4.1. Nguyên liệu thực vật.
Mẫu rễ cây sài hồ đợc lấy ở Diễn Hùng, Diễn Châu, Nghệ An. Cây mọc hoang ở vùng ven biển.
Mẫu thực vật đã đợc TS. Lê Kim Biên, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật - TTKHTN và CNQG xác định là Pluchea pteropoda Hemsl, thuộc họ Cúc (Compositae).
4.2. Chiết xuất và phân lập các chất.
Mẫu rễ cây sài hồ nam sau khi băm nhỏ, sấy khô ở nhiệt độ 400C đợc chiết rút hồi lu với hỗn hợp C2H5OH : H2O = 95 : 5 ba lần. Cất loại cồn dới áp suất giảm và lần lợt lắc với dung môi n - hexan, clorofom, etylaxetat. Loại dung môi dới áp suất giảm đợc cặn chiết tơng ứng chứa các nhóm chất có độ phân cực tăng dần ( sơ đồ 3.1).
Phần cặn chiết n - hexan có độ phân cực thấp nhất, khi đem tách bằng sắc ký cột trên silicagen hệ dung môi giải hấp là n - hexan : etylaxetat với hàm lợng etylaxetat tăng từ 0 ữ 5% thu đợc nhiều phân đoạn khác nhau trong đó có nhiều phân đoạn đáng chú ý là có tinh thể tách ra ( sơ đồ 3.2).
Các phân đoạn đợc tinh chế tiếp bằng kỹ thuật kết tinh lại nhiều lần trong n-hexan với hợp chất T1, T2, trong n - hexan : etylaxetat = (95 : 5) đối với hợp chất T3 đã thu đợc chất sạch. Sau khi đợc kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi triển khai là:
Hệ 1: n - hexan : etylaxetat = 5 : 1 (với hợp chất T1, T2). Hệ 2: n - hexan : etylaxetat = 3 : 2 ( với hợp chất T3) hiện vết bằng hơi iot kết quả cho thấy:
T1,T2,T3 đều là những tinh thể hình kim, không màu không mùi có : Rf(T1) = 0.72 (hệ 1)
Rf(T2) = 0.37 (hệ 1) Rf(T3) = 0.56 (hệ 2)
4.3. Xác định cấu trúc của hợp chất.
Trong luận văn này chúng tôi xác định cấu trúc của hợp chất T2 với những đặc trng sau:
Bằng phơng pháp ghi phổ khối va chạm electron (EI - MS) đã thu đợc phổ đồ của hợp chất T2 nh hình sau :
OH H
Phổ EI-MS của hợp chất T2 đợc so sánh với th viện phổ cho biết kết quả T2
là stigmasterol hay stigmast – 5,22 – dien - 3β - ol với độ trùng lặp là 90%. Kết hợp với nhiệt độ nóng chảy của T2 là 168 ữ 1690C, tinh thể hình kim, không màu ta thấy T2 đồng nhất với stigmasterol chuẩn (to
nc = 170oC) [17]. Công thức cấu tạo của T2 là:
Phổ EI - MS của stigmasterol (T2) đợc đặc trng bởi các mảnh sau: Pic ion phân tử (M+) có m/z = 412 ứng với công thức phân tử C29H48O.
Pic ion mảnh có m/z = 364; 300; 271; 255; 159; 145; 105; 81; 69; 55. stigmasterol là một trong những chất thuộc nhóm hợp chất sterol. Hợp chất này cũng đợc tìm thấy ở một số loài thực vật thuộc chi Pluchea Cass nh:P. quitoc, P. arguta, P. chingoyo, P. lanceolata, P. dioscoridis.