Đề tài nghiờn cứu với cỏc nội dung sau:
-Thớ nghiệm 1: Nghiờn cứu ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến hệ số nhõn nhanh và quỏ trỡnh phỏt sinh hỡnh thỏi của chồi hoa Đồng Tiền (giai đoạn nhõn nhanh).
Thớ nghiệm gồm 4 cụng thức:
+ CT1 : Mụi trường nền + 3mg KI + 0.5mg IAA + CT2: Mụi trường nền + 5mg KI + 0.5mg IAA + CT3: Mụi trường nền + 7mg KI + 0.5mg IAA + CT4: Mụi trường nền + 10mg KI + 0.5mg IAA
Thớ nghiệm 2 : Nghiờn cứu ảnh hưởng của nồng độ IAA tổ hợp với KI
đến khả năng ra rễ của hoa Đồng Tiền (giai đoạn ra rễ ) Thớ nghiệm gồm 4 cụng thức:
+ CT1: Mụi trường nền + 2mg IAA + 1mg KI + CT2: Mụi trường nền + 4mg IAA + 1mg KI + CT3: Mụi trường nền + 6mg IAA + 1mg KI + CT4: Mụi trường nền + 8mg IAA + 1mg KI
(Mụi trường nền: MS + 150ml Nước dừa + 30g Đường + 9g Agar + 0.5g than hoạt tớnh)
2.3. Phƣơng phỏp nghiờn cứu
2.3.1. Bố trớ thớ nghiệm
Tất cả cỏc thớ nghiệm đều được bố trớ theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiờn với 3 lần nhắc lại.
- Cỏc thớ nghiệm ở trong phũng: Mỗi lần nhắc lại 7- 10 bỡnh, mỗi bỡnh 3 - 5 chồi tựy theo giai đoạn nghiờn cứu.
2.3.2. Điều kiện thớ nghiệm
- Nhiệt độ: 25 ± 20C - Độ ẩm: 60 - 70 %
- Ánh sỏng: 2000 - 2500 lux
- Thời gian chiếu sỏng là: 12h/ ngày
2.3.3.Cỏc chỉ tiờu theo dừi
2.3.3.1.Giai đoạn nhõn nhanh
Tổng sốchồi tạo thành
- Hệ số nhõn chồi =
Tổng số chồi ban đầu
Tổng chiều cao - Chiều cao trung bỡnh chồi (cm) =
Tổng số lá - Số lỏ trung bỡnh/chồi (lỏ) =
Tổng số chồi hình thành - Hỡnh thỏi cõy
Thời gian nghiờn cứu của giai đoạn này là 4 tuần.
2.3.3.2. Giai đoạn ra rễ
- Ngày bắt đầu ra rễ
- Số cõy ra rễ: Đếm số cõy ra rễ trong tổng số cõy theo dừi - Chất lượng rễ Tổng số rẽ
- Số rễ trung bỡnh/ cõy (rễ) =
Tổng số chồi the dõi Tổng chiều dài rẽ - Chiều dài trung bỡnh rễ/ chồi (cm) =
Tổng số chồi theo dõi Thời gian nghiờn cứu của giai đoạn này là 4 tuần..
2.4. Phƣơng phỏp xử lý số liệu
Số liệu được xử lý bằng toỏn xỏc suất thống kờ trờn phần mềm microsoft Excel 2003 và số liệu thu thập của đề tài được xử lý bằng phần mềm IR RISTAT 5.0.
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1. Giai đoạn nhõn nhanh
Kết quả nghiờn cứu sau 30 ngày, chỳng tụi nhận thấy rằng ở cụng thức 1 cho số chồi cao nhất,chồi vươn cao, lỏ to và màu xanh nhạt.Cụ thể như sau:
Bảng 3.1: Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến khả năng bật chồi và hệ số nhõn nhanh hoa đồng tiền in vitro (sau 4 tuần nuụi cấy)
Cụng thức Nồng độ chất điều tiết sinh trƣởng (mg) Số chồi ban đầu (Chồi) Số chồi tạo thành (Chồi) Hệ số nhõn nhanh CT1 3mg KI + 0,5mg IAA 45 250 5.56 CT2 5mg KI + 0.5mg IAA 45 90 2 CT3 7mg KI + 0.5mg IAA 45 190 4.22 CT4 10mg KI + 0.5mg IAA 45 125 2.78
Hỡnh 3.1. Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến hệ số nhõn nhanh chồi hoa Đồng Tiền
Nhận xột kết quả :
Khi bổ sung vào mụi trường nuụi cấy 3mg KI HSNN đạt 5.56 lần ,giảm xuống 2 lần (ở cụng thức bổ sung 5mg). Khi tiếp tục tăng KI lờn 7mg, HSNN chồi cú xu hướng tăng lờn 4.22 lần. Tại nồng độ 10mg KI HSNN chồi chỉ đạt 2.78 lần ,cú xu hướng giảm xuống dần.
