Khả năng chịu hạn ở mức độ mụ sẹo của cỏc giống lỳa có sự khỏc nhau, thứ tự từ cao xuống thấp nhƣ sau: NN>KT>KĐ>KM>SR.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Kấ́T LUẬN VÀ Đấ̀ NGHỊ
Kờ́t luọ̃n
1. Trong 5 giụ́ng lúa cạn thu thọ̃p ở tỉnh Hà Giang có 2 giụ́ng thuụ̣c loài phụ Indica
và 3 giụ́ng thuụ̣c loài phụ Japonica, cỏc giống đều là lỳa tẻ. Cỏc giống lỳa biểu hiợ̀n đa hình vờ̀ đặc điờ̉m hình thái , khụ́i lƣợng hạt. Trờn phƣơng diợ̀n cảm quan , hạt gạo cỏc giống đều phự hợp với thị hiếu ngƣời tiờu dựng và xuất khẩu.
2. Chṍt lƣợng gạo giụ́ng KT có chṍt lƣợng gạo là tụ́t nhṍt tiờ́p đờ́n là giụ́ng KĐ , SR, NN và kém nhṍt là giụ́ng KM . Hàm lƣợng axit amin khụng thay thế tr ong protein của cỏc giống lỳa nghiờn cứu (trƣ̀ methyonin và lizin) cao hơn tiờu chuõ̉n của FAO.
3. Hàm lƣợng đƣờng tan và hoạt độ của enzym α-amylase, hàm lƣợng protein và hoạt độ của enzym protease ở giai đoạn nảy mõ̀m của các gi ống lỳa có mối tƣơng quan thuọ̃n chặt chẽ , liờn quan đờ́n khả năng chịu hạn của tƣ̀ng giụ́ng . Khả năng chịu hạn của cỏc giống lỳa nghiờn cứu ở giai đoạn nảy mầm đƣợc sắp xếp theo thƣ́ tƣ̣ tƣ̀ cao đờ́n thṍp nhƣ sau: NN>KM >KT>KĐ>SR.
4. Sƣ̣ biờ́n đụ̣ng hàm lƣợng prolin và đƣờng tan ở giai đoạn mạ có tƣơng quan th uận với khả năng chịu hạn của các giụ́ng lúa . Giụ́ng NN có chỉ số chịu hạn tƣơng đối cao nhṍt (19689,12) và thấp nhất là giống SR (14963,28). Khả năng chịu hạn của cỏc giống lỳa ở giai đoạn mạ đƣợc sắp xếp nhƣ sau: NN>KM >KT>KĐ>SR.
5. Dƣ̣a trờn phõn tích khoảng cách và hợ̀ sụ́ khác nhau có thờ̉ chia 5 giụ́ng lúa nghiờn cƣ́u 3 mƣ́c chịu hạn khác nhau . Mƣ́c chịu hạn tụ́t nhṍt gụ̀m giụ́ng NN tiếp theo là giống chịu hạn trung bỡnh gồm KM và KT, mƣ́c chịu hạn k ộm nhṍt gụ̀m giụ́ng KĐ và SR.
6. Cả 5 giống lỳa đều có khả năng tạo mụ sẹo từ hạt và tỏi sinh thành cõy từ mụ sẹo đỏp ứng cho cỏc nghiờn cứu tiếp theo liờn quan đến nuụi cấy in vitro. Cỏc giống có tỷ lệ tạo mụ sẹo và tỏi sinh cõy khỏc nhau, tỷ lệ tỏi sinh cõy cao nhất là giống NN tiếp theo là cỏc giống KM, KT, KĐ và thấp nhất là giống SR.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
7. Mụ sẹo của 5 giống lỳa đều bị mất nƣớc nhanh khi xử lý thổi khụ. Sự sai khỏc về mức độ mất nƣớc giữa cỏc giống là khụng đỏng kể. Sau 8 giờ thổi khụ lƣợng nƣớc mất đi cao nhất là giống SR (94,24%) khối lƣợng tƣơi.
8. Tốc độ sinh trƣởng của mụ sau xử lý thổi khụ có sự khỏc biệt nhau khỏ rõ rệt. Giống NN có tỷ lệ sống sót cao hơn so với cỏc giống cũn lại.
9. Đa số những mụ sống sót sau thổi khụ đều có khả năng tỏi sinh thành cõy hoàn chỉnh. Chọn lọc thổi khụ mụ sẹo của 5 giống lỳa đó thu đƣợc 130 dũng mụ có khả năng chịu hạn và 570 dũng cõy xanh có thể sử dụng làm vật liệu khởi đầu cho việc chọn lọc cỏc dũng chịu hạn.
