Sản phẩm thu được sau khi ghép nối được biến nạp vào tế bào khả biến
E.coli DH5 sau đó được cấy trải trên môi trường LB đặc có bổ sung
ampicillin 100mg/l, X-gal 0.004% và IPTG 100M. Hiệu suất ở bước biến nạp phụ thuộc vào hai yếu tố:
Thứ nhất là sản phẩm PCR phải tinh sạch và đặc hiệu.
Thứ hai là tế bào khả biến phải được chuẩn bị tốt.
Hình 3.6: Kết quả biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến
Kết quả hình 3.6 cho thấy đã thu được một số lượng lớn dòng các khuẩn lạc xanh trắng trên môi trường LB. Các tế bào có mang plasmid có chứa gen kháng kháng sinh có thể phát triển được trên môi trường chọn lọc này và phát
triển thành các khuẩn lạc. Những khuẩn lạc xanh xuất hiện là do vector không có đoạn gen ngoại lai nào chèn vào mà do vector tự đóng vòng. Do vector có mang operon lacZ nên khi operon này hoạt động bình thường và có cảm ứng IPTG sẽ tổng hợp enzyme -galactosidase, enzyme này sẽ chuyển hóa cơ chất X-gal thành hợp chất có màu xanh. Còn những khuẩn lạc trắng có thể là do nhận được plasmid mang operon không hoạt động. Do đó, khi có chất cảm ứng IPTG thì gen không tổng hợp enzyme -galactosidase và không xảy ra sự chuyển hóa X-gal. Lac operon mất hoạt động là do đoạn DNA ngoại lai xen vào giữa promoter của operon lacZ. Do đó, lac-promoter không thể điều khiển gen cấu trúc phiên mã, nên không thể dịch mã thành enzyme được. Tuy nhiên không phải tất cả các khuẩn lạc trắng đều mang plasmid tái tổ hợp có chứa đoạn promoter CAD1 và CAD2 có thể là chứa đoạn gen là sản phẩm phụ của phản ứng PCR, sự đột biến trên promoter lac hay sự đứt gãy base thymine đầu 3’ của vector cũng có thể làm cho khuẩn lạc mang màu trắng. Vì vậy các khuẩn lạc trắng mang plasmid tái tổ hợp được chọn lọc bằng phương pháp colony-PCR để phục vụ cho bước tiếp theo.