được tạo ra nhiều hơn
- Lượng oxy trong không khí giảm và CO; sẽ tăng dần, đo đó trong giai đoạn này
cần phải được thông khí mạnh là tốt nhất.
(ii) Giai đoạn 3: Giai đoạn này kéo dài khoảng 10 + 12 giờ. Lúc này nhiệt độ khối
môi trường sẽ giảm dần, cường độ hô hấp giảm dần một cách rõ rệt. Màu sắc của
sợi nắm bắt đầu thay đổi và thê hiện màu đặc trưng (Nguyễn Đức Lượng, 2004).
2.4.4. Thu nhận enzyme
Kết thúc quá trình nuôi cấy ta thu nhận được chế phẩm enzyme. Chế phẩm này được gọi là chế phẩm thô vì ngoài thành phần enzyme ra chúng còn chứa sinh khối
vi sinh vật, thành phần môi trường và nước có trong môi trường.
Tùy theo mục đích sử dụng, có thê dùng chế phẩm thô này ngay không cần qua quá
trình tinh sạch. Trong những trường hợp cần thiết khác, ta phải tiến hành làm sạch
enzyme. Khi enzyme được tách hết nước, sinh khối vi sinh vật và thành phần môi
trường và chúng ở dạng tinh thể, ta thu được chế phẩm enzyme sạch.
Để thu nhận được chế phẩm enzyme PME tỉnh khiết thì chế phâm enzyme thô phải được trích ly bằng phương pháp kết tủa nhờ dung môi hữu cơ hay muối trung tính.
Muối trung tính như amonium sulfate, natri chloride thường được sử dụng để kết
tủa enzyme vì độ hoà tan của muối rất cao, sự kết tủa không phụ thuộc vào nhiệt độ,
không làm biến tính enzyme, enzyme thu được có hoạt tính cao hơn so với các
enzyme thu được bằng phương pháp sử dụng dung môi hữu cơ. Tuy nhiên, khi sử
dụng muối trung tính cũng có nhược điểm là lượng dung dịch dùng gấp 5 + 6 lần
dịch chiết enzyme và không thể tái thu hồi được dung môi.
Để đảm bảo chế phẩm enzyme thu được không mất hoạt tính nhanh, người ta
thường sấy khô chế phẩm enzyme đến một độ âm thấp. Độ âm cần đạt sau khi kết
thúc quá trình sấy thường nhỏ hơn 10 %. Để đảm bảo hoạt tính enzyme không thay
đổi, ta thường sấy enzyme ở nhiệt độ 38 + 40°C. Ở nhiệt độ này phần lớn enzyme ít bị biến đổi. Trong trường hợp sấy ở nhiệt độ cao quá 40°C, enzyme rất dễ bị biến bị biến đổi. Trong trường hợp sấy ở nhiệt độ cao quá 40°C, enzyme rất dễ bị biến
tính (Nguyễn Đức Lượng, 2004).
2.4.5. Các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng tổng hợp PME
2.4.5.1 Ảnh hưởng của loại nguyên liệu
Thành phần môi trường là yếu tố cơ bản nhất quyết định khả năng sinh PME cũng như các enzyme khác từ vi sinh vật _. Trong đó, thành phần pectin giữ vai trò rất như các enzyme khác từ vi sinh vật _. Trong đó, thành phần pectin giữ vai trò rất
quan trọng (Patil, 2006). Hàm lượng pectin cao được biết đến như nguồn cơ chất
2.4.5.2 Độẩm
Độ ẩm cao ảnh hưởng đến độ thoáng khí, thấp quá sẽ kìm hãm sự sinh trưởng và phát triển của nắm sợi cũng như khả năng tạo enzyme. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Theo Nguyễn Đức Lượng (2004) trong điều kiện sản xuất, độ ẩm ban đầu tối thích của môi trường là 58 + 60% và phải giữ cho độ ẩm của môi trường ổn định trong của môi trường là 58 + 60% và phải giữ cho độ ẩm của môi trường ổn định trong
quá trình nuôi.
Độ ẩm tăng quá 70% sẽ làm giảm độ thoáng khí, còn độ âm thấp hơn 50 + 55% thì
sẽ kiềm hãm sự sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật cũng như tạo enzyme
(Nguyễn Đức Lượng, 2004).
Khi nuôi cấy trong điều kiện không được vô trùng tuyệt đối thì độ ẩm môi trường
sau khi cấy giống không được vượt quá 60%, vì cao hơn sẽ đễ bị nhiễm khuẩn.
2.4.5.3 Nhiệt độ nuôi
Nhiệt độ cao quá hoặc thấp quá đều ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm mốc, kéo theo sự giảm hoạt lực của enzyme. Nắm mốc Aspergillus niger phát
triển thích hợp ở nhiệt độ 30°C (Schmitz, 2002).