Đờ̀ nghị
1. Giống NN có khả năng chịu hạn , tạo mụ sẹo và tỏi sinh cõy tụ́t nhṍt trong sụ́ các giụ́ng lúa nghiờn cƣ́u , nờn có thờ̉ tuyờ̉n chọn giụ́ng này làm vọ̃t liợ̀u khởi đầu cho cụng tác tạo dũng và chọn giụ́ng lỳa chịu hạn.
2. Cõ̀n tiờ́p tục nghiờn cƣ́u các chỉ thị phõn tƣ̉ liờn quan đờ́n khả năng chịu hạn của 5 giụ́ng lúa nghiờn cứu.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Lờ Trõ̀n Bình , Lờ Thị Muụ̣i (1998), Phõn lọ̃p gen và chọn dòng chụ́n g chịu ngoại cảnh bṍt lợi ở cõy lúa, , Nxb Đại học Quụ́c Gia, Hà Nội.
2 Phạm Thị Trõn Chõu, Nguyễn Thị Hiền, Phựng Gia Tƣờng (1997), Thực hành hoỏ sinh học, Nxb Giỏo dục.
3 Phạm Thị Trõn Chõu, Trõ̀n Thị Áng (2004), Húa Sinh học, Nxb Giáo dục
4 Nguyễn Hữu C-ờng, Nguyễn Thị Kim Anh, Đinh Thị Phòng, Lê Thị Muội,
Lê Trần Bình (2003), “Mối t-ơng quan giữa hàm l-ợng prolin và tính chống chịu ở cây lúa”, Tạp chí Công nghệ Sinh học 1(1), tr. 85-95
5 Lờ Xuõn Đắc (1998), Sử dụng cụng nghợ̀ tờ́ bào thực vọ̃t cải tiờ́n mụ̣t sụ́ đặc điờ̉m nụng học của giụ́ng C 71 và nếp TK 90, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học , Viợ̀n Cụng nghợ̀ Sinh học, Hà Nội.
6 Bựi Huy Đỏp (1999), Mụ̣t sụ́ vṍn đờ̀ vờ̀ cõy lúa, NXB Nụng nghiợ̀p.
7 Nguyờ̃n Lam Điờ̀n (2003), Tớnh chống chịu ở thực vọ̃t , Chuyờn đờ̀ sinh học
trung tõm khoa học tƣ̣ nhiờn và Cụng nghợ̀ Quụ́c gia , Viợ̀n Cụng nghợ̀ Sinh học.
8 Nguyờ̃n Lam Điờ̀n (2005), Nghiờn cứu mụ̣t sụ́ đặc điờ̉m s inh học phõn tử , ảnh hưởng của hạn và phõn khoáng đụ́i với cõy cỏ ngọt (Stevia rebaudianna Bertoni) trụ̀ng tại Thái Nguyờn, Luọ̃n án tiờ́n sĩ sinh học , Viợ̀n Cụng nghợ̀ Sinh học , Hà Nụ̣i.
9 Nguyờ̃n Thị Kim Dung (2003), Nghiờn cứu hiện tượng đa hình protein và mụ̣t sụ́ chỉ tiờu hóa sinh của các giụ́ng lạc , Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học , Đại học Thái Nguyờn.
10 Nguyễn Lõn Dũng (1979), Mụ̣t số phương phỏp nghiờn cứu vi sinh vọ̃t, Tập 3, Nxb Giỏo dục, Hà Nội, Tr 116 – 120.
11 Đụ̃ Thị Dƣơng (2001), Nghiờn cứu mụ̣t sụ́ đặc điờ̉m hình thái , sinh lý và hóa sinh của 5 giụ́ng lúa cạn địa phương , Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học , Đại học Thái Nguyờn.
12 Trõ̀n Kim Đụ̀ng , Nguyờ̃n Quang Phụ̉ , Lờ Thị Hoa (1991), Giỏo trình sinh lý cõy trụ̀ng, Nxb Đại học và giáo dục chuyờn nghiợ̀p.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
13 Nguyờ̃n Thu Hà , Chu Hoàng Mọ̃u , Nguyờ̃n Thị Hải Yờ́n , Đụ̃ Thị Dƣơng
(2003), “Đa dạng sinh học của cõy lúa cạn ở miờ̀n núi phía bắc Vi ệt Nam”, Bỏo cỏo khoa học hụ̣i nghị toàn quụ́c lõ̀n thƣ́ 2 tại Huế ngày 25-26/7/2003, Nhƣ̃ng vṍn đờ̀ nghiờn cƣ́u cơ bản trong khoa học sƣ̣ sụ́ng , Nxb khoa học và kỹ thuọ̃t , Hà Nụ̣i, 86-89.
