Phƣơng pháp nuôi cấy in vitro

Một phần của tài liệu đánh giá một số dòng lúa chọn lọc thế hệ r3, r4 có nguồn gốc từ mô sẹo chịu mất nước .pdf (Trang 31 - 32)

2.2.3.1. Tạo mô sẹo từ hạt lúa

+ Khử trùng hạt: Hạt lúa chín đƣợc bóc bỏ vỏ trấu, lắc nhẹ trong cồn 70% 1phút, 25 phút trong nƣớc gia ven 60%, rửa sạch bằng nƣớc cất vô trùng 3 - 5 lần, thấm khô hạt trên đĩa petri có trải giấy lọc vô trùng.

+ Tạo mô sẹo: Hạt gạo đã khử trùng đƣợc cấy vào bình tam giác chứa môi trƣờng MS cơ bản [34], bổ sung 2,4-D 2mg/l, saccharose 3%, agar 0,9%, pH=5,8. Mỗi bình cấy khoảng 18 hạt, nuôi một tuần trong tối, 2 tuần dƣới ánh sáng đèn trong phòng nuôi cấy với cƣờng độ 2000 lux, thời gian chiếu sáng 10/24 giờ, nhiệt độ phòng nuôi 250

C ± 10C. Đánh giá tỷ lệ tạo mô sẹo sau 3 tuần nuôi cấy theo công thức:

Số hạt tạo mô sẹo

% tạo mô sẹo = x 100% (2.3) Tổng số hạt

2.2.3.2. Phương pháp xử lý thổi khô mô sẹo

Mô sẹo sau 3 tuần nuôi đƣợc cắt thành những miếng mô nhỏ có kích thƣớc 3mm x 3mm. Đặt những miếng mô sẹo lên đĩa petri có lót giấy lọc vô trùng và thổi khô mô sẹo bằng luồng không khí vô trùng của buồng cấy ở các ngƣỡng thời gian khác nhau. Xác định độ mất nƣớc của mô sẹo sau 2, 4, 6, 8 giờ xử lý.Độ mất nƣớc của mô sau khi xử lý thổi khô đƣợc tính theo công thức:

% 100 %    f d f L W W W W (2.4)

Trong đó Wf: Trọng lƣợng mô tƣơi (mg) WL: Độ mất nƣớc (%)

Wd:Trọng lƣợng mô sau thổi khô (mg)

2.2.3.3. Tái sinh cây

Mô sẹo sau xử lý mất nƣớc đƣợc cấy lên môi trƣờng tái sinh. Mật độ cấy 18 mô/bình. Nuôi dƣới ánh sáng đèn trong phòng nuôi cấy với cƣờng độ 2000 lux, thời

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

gian chiếu sáng 10/24 giờ, nhiệt độ phòng nuôi 250

C ± 10C. Khả năng sống sót của mô sẹo đƣợc đánh giá sau 4 tuần nuôi phục hồi.

% 100 (%)   t sv N N Sv (2.5) Trong đó: Sv: Tỷ lệ mô sống sót (%) Nsv: Số mô sống sót Nt:Tổng số mô xử lý

Khả năng tái sinh cây đƣợc đánh giá sau 6 tuần nuôi theo công thức:

(%)  100%

Nsv Nr

Rc (2.6)

Trong đó: Rc: Khả năng tái sinh (%)

Nsv: Số mô sống sót

Nr: Số mô tái sinh cây

Một phần của tài liệu đánh giá một số dòng lúa chọn lọc thế hệ r3, r4 có nguồn gốc từ mô sẹo chịu mất nước .pdf (Trang 31 - 32)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(80 trang)