2.4.5.4 Thời gian nuôi
Thời gian nuôi để thu được lượng enzyme lớn thường được xác định bằng thực nghiệm. Sự tạo bảo tử là hiện tượng không mong muốn vì thường làm giảm hoạt tính enzyme. Đối với nắm sợi Aspergillus niger, sự tạo enzyme cực đại thường kết
thúc khi nắm bắt đầu sinh đính bào tử (Nguyễn Đức Lượng, 2004).
245.5 pH
Khi nuôi cấy bằng phương pháp bề mặt thường ít ảnh hưởng do môi trường có dung dịch đệm cao và hàm âm thấp, pH không thay đổi trong quá trình nuôi. Tuy nhiên, dịch đệm cao và hàm âm thấp, pH không thay đổi trong quá trình nuôi. Tuy nhiên,
pH ban đầu của môi trường có ảnh hưởng không nhỏ đến sự phát triển của nấm sợi
và sự tạo thành enzyme. pH tối thích của enzyme có nguồn gốc vi sinh vật trong
khoảng 4,5 + 5,5 (Trần Xuân Ngạch, 2007). 2.5 MỘT SỐ KÉT QUÁ ĐÃ NGHIÊN CỨU 2.5 MỘT SỐ KÉT QUÁ ĐÃ NGHIÊN CỨU
Sun Zhong-Tao (2008) đã nghiên cứu sản xuất pectinase từ hai dòng Aspergillus niger đã được phân lập trên cơ chất bã táo (apple pomace). Nghiên cứu sản xuất
PME từ Curvularia inaequalis trên cơ chất vỏ cam trong môi trường rắn cũng đã được Afifi e ai. (2002) nghiên cứu. Nhìn chung, đặc điểm thành phần cơ chất giàu được Afifi e ai. (2002) nghiên cứu. Nhìn chung, đặc điểm thành phần cơ chất giàu
pectin và điều kiện môi trường là yêu tố chi phối mạnh đến hiệu quả lên men sinh
PME từ vi sinh vật.
Với thành phần pectin trong hạt hướng đương là 21,36%, Patil và Dayanand (2006)
đã xác nhận tính khả thi của việc sử dụng hạt hướng dương trong sản xuất PME từ Aspergillus niger cho cả hai trường hợp lên men rắn và lên men chìm.
PME đã được phân lập bằng việc lên men các dòng Aspergiilus (Polizeli, 1991), đặc biệt là Aspergillus niger đã được khảo sát khá chỉ tiết với hai phương thức lên men
chìm và lên men nổi (Joshi e zi., 2006) trên nhiều loại cơ chất khác nhau (Schmitz,
2002).
Theo Trần Xuân Ngạch (2007), PME nắm mốc có nhiệt độ hoạt động tối thích trong
khoảng từ 30 — 45°C và bị vô hoạt ở 55 + 62°C và được hoạt hóa bởi Ca?” và Mg”. Phương pháp trích ly PME cũng được nghiên cứu (Contreras-Esquivel, 1999). Kết Phương pháp trích ly PME cũng được nghiên cứu (Contreras-Esquivel, 1999). Kết quả cho thấy dung dịch NaCI 0,5% và 0,1% được sử dụng trích ly PME từ vỏ quả chanh (Mexico lime) và vỏ quả lê (prickly pear) cho hiệu quả trích ly cao nhất. Sử dụng bã táo (apple pomace) như nguồn cơ chất cho sự phát triển của A. miger sinh PME cũng đã được chứng minh bởi Joshi (2005). Nghiên cứu của Joshi (2006)
về việc sản xuất pectin methylesterase (PME) từ Aspergillus niger trên cơ chất bã (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
táo cho thấy, nhiệt độ ủ 25°C, điều kiện pH phản ứng 4,0 và thời gian ủ là 96 giờ là điều kiện tối ưu cho việc lên men sinh PME ở cả môi trường rắn (SSF) và cả môi điều kiện tối ưu cho việc lên men sinh PME ở cả môi trường rắn (SSF) và cả môi
CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 3.1 PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM 3.1 PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM
3.1.1 Thời gian địa điểm
Địa điểm: Phòng thí nghiệm Bộ môn Công nghệ thực phẩm - Khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng dụng - Trường Đại học Cần Thơ .
Thời gian thực hiện: từ ngày 02/02/2009 đến ngày 05/05/2009. 3.1.2 Dụng cụ - hóa chất 3.1.2 Dụng cụ - hóa chất
3.1.2.1 Dụng cụ - thiết bị
-_ Máy xay sinh tố