Kết luận:
Từ các kết quả thực nghiệm thu đợc, chúng tôi đã đạt mục tiêu đề ra là xây dựng phơng pháp định lợng azithromycin trong HT. Phơng pháp đợc xây dựng trên thiết bị LC-MS.
Qua quá trình thực hiện đề tài chúng tôi rút ra một số kết luận sau:
* Với phơng pháp định lợng AZI bằng HPLC với detector huỳnh quang.
Quá trình xây dựng dừng lại ở giai đoạn khảo sát định lợng trong dung dịch khi xác định thấy giới hạn định lợng không phù hợp cho định lợng AZI trong HT.
Đã xây dựng đợc phơng pháp định lợng AZI trong dung dịch, có thể áp dụng phơng pháp này để định lơng AZI trong chế phẩm.
Phơng pháp đợc tóm tắt nh sau: - Dùng CLA làm chuẩn nội.
- Dẫn xuất hóa trớc cột bằng FMOC-Cl .
+ Kiềm hóa bằng đệm borat 0,1M pH=7,4.
+ Nhiệt độ phản ứng: 500C
+ Thời gian 40 phút. - Điều kiện sắc ký:
+ Cột: C18 (150 mm x 4,6 mm x 5àm).
+ Nhiệt độ cột: 400C.
+ Pha động: Acetonitril: Đệm phosphat 0,1M pH 7,7 (76:24).
+ Lu lợng dòng: 1,5ml/phút.
+ Detector huỳnh quang : bớc sóng kích thích: 270nm.
Bớc sóng phát xạ : 317nm.
*Với phơng pháp định lợng AZI trong HT bằng LC-MS
- Dùng ROXI làm chuẩn nội
- Đã thiết lập đợc một quy trình chiết AZI từ HT bằng phơng pháp chiết lỏng - lỏng, sử dụng dung môi chiết là diethyl ether sau khi kiềm hóa bằng
dung dịch Na2CO3 0,05M và cô bay hơi dung môi ở nhiệt độ 45oC.
- Đã xác định đợc chơng trình LC-MS để định lợng AZI trong HT nh sau:
+ Cột Zorbax C18 SB (150 x4,6; 5àm).
+ Pha động: acetonitril : amoni acetat 0,05M (6 : 4)
+ Tốc độ dòng: 0,5ml/phút
+Thể tích tiêm mẫu: 25μl.
+ MS chế độ SIM: Chọn ion có m/z từ 748-750 để xác định pic của AZI, ion có m/z từ 836- 838 để xác định pic của ROXI.
+ Khí Sheath Gas: 30 + Auxilary Gas: 20
* Thẩm định phơng pháp phân tích:
Đã tiến hành thẩm định phơng pháp một cách tơng đối đầy đủ, bao gồm các chỉ tiêu: tính chọn lọc, sự phù hợp của hệ thống, khoảng nồng độ tuyến tính, giới hạn định lợng dới, độ đúng, độ chính xác. Kết quả cho thấy các chỉ tiêu trên đều đạt yêu cầu.
* Về định lợng thăm dò AZI trong HT ngời tình nguyện: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kết quả thu đợc cho phép khẳng định phơng pháp xây dựng bằng LC – MS định lợng đợc AZI trong HT ngời sử dụng chế phẩm có chứa AZI.
- Phơng pháp cần tiếp tục hoàn thiện phần thẩm định phơng pháp (xác định độ ổn định) để đảm bảo khả năng ứng dụng cao trong thực tế.
- ứng dụng để nghiên cứu sinh khả dụng và tơng đơng sinh học các chế