● Xác định hàm lƣợng lipit
Dựa vào tính chất hoà tan của dung môi hữu cơ để chiết lipit, dung môi hữu cơ được sử dụng là petroleum ether.
Cách làm: Mẫu được sấy khô đến khối lượng không đổi. Bóc vỏ, bỏ phôi mầm, nghiền mịn. Cân 0,05g mẫu cho vào tube. Sau đó cho 1,5 ml petroleum ether, lắc nhẹ 10 phút, để qua đêm ở 40
C, li tâm 15 phút với tốc độ 12000 vòng/phút ở 40
C, bỏ dịch, lặp lại 3 lần như vậy. Sấy khô mẫu còn lại ở tube ở 700
C đến khối lượng không đổi. Hàm lượng lipit được tính bằng hiệu của khối lượng mẫu trước và sau khi chiết theo công thức sau: Hàm lượng lipit (%) = A B A x 100%
Trong đó : A : Khối lượng mẫu trước khi chiết
B : Khối lượng mẫu sau khi chiết
● Xác định hàm lƣợng protein
Xác định hàm lượng protein được thực hiện theo phương pháp Lowry [2]. Mẫu sau khi loại lipit được sử dụng chiết protein. Chiết protein bằng đệm photphat citrat (pH = 10), trong 24 giờ ở 40C, ly tâm 12000 vòng/phút trong 20 phút, thu lấy dịch. Dịch thu được của mỗi lần chiết định mức lên 10ml, tiến hành lặp lại 3 lần và đo hấp thụ quang phổ trên máy UV - Visible ở bước sóng 750nm với thuốc thử folin. Hàm lượng protein được tính theo công thức như mô tả trong tài liệu của Phạm Thị Trân Châu và cs [2]. Hàm lượng protein được máy tính toán theo đồ thị chuẩn và đồ thị chuẩn được xây dựng bằng albumin huyết thanh bò.
Hàm lượng protein được tính theo công thức: X=
m axHSPL
x 100%
Trong đó: X : Hàm lượng protein (% khối lượng khô)
a : Nồng độ thu được khi đo trên máy (mg/ml) HSPL : Hệ số pha loãng
m : Khối lượng mẫu (mg)