lập đợc bằng phơng pháp thờng quy
Từ các giống E. coli phân lập đã đợc thuần khiết, tiến hành giám định một số đặc tính sinh vật hóa học cơ bản nh đặc tính hình thái, tính chất nuôi cấy và các phản ứng lên men đờng.
- Kiểm tra hình thái học: từ giống phân lập giữ trên thạch máu cấy chuyển ra nớc thịt hoặc thạch nghiêng, làm tiêu bản nhuộm Gram để kiểm tra.
- Kiểm tra khả năng di động: cấy chích sâu vi khuẩn vào thạch mềm hoặc xem di động của vi khuẩn trực tiếp trên kính hiển vi bằng tiêu bản giọt treo.
- Kiểm tra tính chất mọc bằng cách nuôi cấy trên các môi trờng: nớc thịt, thạch th- ờng, thạch máu, các môi trờng đặc biệt nh: Istrati, Mac Conkey, Brilliant green agar. Quan sát tính chất mọc, hình thái, kích thớc và màu sắc khuẩn lạc.
- Kiểm tra các đặc tính lên men đờng của E. coli:
+ Trên môi trờng thạch nghiêng KIA (Kligler Iron Agar)
Kỹ thuật cấy: Dùng que cấy vô trùng chấm vào khuẩn lạc định kiểm tra, ria một đờng ở phần thạch nghiêng và cắm que cấy thẳng xuống phần thẳng đứng nhng
không chạm vào đáy ống, bồi dỡng ở 370C trong 24 giờ. Đọc kết quả (chậm nhất là 48 giờ).
Môi trờng KIA cho phép đọc các tính chất:
Khả năng lên men đờng lactose: Vi khuẩn có khả năng lên men đờng lactose làm cho phần thạch nghiêng chuyển sang màu vàng, ngợc lại thì giữ nguyên màu.
Khả năng lên men đờng glucose: Vi khuẩn có khả năng lên men đờng glucose thì chuyển phần thạch đứng từ màu hồng sang màu vàng rõ, vi khuẩn không lên men đờng glucose thì giữ nguyên màu. Nếu sinh hơi thì phần thạch đứng bị nứt hoặc tạo thành bọt khí bên trong thạch đứng, có thể đẩy toàn bộ phần thạch lên cao, ở dới là hơi.
+ Khả năng lên men các loại đờng khác
Trong môi trờng dinh dỡng Nutrient Broth đã bổ sung thêm 1,5 ml xanh Bromothymol 1,5% trong cồn và các loại dung dịch đờng cần kiểm tra, cấy vi khuẩn vào, bồi dỡng trong tủ ấm 370C/24 giờ đọc kết quả. Phản ứng dơng tính khi môi trờng chuyển màu hồng, âm tính khi môi trờng vẫn giữ nguyên màu sắc ban đầu.
+ Phản ứng sinh Indol
Trong môi trờng dinh dỡng Nutrient Broth, cấy E. coli cần kiểm tra, bồi dỡng ở điều kiện nhiệt độ 43 - 470C/24 giờ, nhỏ thuốc thử Kowacs vào. Phản ứng dơng tính khi một vòng tròn đỏ xuất hiện ở trên cùng ống môi trờng nuôi cấy. Phản ứng âm tính khi vòng tròn đỏ không xuất hiện.