Xột về mặt thống kờ, HSNN chồi hoa Đồng Tiền ở cỏc cụng thức thớ nghiệm cú sự sai khỏc rừ rệt về mặt thống kờ. HSNN chồi được chia làm 4 mức được sắp xếp theo thứ tự giảm dần sau:
+) Mức 1: HSNN đạt 5.56 cao nhất tại nồng độ 3mg +) Mức 2: HSNN đạt 4,22 tại nồng độ 7mg
+) Mức 3: HSNN đạt 2.78 tại nồng độ 10mg +) Mức 4: HSNN đạt thấp nhất 2 tại nồng độ 5mg
Nhƣ vậy: Qua kết quả nghiờn cứu, chỳng tụi thấy ở giai đoạn nhõn
nhanh bổ sung 3mg KI vào mụi trường nuụi cấy cho HSNN chồi hoa Đồng Tiền đạt cao nhất. HSNN 0 1 2 3 4 5 6 3 mg 5 mg 7 mg 10 mg CT H SN N
Bảng 3.2: Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến khả năng sinh trưởng, phỏt triển của hoa Đồng Tiền in vitro (sau 4 tuần nuụi cấy).
Thời gian (Tuần) Công thức Chiều cao chồi Số lá / chồi (cm)
Đặc điểm hình thái chồi in vitro
2
CT1 4.2 3.2 Chồi v-ơn cao, lá to, màu
xanh nhạt
CT2 2.1 3.5 Chồi yếu, thấp, lá nhỏ, màu
xanh nhạt
CT3 2.45 2.75 Chồi thấp, lá nhỏ, màu xanh đậm
CT4 3.16 2.98 Chồi khoẻ, mập lá to màu xanh đậm
3
CT1 4.8 9.53 Chồi cao , lá to màu xanh
nhạt
CT2 2.66 10.02 Chồi thấp, cây yếu lá nhỏ xoăn hơi vàng, hình thành mô sẹo
CT3 3.35 3.82 Chồi cao , lá nhỏ màu xanh nhạt
CT4 4.57 5.27 Chồi mập, lá to màu xanh đậm
4
CT1 5.19 12.25 Cây cao, lá to, cho hệ số nhân cao
CT2 3.01 12.75 Chồi thấp, cây yếu, lá nhỏ xoăn,hình thành mô sẹo, ra nhiều lá và lá vàng
CT3 4.45 9.45 cây mập, khoẻ, lá xanh nh-ng cho hệ số nhân thấp
CT4 5.03 10.45 cây mập, khoẻ, lá xanh, dày phiến
Hỡnh 3.2. Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến khả năng sinh trưởng, phỏt triển của chồi hoa Đồng Tiền in vitro
Nhận xột kết quả :
Tất cả cỏc cụng thức đều cú sự tăng trưởng về chiều cao và số lỏ qua cỏc tuần nghiờn cứu. Ở tuần thứ 2 và tuần thứ 3 chiều cao và số lỏ tăng trưởng chậm ở tất cả cỏc cụng thức thớ nghiệm, sang tuần thứ 4 cỏc chỉ tiờu này tăng trưởng nhanh.
Sau 4 tuần nuụi cấy , ở cỏc cụng thức thớ nghiệm chiều cao chồi và số lỏ/ chồi cú xu hướng giảm dần khi tăng nồng độ KI từ 3 – 5mg, khi tiếp tục tăng KI lờn 10 ppm chiều cao chồi cú xu hướng tăng. Cụ thể là:
- Cụng thức 1 : Chồi hoa Đồng Tiền mập, lỏ dày cú màu xanh nhạt, chồi vươn cao nhanh và khỏe. Chiều cao của chồi hoa Đồng Tiền sau 4 tuần nhõn nhanh là 5.19 cm. Tuy lỏ cú màu xanh nhạt nhưng nhỡn chung cỏc chỉ tiờu khỏc đều vượt trội hơn so với cụng thức 4, vỡ vậy chất lượng chồi hoa Đồng Tiền ở cụng thức 1 là rất tốt. Chứng tỏ ở nồng độ 3mg KI cú tỏc dụng tốt đến khả năng sinh trưởng phỏt triển của chồi hoa Đồng Tiền in vitro.
