Chương 2 THỰC NGHIỆM 2.1 Húa chất và dụng cụ
2.5.3. Diệt vi khuẩn
* Chuõ̉n bị 3 khay thủy tinh
- Một khay xi măng phủ bột TN1-3 lờn trờn, mọ̃t độ 0,5261 mg/cm2 - Một khay xi măng khụng chứa TN1-3
* Tiến hành khử trựng dụng cụ, cho 20 ml dung dịch nước thải tại hồ Bầu Sen – Đường Nguyờ̃n Thái Học – Thành phố Quy Nơn vào 3 khay thủy tinh đó chũ̉n bị ở trờn. Sau đó, cho 3 đĩa này ngoài ánh sáng mặt trời xử lí trong vũng 40 phỳt.
* Xác định lượng vi khuõ̉n hiếu khí
♦ Húa chất và dụng cụ
- Cồn 700 .
- Pipet 1ml, đĩa petri.
- Tủ sṍy, tủ ṍm, tủ lạnh, bể điều nhiợ̀t, tủ cṍy vụ trựng, nồi hṍp.
- Đốn cồn, đốn tử ngoại (UV). - Bỳt đếm khuõ̉n lạc.
♦ Chuẩn bị dụng cụ
Các dụng cụ thí nghiợ̀m thủy tinh sau khi rửa sạch được đem đi khử trựng bằng cách sṍy ở nhiợ̀t độ 160 - 1700C trong 1,5 - 2 giờ. Các dụng cụ để đựng mụi trường nuụi cṍy vi sinh vọ̃t cũng được khử trựng bằng sức nóng khụ ở nhiợ̀t độ dưới 1800C.
♦ Mụi trường nuụi cấy
Mụi trường sử dụng là PCA (Plate Count Agar) có pH 7,0 ± 0,2. Mụi trường được phõn phối vào trong các bình thủy tinh và hṍp khử trựng ở 1210C trong 15 phỳt. Các bình chứa mụi trường chưa sử dụng được bảo quản trong tủ lạnh ở 2 - 80C. Trước khi sử dụng, mụi trường phải được đun chảy và làm nguội ở 450C trong bể điều nhiợ̀t.
♦ Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khớ
Nguyờn tắc
Tổng số vi khuõ̉n hiếu khí được đếm bằng cách cṍy mõ̃u và nuụi ủ trong điều kiợ̀n hiếu khí ở 300C trong 72 giờ.
Quy trỡnh
- Cṍy mõ̃u: dựng pipet vụ trựng chuyển 1 ml dung dịch mõ̃u vào giữa đĩa petri vụ trựng. Tương ứng với mỗi mõ̃u, cṍy ít nhṍt 2 đĩa (tức là thực hiợ̀n 2 lần lặp lại). Sau khi cṍy, đổ vào mỗi đĩa 10 - 15 ml mụi trường nuụi cṍy (PCA) đó được đun chảy và ổn định ở 450C. Trộn đều dịch mõ̃u với mụi trường bằng cách xoay trũn đĩa petri xuụi và ngược chiều kim đồng hồ, mỗi chiều 3 - 5 lần ngay sau khi đổ mụi trường. Đặt các đĩa trờn mặt phẳng ngang cho thạch đụng đặc.
- Nuụi ủ: các đĩa được lọ̃t ngược và ủ trong 72 giờ ở 300C.
Có thể dựng mắt thường để đếm tṍt cả số khuõ̉n lạc xuṍt hiợ̀n trờn các đĩa sau khi ủ. Chỉ chọn các đĩa có số khuõ̉n lạc từ 25 - 250 để đếm.
Mọ̃t độ tổng vi khuõ̉n hiếu khí trong 1 ml mõ̃u được tính như sau: A (CFU/ml) = N
n
Trong đó: A là số tế bào (đơn vị hình thành khuõ̉n lạc) vi khuõ̉n trong 1 ml mõ̃u. N là tổng số khuõ̉n lạc đếm được trờn các đĩa đó chọn.
n là số đĩa đó chọn ( n =3) * Xác định tổng số Coliforms
Nhóm coliforms hiợ̀n diợ̀n rộng rói trong tự nhiờn, trong ruột người và động vọ̃t. Số lượng hiợ̀n diợ̀n của chỳng trong thực phõ̉m, nước hay các loại mõ̃u mụi trường được dựng để chỉ thị khả năng hiợ̀n diợ̀n của các vi sinh vọ̃t gõy bợ̀nh khác. Vì vọ̃y, khảo sát khả năng xử lí coliforms cũng có ý nghĩa hết sức quan trọng.
♦ Mụi trường và húa chất
- Mụi trường TSA (Tryptone Soya Agar) được chuõ̉n bị trong các bình hoặc chai thủy tinh, hṍp khử trựng và bảo quản ở 4-8oC. Trước khi sử dụng, mụi trường được đun chảy và làm nguội ở 45oC trong bể điều nhiợ̀t.
- VRB ( Violet Red Bile Agar ) được chuõ̉n bị vụ trựng trong các chai thủy tinh, đun chảy và làm nguội ở nhiợ̀t độ 45oC trong bể điều nhiợ̀t trước khi sử dụng.
♦ Quy trỡnh phõn tớch
Nguyờn tắc
Mõ̃u được cṍy một lượng nhṍt định lờn mụi trường thạch chọn lọc thích hợp chứa lactose. Đếm khuõ̉n lạc lờn men lactose và sinh acid sau khi ủ ở 37oC trong 24-48 giờ.
Quy trỡnh
Chuyển 1ml mõ̃u vào đĩa petri. Bổ sung vào mỗi đĩa đó cṍy khoảng 5ml mụi trường TSA đó được đun chảy và ổn định trong bể điều nhiợ̀t ở 45oC. Lắc trũn đĩa petri xuụi và ngược chiều kim đồng hồ, mỗi chiều 3-5 lần để trộn đều dịch mõ̃u với mụi
trường. Để ở nhiợ̀t độ phũng trong 1-2 giờ để hồi phục các tế bào bị tổn thương. Bổ sung vào mỗi đĩa 10-15ml mụi trường thạch VRB ở nhiợ̀t độ 45oC lờn trờn mụi trường TSA. Chờ cho mụi trường trong đĩa đụng đặc, lọ̃t ngược đĩa và ủ ở 37oC trong 30 giờ.
Kết quả