L ỜI MỞ ĐẦU VÀ NHIỆ MV ỤC ỦA ĐỀ TÀI
3.3.3 thiết bị phân tích HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
Hình 3.4: thiết bị HPLC (agilent techonology 1200 series)
Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một phương pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn ,hay một chất mang đã được biến đổi bằng liên kết hoá học với các nhóm chức hữu cơ .Quá trình sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ,phân bố ,trao đổi Ion hay phân loại theo kích cỡ ( Rây phân tử ).
Ta sử dụng HPLC để phân tích hàm lượng caffeine trong mẫu chiết. Trước tiên ta lập đường chuẩn caffeine.
Cách thức lập đường chuẩn: chuẩn caffeine, cân 75mg pha vào trong bình định mức 100 ml (C5) dung môi pha mẫu là nước và etanol( tỉ lệ 1:4), sau đó pha loãng dãy nồng độ gốc này: lấy 5 ml pha vào 100ml (C1), lấy 10ml pha trong 100ml (C2), lấy 20ml/100ml (C3), lấy 30ml/100ml (C4).
Tiêm mẫu 1,5ml của C1, C2, C3, C4, C5 vào vial đem đi phân tích và vẽ đồ thị tương ứng với diện tích.
56
Phương pháp đo mẫu chuẩn caffeine: ta chọn hóa chất sử dụng trong pha động là methanol và nước.
Methanol là loại methanol chạy HPLC của Đức, nước thì phải là nước cất 2 lần. Điều kiện đo là: - Trích 5 μl dung dịch cần đo. - Tốc độ dòng 1 ml/min. - Nhiệt độ 400 C - Bước sóng 272 – 360 nm. - Nước 70%, methanol 30%. - Thời gian đo 7 phút.
Sau khi đo ta có bảng kết quả như sau:
Bảng 3.1: kết quả phân tích đường chuẩn Ta có đồ thị đường chuẩn như sau:
57
Hình 3.6:đồ thị đường chuẩn Từđó ta có phương trình đường chuẩn:
y = 14,24x – 49,83 trong đó: y: là diện tích peak; x: là nồng độ caffeine (ppm); ppm Area
58
59