KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.2.3. Quần thể lúa đột biến OM1490 ở thế hệ M
Chọn ngẫu nhiên 40 dòng thuộc quần thể đột biến OM 1490 thế hệ M4 để phân tích đặc tính axit phytic thấp thông qua phản ứng sinh hóa. Các cá thể biểu hiện tính axit phytic thấp đƣợc so sánh với thang photpho chuẩn. Sau khi phân tích tính trạng axit phytic thấp thì 40 dòng này sẽ đƣợc cho nảy mầm, ly trích DNA và đƣợc phân tích bằng PCR với marker RM207 và marker RM202. Marker RM 207 liên kết chặt chẽ với gen axit phytic thấp trên nhiễm sắc thể số 2 trong bộ gen của cây lúa. Marker RM 202 không có tác dụng giải thích tính trạng axit phytic thấp tuy nhiên marker cho thấy biểu hiện tính đa hình giữa các dòng đột biến.
Hình 4.8. Kết quả phân tích sự thể hiện photphat tự do thế hệ M4. Các cá thể đƣợc ghi nhận là có hàm lƣợng axit phytic thấp là : 311-19; 328-1; 158-18;
144-2; 8-1; 8-3; 18-1; 122-1; 166-15 thuộc quần thể OM 1490.
Qua kết quả phân tích hình 4.8, các cá thể 311-19; 328-1 biểu hiện tính axit phytic thấp với 2 hạt biểu hiện tính axit phytic thấp ở mức 2 trong 8 hạt phân tích ở mỗi cá thể. Các cá thể 158-18 có 2 hạt biều hiện tính phytic axit thấp tƣơng đƣơng mức 2, cá thể 144-2 biểu hiện tính axit phytic thấp với 5 hạt tƣơng đƣơng mức 2, cá thể 8-1 biểu hiện tính axit phytic thấp với 2 hạt thể hiện màu tƣơng đƣơng mức 3, cá thể 8-3 với 1 hạt thể hiện màu ở mức 5 và 1 hạt ở mức 3, cá thể 18-1 thể hiện tính phytic axit thấp với 3 hạt tƣơng đƣơng mức 2, cá thể 122-1 thể hiện tính axit phytic thấp với 1 hạt ở mức 3 và 1 hạt thể hiện ở mức 4 và cá thể 166-15 thể hiện tính axit phytic thấp với 2 hạt tƣơng đƣơng mức 3.
Qua kết quả phân tích bằng phƣơng pháp sinh hóa cho thấy số cá thể biểu hiện tính axit phytic thấp là 9 trong 40 dòng phân tích, chiếm tỷ lệ 22,5 % và số cá thể biểu hiện tính axit phytic cao chiếm 77,5%. So với thế hệ M3 thì số cá thể biểu hiện tính axit phytic thấp đã tăng 12,23 %.
OM149010.27 10.27 22.5 0 5 10 15 20 25 Thế hệ M3 Thế hệ M4 OM1490
Biểu đồ 4.4. Biểu đồ so sánh tỷ lệ cá thể có hàm lƣợng axit phytic thấp giữa thế hệ M3 và M4 thuộc quần thể đột biến OM 1490.
OM1490, M422.5 22.5 77.5 0 20 40 60 80 100
axit phytic thấp axit phytic cao
OM1490, M4
Biểu đồ 4.5 . Biểu đồ thể hiện phần trăm số cá thể biểu hiện tính axit thấp và cao thuộc quần thể đột biến OM 1490 thế hệ M4.
4.2.Đánh giá tính trạng axit phytic thấp bằng Marker SSR 4.2.1Trên quần thể lúa mùa và lúa cao sản
Chúng tôi tiến hành kiểm tra kiểu gen bằng marker SSR với marker RM 207 trên các cá thể biểu hiện tính axit phytic thấp và các cá thể dùng làm đối chứng nhƣ dạng OM1490 và OMCS2000 chƣa đƣợc đột biến, lúa hoang ,Lpa-1, Xie Q. Zao. Cá thể OM1490 và OMCS2000 chƣa đƣợc đột biến này là đối chứng cho tính trạng axit phytic cao. Cá thể lúa hoang, Lpa-1, Xie Q. Zao là những cá thể có hàm lƣợng axit phytic thấp vì vậy chúng đƣợc dùng làm đối chứng cho tính trạng axit phytic thấp. Marker RM 207 liên kết chặt chẽ với gen axit phytic thấp nằm trên nhiễm sắc thể số 2. Marker RM 207 cho thấy sự khác biệt giữa các cá thể
có hàm lƣợng axit phytic cao và các cá thể có hàm lƣợng axit phytic thấp. Dựa vào những dòng đối chứng cao về hàm lƣợng axit phytic nhƣ OM 1490 và OMCS 2000 dạng bố mẹ chƣa đƣợc gây đột biến (lane 1 và lane 3) và đối chứng thấp về hàm lƣợng axit phytic nhƣ giống Lpa-1, giống lúa hoang, Xie Qing Zao (lane 2, lane 11, lane 12), các dòng khác đƣợc ghi nhận nhƣ sau: Các dòng có biểu hiện tính axit phytic thấp là OM 2718, OM 4498, lúa vàng. Theo kết quả nghiên cứu trƣớc đây kích thƣớc band hình trên bản điện di của các dòng này là 250 bp. Các dòng khác biểu hiện tính axit phytic thấp trong thử nghiệm bằng phƣơng pháp sinh hóa nhƣng không ghi nhận qua phân tích bằng marker phân tử là : OM 2490 (lane 4), nếp tóc (lane 5), OM 5731 (lane 6), Tám xoan (lane 7).
Tuy nhiên sự đa hình nầy chƣa thấy rõ sự tách kiểu gen nghiên về hàm lƣợng phytic acid thấp hay cao . Do hàm lƣợng phytic acid trong hạt gạo có liên quan đa gen khó đánh giá đơn gen và một vài marker cần phải nghiên cứu và phối hợp di truyền số lƣợng để tách đa gen nầy.
Hình 4.9:Kết quả phân tích bằng microsatellite với primer RM 207 trên quần thể lúa mùa và cao sản.
1: OM 1490 , 2: Lpa -1 , 3: OMCS 2000, 4: OM 2490 , 5: Nếp tóc ;6: OM 5731, 7: Tám xoan -93, 8: OM 2718, 9:OM 4498, 10: lúa Vàng , OM 5731, 7: Tám xoan -93, 8: OM 2718, 9:OM 4498, 10: lúa Vàng ,
