2, 3, 4: Các dòng plasmid tái tổ hợp M: Marker 1kb
Tương tự như plasmid khi biến nạp vào E.coli DH5α, plasmid biến nạp thành công vào E.coli BL21 khi cắt cũng sẽ tạo ra hai băng ~5400bp và ~390bp. Kết quả trên hình 3.6 cho thấy ở dòng đối chứng âm (giếng số1) không chứa đoạn 27aa_LTB. Ở các dòng số 2, 3, 4 thì chỉ có dòng số 2 và dòng số 3 là xuất hiện đúng các băng cần tìm. Điều này cho thấy chúng tôi đã
2506000 6000
500 1 2 3 4 M 1 2 3 4 M
biến nạp thành công vector pET21_27aa_LTB vào trong chủng biểu hiện
E.coli BL21. Đây là bước để tạo cơ sở cho việc biểu hiện gen tiếp theo.
3.4.2 Biểu hiện gen 27aa_LTB trong E.coli BL21
Các dòng E.coli BL21 mang vector tái tổ hợp được biểu hiện theo quy trình được mô tả ở phần phương pháp. Trong quá trình biểu hiện protein có rất nhiều yếu tố ảnh hưởng đến khả năng biểu hiện ở tế bào E.coli. Tuy nhiên, các yếu tố như nồng độ IPTG, nhiệt độ lúc nuôi cấy cảm ứng và thời gian cảm ứng là quan trọng hơn cả.
Chúng tôi chọn thử nồng độ IPTG khi cảm ứng là 1mM ở nhiệt độ 37oC để biểu hiện. Ngoài điều kiện về nồng độ IPTG và nhiệt độ cảm ứng thì sự biểu hiện protein còn phụ thuộc lớn vào thời gian cảm ứng. Thời gian cảm ứng được chọn thử ở các thời điểm 0h, 1h, 2h, 3h, 4h. Để có thể nhận định điều này rõ ràng hơn, chúng tôi nuôi lượng lớn và cảm ứng IPTG sau 0h và 4h như trên. Sản phẩm biểu hiện cũng được điện di tương tự như trên. Kết quả trên hình 3.7 cho thấy sản phẩm protein được biểu hiện khi cảm ứng IPTG sau 4h hiện một băng đậm nét hơn hẳn so với băng đối chứng 0h.
Hình 3.7. Điện di sản phẩm biểu hiện protein ở E.coli BL21
M 1 2
~16,5KDa 14,4
18,4 KDa KDa
M: Marker