- Điều tra sinh hóa
2.Vật Liệu và Phương Pháp
Thử nghiệm IL-1b. IL-1 beta mouse sandwich ELISA Kit (AB100767)
Thử nghiệm IL-18. Bộ IL- 18 Rat ELISA (KRC2341)
được sử dụng để định lượng IL-18 huyết thanh.
Thử nghiệm caspase-1.
Thử nghiệm so màu về hoạt tính của caspase-
1 trong huyết thanh và chất đồng nhất của
tuyến tụy, phương pháp Thornberry đã
được áp dụng.
Tuyến tụy được đồng nhất trong dung dịch đệm ly giải
(25 mM HEPES pH 7,5), 1 mM EDTA, 10 mg aprotinin /mL, 10 mg leupeptin / mL, 2 mM dithiothreitol ở 5mL / 100 mg mô tụy.
Dịch chiết được ly tâm ở 15.000 g trong 30 phút ở 4 C. Phần nổi phía trên được ly tâm gần đây ở 200.000 g trong 1 giờ ở 4 C và phần nổi phía trên được sử dụng
để đo hoạt tính capase-1. Thử nghiệm dựa trên sự phát hiện quang phổ của p-nitroanilid mang
màu (pNA), được giải phóng từ chất nền được đánh dấu YVAD-pNA bởi caspase-1, ở 400 hoặc 405 nm. Hoạt tính được biểu thị bằng pg / mL
2.Vật Liệu và Phương Pháp
Thử nghiệm IL-1b. IL-1 beta mouse sandwich ELISA Kit
(AB100767)
Thử nghiệm IL-18. Bộ IL- 18 Rat ELISA (KRC2341)
được sử dụng để định lượng IL-18 huyết thanh.
Thử nghiệm caspase-1.
Xét nghiệm myeloperoxidase
(MPO).
Tốc độ tạo thành sản phẩm màu trong phản ứng phụ thuộc MPO với o-dianisidine dihydrochloride (0,167 mg / mL) được đo
động học ở bước sóng 460 nm và hoạt động được biểu thị bằng đơn vị / mg
protein. . Xét nghiệm lipase huyết thanh và alpha-
amylase huyết thanh.
Nồng độ lipase huyết thanh và alpha- amylase huyết thanh
được xác định bằngphép đo độ đục và phép đo màu tương
ứng
Ước tính peroxit lipid
2. Vật Liệu và Phương Pháp
Ước tính peroxit lipid
Phản ứng xét nghiệm chất Axit thiobarbituric (TBARS) được thực hiện để xác định mức độ malondialdehyde trong tuyến tụy
theo quy trình của Draper và Hadley.
Hỗn hợp phản ứng: 0,5 mL chất đồng nhất tuyến
tụy +10% PTA và TBA được ủ trong một nồi cách
thủy sôi, để nguội và ly tâm.
Sự hấp thụ của màu hồng chromogen hình thành được đo ở bước
sóng 540 nm để xác định mức của sự hình thành malondialdehyde được biểu thị bằng nM / 100 mg protein mô. Ước tính 4-HNE (4- hydroxynonenal) trong tuyến tụy được thực
hiện theo phương pháp của Kinter, 4- HNE trong mẫu được
tạo dẫn xuất bằng dinitrophenyl hydrazine (DNPH). Sản phẩm tạo thành
được chiết 3 lần bằng hexan, làm bay hơi đến
khô và hòa tan bằng metanol trước khi đo độ
hấp thụ ở bước sóng 350 nm. Mức 4-HNE trong các mẫu được biểu thị bằng mM / mg
2. Vật Liệu và Phương Pháp
Thử nghiệm IL-1b. IL-1 beta mouse sandwich ELISA Kit
(AB100767)
Thử nghiệm IL-18. Bộ IL-18 Rat ELISA (KRC2341) được sử dụng để định lượng IL-