CHIỀU CAO CHỒI
0 1 2 3 4 5 6 3 mg 5 mg 7 mg 10 mg CT C H IỀ U C A O C H Ồ I
-Cụng thức 2 : Tăng nồng độ KI lờn 5mg vào mụi trường dinh dưỡng. Kết quả nghiờn cứu cho thấy, chồi in vitro yếu, chiều cao của chồi giảm rất nhanh sau 4 tuần chỉ đạt 3,01 cm, số lỏ/ chồi là 12.75 lỏ, phiến lỏ xoăn mỏng, nhỏ, lỏ cú màu xanh nhạt hoặc hơi vàng, đường kớnh chồi nhỏ, chồi thấp. Bờn cạnh đú số lỏ/ cõy tăng nhanh đồng thời mẫu hỡnh thành nhiều mụ sẹo. Chất lượng của chồi in vitro ở cụng thức này là được đỏnh giỏ thấp, chồi phỏt triển kộm, cú chất lượng xấu. Do vậy việc bổ sung nồng độ KI vào mụi trường dinh dưỡng với nồng độ 5mg đó làm ảnh hưởng xấu tới sinh trưởng phỏt triển chồi hoa Đồng Tiền in vitro.
- Cụng thức 3 : So với cụng thức 2 chồi hoa Đồng Tiền ở cụng thức cho số lỏ/ chồi và chiều cao chồi cao hơn, chồi mập, lỏ to, cõy khỏe hơn. Điều này chứng tỏ, việc bổ sung KI vào mụi trường dinh dưỡng đó cú tỏc dụng sinh lý tới hỡnh thỏi, chất lượng chồi hoa Đồng Tiền với nồng độ 7mg. Sau 4 tuần nuụi cấy cho cõy mập, khỏe, lỏ xanh nhưng cho hệ số nhõn thấp, số lỏ/ chồi đạt 9,45 lỏ; chiều cao chồi đạt 4,45 cm.
Cụng thức 4 : Khi nồng độ KI tăng lờn, sinh trưởng phỏt triển của chồi hoa Đồng Tiền cũng tăng lờn rừ rệt, đường kớnh của chồi hoa Đồng Tiền lớn hơn, lỏ dày màu xanh đậm, chiều cao/ chồi là 5,03 cm; số lỏ/ chồi đạt 10,45 lỏ. Cụng thỳc này cho chồi in vitro khỏe, cứng cỏp phự hợp cho giai đoạn nghiờn cứu tiếp theo.
Nhận xột chung: Qua nghiờn cứu về khả năng bật chồi, hệ số nhõn nhanh chồi cũng như khả năng sinh trưởng phỏt triển của cõy hoa Đồng Tiền in vitro dưới ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA trong giai đoạn nhõn nhanh, chỳng tụi thấy mụi trường nhõn nhanh thớch hợp cho nhõn nhanh chồi hoa Đồng Tiền in vitro là: (MS + 9 g/ l Agar + 20 g/l saccaroza +3mg KI +
Chồi hoa Đồng Tiền sau 1 tuần nhõn nhanh
Chồi hoa Đồng Tiền sau 3 tuần nhõn nhanh
3.2. Giai đoạn ra rễ
Kết quả nghiờn cứu sau 30 ngày, chỳng tụi nhận thấy rằng : Khi bổ sung cỏc nồng độ khỏc nhau của IAA vào mụi trường nhõn giống hoa Đồng Tiền thỡ đó làm ảnh hưởng tới sự ra rễ và hỡnh thỏi rễ của của nú,kết quả cho thấy khi bổ sung 10mg là tốt nhất,số ngày ra rễ sớm hơn, chất lượng rễ tốt hơn.Cụ thể như sau :
Bảng 3.3: Ảnh hưởng của nồng độ IAA tổ hợp với KI đến thời gian ra rễ và khả năng ra rễ của hoa đồng tiền in vitro (sau 4 tuần nuụi cấy)
Cụng thức Số chồi cấy (Chồi) Ngày bắt đầu ra rễ (Ngày) Số chồi ra rễ (Chồi) Tỷ lệ ra rễ (%) CT1 45 11 45 100 CT2 45 14 45 100 CT3 45 10 45 100 CT4 45 8 45 100
Hỡnh 3.3 Ảnh hƣởng của nồng độ IAA tổ hợp với KI đến số ngày ra rễ của chồi hoa Đụng Tiền
Nhận xột kết quả :
- Về chỉ tiờu: tỷ lệ ra rễ của cỏc cụng thức, kết quả nghiờn cứu cho thấy cỏc cụng thức được bổ sung IAA tỷ lệ ra rễ đều đạt 100%.
