TTCCACCCCCTTCCCAAGTACTATAGTCACCGTCATTGGTATGTTTTGGACTCCTTCTCTCTAGCTATCGACATTCCAAG TCCGCCATTCTAACATGCTCTTCCCACAGACGCTCCCGGTCACCGTGATTTCATCAAGAACATGATCACTGGTACCTCCC AGGCTGACTGCGCTATCCTGATTATCGCTGCCGGTACTGGTGAGTTCGAGGCTGGTCTCCAAGGATGGCAAAGGCGAGGG GGATTGTCAATGGAGTACATACGGTGTCGGGAGGTCTGTGCGGAGAGATGTAAAAGGGG
PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận
Phục hồi các dòng nấm Trichoderma và từ đó tiến hành nhân sinh khối ly trích các dòng nấm qua các bƣớc khác nhau và sử dụng các loại hoá chất cũng nhƣ tác nhân cơ học để nghiền mịn sợi nấm thu DNA tổng số.
Tiến hành khuếch đại vùng gene rDNA-ITS và Tef với 2 cặp primer: ITS1- ITS2 thu đƣợc sản phẩm khuếch đại có kích thƣớc 670 bp (căn cứ trên thang ladder), tƣơng tự nhƣ trên đối với cặp primer: ElongR, ElongF thu đƣợc sản phẩm khuếch đại có kích thƣớc 260 bp (căn cứ trên thang ladder) trên 4 dòng
Trichoderma của Việt Nam và 1 dòng đối chứng của nƣớc ngoài Trichoderma harzianum.
Tiến hành đọc trình tự vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 và vùng Tef của dòng
Trichoderma harzianum (T4)
So sánh trình tự DNA vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 giữa dòng Trichoderma nghiên cứu với cơ sở dữ liệu NCBI và dựa vào phần mềm CLUSTALX chƣa khẳng định T4 là T.harzianum hay T. asperellum .
Qua đó cho thấy, định danh bằng hình thái không chính xác, trình tự DNA vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 đối chiếu trên cơ sở dữ liệu NBCI cũng chƣa thật sự đáng tin cậy khi mà chỉ dựa trên mỗi trình tự vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 (vùng bảo tồn của sinh vật). Do đó phải phân tích thêm trình tự DNA vùng Tef (vùng có chức năng chuyên biệt và đặc trƣng cho từng loài).
So sánh kết quả đọc trình tự các vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 kết hợp vùng Tef
Định danh T4: Trichoderma asperellum.
Kích thƣớc của vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 là 54 5bp.
Kích thƣớc vùng Tef là 223bp.
Trình tự nucleoted ở vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 của dòng Trichoderma asperellum (T4) của Việt Nam so với dòng Trichoderma asperellum có mức độ tƣơng đồng là 98%.
Trình tự nucleoted ở vùng Tef1fw – Tef2rev của dòng Trichoderma asperellum (T4) của Việt Nam so với dòng Trichoderma asperellum có mức độ tƣơng đồng 98%.