14 Nguyễn Thu Hà, Chu Hoàng Mậu (2003), “Đa dạng sinh học cõy lúa cạn ở miền núi phớa Bắc Việt Nam”, Nhƣ̃ng vấn đề nghiờn cứu khoa học cơ bản trong sự sống, Nxb Khoa học và kĩ thuật, Hà Nội.
15 Nguyờ̃n Thị Hiờ̀n, Vũ Thụy Thƣ (2004), Húa sinh học, Nxb Đại học Sƣ Phạm.
16 Vũ Văn Hiờ̉n, Nguyờ̃n Văn Hoan (1999), Kỹ thuọ̃t trụ̀ng lúa, Nxb Giáo dục
17 Nguyờ̃n Thị Thu Hoài (2005), Nghiờn cứu khả năng chịu hạn và mụ́i tương quan di truyờ̀n của mụ̣t sụ́ giụ́ng lúa cạn địa phương, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học , Đại học Thái Nguyờn.
18 Nguyễn Đức Hoàng (2008), Đặc điểm di truyền, khả năng chịu hạn và sự thay đổi Genome của mụ̣t số dũng lúa cú nguụ̀n gốc từ mụ sẹo chịu mṍt nước, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học, Đại học Thái Nguyờn.
19 Nguyễn Hữu Hồng (1993). Luọ̃n ỏn thạc sỹ nụng nghiệp, Nagazaki – Nhật Bản
20 Nguyờ̃n Nhƣ Khanh , Phựng Gia Tƣờng , Phan Quụ́c Hùng , Đụ̃ Hải Lan
(2003), “ So sánh mụ̣t sụ́ chỉ tiờu phõ̉m chṍt hạt gạo 5 giụ́ng lúa nương dưới ảnh hưởng của điờ̀u kiợ̀n n ương rãy và của KCl xử lý hạt trước khi gieo ” Nhƣ̃ng vṍn đề nghiờn cứu cơ bản trong khoa học sự sống, Nxb khoa học và kỹ thuọ̃t, Hà Nội: 336-339.
21 Nguyờ̃n Thị Lõ̃m , Hoàng Văn Phụ , Dƣơng Văn Sản , Nguyờ̃n Đƣ́c Thạch
(2003), Giỏo trình cõy lương thực, Nxb Nụng nghiợ̀p, Hà Nội.
22 Nguyờ̃n Thị Lõ̃m (1998), Giỏo trình cõy lúa, Nxb Nụng nghiợ̀p, Hà Nội.
23 Nguyờ̃n Thị Hoa Lan (2005), Nghiờn cứu thành phõ̀n hóa sinh hạt và tính đa dạng di truyền của cỏc giụ́ng lạc, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học , Đại học Thái Nguyờn.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
của mụ̣t số giống lạc, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học, Đại học Thái Nguyờn.
25 Trõ̀n Thị P hƣơng Liờn (1999), Nghiờn cứu đặc tính hóa sinh và sinh học phõn tử của mụ̣t sụ́ giụ́ng đọ̃u tương có khả năng chịu nóng , chịu hạn ở Việt Nam ,
Luọ̃n án tiờ́n sĩ Sinh học, Viợ̀n Cụng nghợ̀ Sinh học, Hà Nội.
26 Trõ̀n Thị Phƣơng Liờn , Nụng Văn Hải (2005), “Protein dƣ̣ trƣ̃ và protease hạt cõy trụ̀ng”, Tạp chớ Cụng nghệ Sinh học 3(4): 397- 414.
27 Trõ̀n Thị Phƣơng Liờn , Nguyờ̃n Huy Hoàng , Đinh Duy Kháng , Nụng Văn Hải, Lờ Thị Muụ̣i (1998), „Phõn lọ̃p gen Chaperonin ở gi ống đậu tƣơng chịu nóng M103” Tạp chớ Khoa học và Cụng nghệ, 36(5): 8-14.
28 Vũ Văn Liết (1994), “ Đánh giá nguụ̀n gen nhọ̃p nụ̣i tƣ̀ vƣờn quụ́c tờ́ trong điờ̀u kiợ̀n miờ̀n Bắc Viợ̀t Nam” , Thụng báo khoa học , chuyờn đờ̀ Sinh học - Nụng nghiợ̀p, Nxb vụ khoa học Cụng nghợ̀, Bụ̣ Giáo dục và Đào tạo.
29 Nguyễn Hoàng Lụ̣c (1992), Chọn dũng chịu muối NaCl và chịu mṍt nước ở thuụ́c lá (Nicotiana Tabacum.L), Luọ̃n án tiờ́n sĩ Sinh học , Viợ̀n Cụng nghợ̀ Sinh học Hà Nội.