- Về thời gian bắt đầu ra rễ của cỏc cụng thức thớ nghiệm, chỳng tụi thấy: thời gian bắt đầu ra rễ ở cỏc cụng thức cú sự sai khỏc nhau. Cụ thể:
Khi bổ sung vào mụi trường nuụi cấy từ 2 – 8mg IAA thời gian bắt đầu ra rễ của cỏc chồi hoa Đồng Tiền biến động từ (8 – 14 ngày) điều này chứng tỏ sự cú mặt của IAA đó cú tỏc động tới thời gian ra rễ của cõy hoa Đồng Tiền in vitro, IAA kớch thớch ra rễ khỏc nhau ở cỏc nồng độ khỏc nhau. Qua nghiờn cứu chỳng tụi thấy nồng độ IAA càng cao thỡ số ngày ra rễ càng sớm hơn. Đặc biệt với nồng độ IAA 4mg thỡ số ngày ra rễ là 14 thậm chớ cú những chồi sau 15-16 ngày mới bắt đầu ra rễ.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 2 mg 4 mg 6 mg 10 mg CT N G À Y R A R Ễ
Trong cỏc cụng thức được bổ sung IAA, chỳng tụi nhận thấy cụng thức 4(8 mg IAA) được đỏnh giỏ là tối ưu hơn.
Như vậy: Trong cỏc cụng thức thớ nghiệm chỳng tụi thấy khi bổ sung vào mụi trường dinh dưỡng 5 – 8 mg IAA, cỏc chồi hoa Đồng Tiền ra rễ sớm và tỷ lệ ra rễ đạt cao nhất.
Theo dừi khả năng sinh trưởng rễ của chồi hoa Đồng Tiền in vitro (sau 4 tuần nuụi cấy) chỳng tụi thu được kết quả được trỡnh bày ở bảng 3.4
Bảng 3.4: Ảnh hưởng của nồng độ IAA tổ hợp với KI đến khả năng sinh trưởng của rễ hoa đồng tiền in- vitro (sau 4 tuần nuụi cấy)
Cụng thức Số chồi cấy Số rễ/ cõy Độ dài rễ (cm) Đặc điểm hỡnh thỏi của rễ Chất lƣợng rễ CT1 45 1.67 3.2 Trắng đục Rễ trung bỡnh CT2 45 1.44 3.82 Trắng, mập, ngắn Rễ trung bỡnh CT3 45 2.67 4.75 Trắng, mập, ngắn Rễ tốt CT4 45 3.33 5.19 Trắng, mập, dài Rễ tốt Nhận xết kết quả :
- chiều dài rễ, đặc điểm hỡnh thỏi của bộ rễ là những chỉ tiờu quan trọng để giỳp chỳng ta xỏc định được nồng độ chất kớch thớch ra rễ thớch hợp nhất để tạo cõy con hoàn chỉnh.
- Qua nghiờn cứu sau 4 tuần nuụi cấy, số rễ/ cõy và chiều dài rễ của cỏc cụng thức khỏc nhau, cú sự sai khỏc về mặt thống kờ. Trong đú khi bổ sung 2
– 4mg IAA số rễ và chiều dài rễ/ cõy cú xu hướng giảm dần dần, khi tăng nồng độ IAA lờn 8mg, cỏc chỉ tiờu này cú xu hướng tăng. Cụ thể:
+ Số rễ/ cõy cú xu hướng giảm từ 1.67 – 1.44 rễ/ cõy khi bổ sung vào mụi trường nồng độ IIA từ 2 – 4mg ; Số lượng số rễ/ cõy cú xu hướng tăng khi bổ sung vào mụi trường nồng độ IAA từ 6 – 8mg ,tại nồng độ 8mg thỡ đạt 3.33 rễ/cõy
+ Chiều dài rễ/ cõy cú xu hướng tăng từ 3.2 – 5.19 cm khi bổ sung vào mụi trường nồng độ IAA từ 2 – 8mg ,tại nồng độ 8mg chiều dài rễ đạt 5.19 cm.