30 Đinh Văn Lƣ̃ (1998), Giỏo trình cõy lúa, Nxb Nụng nghiợ̀p, Hà Nội.
31 Chu Văn Mẫn (2001), Ứng dụng tin học trong sinh học, Nxb Đại học Khoa học Tự nhiờn, Hà Nội.
32 Chu Hoàng Mọ̃u (2005), Cơ sở và phương pháp sinh học phõn tử , Nxb Giỏo dục
33 Chu Hoàng Mậu (2004), “Nghiờn cứu về protein và thành phần axit amin trong protein hạt của một số giống lúa cạn địa phƣơng” , Những vṍn đề nghiờn cứu cơ bản trong khoa học sự sống - Định hướng nụng lõm ngư nghiệp miền núi, Thỏi Nguyờn: 517 – 520
34 Chu Hoàng Mậu (2000), Nghiờn cứu hiện tượng đa hình protein và mụ̣t số chỉ tiờu sinh hoỏ nhằm gúp phần chọn lọc cỏc dũng đọ̃u tương và đọ̃u xanh đụ̣t biến, Đề tại khoa học cụng nghệ cấp Bộ, Bộ Giỏo dục và Đào tạo.
35 Chu Hoàng Mậu (2000), Nghiờn cứu đặc điờ̉m sinh hoỏ và sinh học phõn tử của mụ̣t sụ́ giống lúa cạn địa phương gúp phần chọn lọc giống lúa thớch hợp cho
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
vựng Đụng Bắc Việt Nam, Đề tại nghiờn cứu khoa học cấp Bộ, Bộ Giỏo dục và Đào tạo (B2001 – 0314).
36 Nguyễn Văn Mựi (2001), Thực hành hoỏ sinh học, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội.
37 Phạm Thị Thu Nga (2004), Nghiờn cứu đặc điểm hình thỏi, thành phần hoỏ sinh hạt và đa dạng di truyền của mụ̣t số giống lúa cạn trụ̀ng phổ biến ở hai tỉnh Bắc Kạn và Cao Bằng, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học, Đại học Thái Nguyờn.
38 Nguyờ̃n Thị Thu Ngà (2007), Đánh giá khả năng chịu hạn và sự đa dạng di truyờ̀n của các giụ́ng lạc L 12, L14, L15, L25, V79, Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học , Đại học Thái Nguyờn
39 Niờn Giám thụ́ng kờ Viợ̀t Nam năm 2008, Nxb Thụ́ng kờ, Hà Nội.
40 Đinh Thị Phòng (2001), Nghiờn cứu khả năng chịu hạn và chọn dòng chịu hạn ở lúa bằng cụng nghệ tế bào thực vọ̃t , Luọ̃n án tiờ́n sĩ sinh học , Viợ̀n Cụng nghợ̀ Sinh học, Hà Nụ̣i.
41 Đinh Thị Phòng , Nguyờ̃n Hoàng Tỉnh, Chu Hoàng Hà, Lờ Trõ̀n Bình, Lờ Thị Muụ̣i (1999) “Đánh giá mụ̣t sụ́ đặc điờ̉m hóa sinh của các dòng lúa tái sinh tƣ̀ mụ sẹo mất nƣớc”, Tạp chớ Khoa học và Cụng nghệ ,37 (2): 29-35.
42 Đinh Thị Phòng, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1995), Sử dụng công nghệ tế bào
thực vật để chọn các dòng lúa chịu hạn, Kỷ yếu viện công nghệ sinh học,tr.27-38.
43 Hoàng Mai Phƣơng, Chu Hoàng Mọ̃u (2001), “ Nghiờn cƣ́u thành phõ̀n điợ̀n di protein dƣ̣ trƣ̃ hạt của một số giống lỳa cạn và cỏc dũng lạc đột biến” , Tạp chớ Khoa học và Cụng nghợ̀, Đại học Thái Nguyờn 1(1).
44 Mai Văn Quyền (1985), Những kiến thức cơ bản của khoa học trụ̀ng lúa , Nxb Nụng nghiệp, Hà Nội.
45 Nguyờ̃n Thị Sõm (2002), Đánh giá đặc điờ̉m hình thái , húa sinh hạt và phản ứng kiểu gen của cỏc giống lạc trụ̀ng tại Bắc Giang , Luọ̃n văn thạc sĩ Sinh học, Đại học Thái Nguyờn.
46 Hà Tiến Sỹ (2007), Đánh giá khả năng chịu hạn và nhõn gen P5CS của mụ̣t sụ́