+ Về chất lượng rễ của cỏc cụng thức thớ nghiệm cho thấy: Sau 4 tuần nuụi cấy ở cỏc CT1, CT2 rễ cú màu trắng đục và độ dài rễ thu được tương ứng là 3,2 cm và 3,82 cm; Ở CT 3 cho rễ trắng, mập nhưng ngắn, độ dài rễ sau 4 tuần nuụi cấy chỉ đạt 4,75 cm; Ở CT4 rễ tốt nhất sau 4 tuần nuụi cấy cho rễ trắng, mập và dài, độ dài rễ đạt 5,19 cm.
Nhận xột chung: Qua nghiờn cứu chỳng tụi thấy bổ sung vào mụi trường
nuụi cấy 8mg IAA cho khả năng sinh trưởng và chất lượng bộ rễ của chồi hoa Đồng Tiền in vitro đạt tốt nhất và chỳng tụi thấy mụi trường ra rễ thớch hợp nhất đối với cõy hoa Đồng Tiền in vitro là:
(MS + 9 g/ l Agar + 30 g/l saccaroza +8mg IAA + 1mg KI + 150ml nƣớc dừa +0.5g than hoạt tớnh). PH :5.8 – 5.9
Cõy sau 1 tuần ra rễ
Cõy sau 4 tuần ra rễ
Nhận xột chung:
Từ những kết quả thu được, chỳng tụi đề xuất giai đoạn nhõn nhanh và ra rễ trong quy trỡnh nhõn giống hoa Đồng Tiền in vitro như sau:
Quy trỡnh Điều kiện nuụi cấy
Cõy giống
Cỏc đỉnh sinh trưởng
Giai đoạn vào mẫu,
cấy gõy
Mẫu in vitro
Giai đoạn nhõn nhanh
Chồi in vitro
Giai đoạn ra rễ, tạo cõy hoàn chỉnh
Cõy in vitro hoàn chỉnh
Giai đoạn huấn luyện
thớch nghi
Cõy in vitro
Vườn ươm
Mụi trường nhõn nhanh MS + 9/l Agar + 20g/l saccaroza +
150ml nước dừa + 3mg KI + 0.5mg IAA
Thời gian nhõn nhanh là 4 tuần Mụi trường ra rễ
MS + 9g/l Agar + 30g/l saccaroza + 150ml nước dừa + 8mg IAA +
1mg KI + 0.5g than hoạt tớnh Thời gian ra rễ là là 4 tuần
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ A. Kết luận
Từ những kết quả nghiờn cứu thu được, chỳng tụi cú một số kết luận sau:
1. Giai đoạn nhõn nhanh
Mụi trường để sử dụng cho nhõn nhanh giống hoa Đồng Tiền là:
MS + 9 g/ l Agar + 20 g/ l saccaroza + 150ml nước dừa + 3mg KI + 0.5mg IAA
Thời gian nhõn nhanh là 4 tuần.
2. Giai đoạn ra rễ và tạo cõy in vitro hoàn chỉnh
Mụi trường ra rễ thớch hợp cho chồi hoa Đồng Tiền là:
MS +9 g/ l Agar + 30 g/ l saccaroza + 150ml nước dừa + 8mg IAA +1mg KI + 0,5 g/ l than hoạt tớnh.
Thời gian ra rễ tạo cõy in vitro hoàn chỉnh là 4 tuần.
B. Kiến nghị
Vỡ thời gian nghiờn cứu cú hạn, nờn chỳng tụi cú một số kiến nghị sau: Tiếp tục theo dừi cõy và đưa ra ngoài vườn để huấn luyện thớch nghi để đỏnh giỏ khả năng sinh trưởng, phỏt triển, khả năng ra hoa, năng suất , chất lượng, khả năng chống chịu của cõy và đi đến kết quả cuối cựng.
1. Cần tiến hành nghiờn cứu ảnh hưởng phối hợp giữa cỏc chất ĐTST