Sơ đồ 2.4: Sơ đồ tổng quan phân lập các hợp chất trong phân đoạn H6
Từ phân đoạn H6 của cao hexane thực hiện sắc ký cột silica gel với hệ dung môi giải ly Hex:EtOAc 7: 3, 8:2, 6:4, 5:5, tới EtOAc và xả cột bằng MeOH, theo dõi cột bằng
H6 5.4675 g H6.1 H6.2 H6.3 H6.4 H6.7: 0.9752 g H6.5: 0.1730 g H6.6: 0.7201 g H6.8: 0.9021 g H6.7.1 H6.7.2 H6.7.4 H6.7.3: 0.1744 g H6.7.5: 0.4394 g SKC silica gel Hex:EtOAc 7:3 SKC silica gel CHCl3:MeOH 98:2 H6.8 + H6.7.5 1.1566 g H6.5 + H6.6 + H6.7.3 1.0675 g SKC silica gel Hex:ACE 7:3 (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).1 (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).5 (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).6 (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).2 0.3589 g (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).4 0.2716 g (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).3 0.2082 g Y02 10 mg Y03 20 mg Y01 6 mg Y04
27
SKLM với các hệ dung môi giải ly Hex:EtOAc 9: 1 - 5:5.. Các thông số chi tiết được trình bày trong phần Phụ lục 2.1.Kết quả tách thành 8 phân đoạn H6.1-H6.8 (Phụ lục 2.2).
Tiếp tục, phân đoạn H6.7 thực hiện sắc ký cột silica gel với hệ dung môi giải ly CHCl3:MeOH 98:2, 97:3, 95:5, 9:1, xả cột bằng MeOH, theo dõi cột bằng SKLM với các hệ dung môi giải CHCl3:MeOH 98:2. Các thông số chi tiết được trình bày trong phần Phụ lục 2.1.Kết quả tách thành 5 phân đoạn H6.7.1-H6.7.5 (Phụ lục 2.3).
Gom các phân đoạn có vết giống nhau H6.5 + H6.6 + H6.7.3 (1.0675 g), tiếp tục sắc ký cột phân lập được các hợp chất Y01, Y02, Y03. Gom phân đoạn H6.8 + H6.7.5
(1.1566 g) phân lập được hợp chấy Y04.
2.2.4.1 Phân lập hợp chất Y01
Gom phân đoạn H6.5, H6.6 và H6.7.3 thực hiện sắc ký cột silica gel với hệ dung môi giải ly Hex:ACE 7:3, theo dõi cột bằng SKLM với các hệ dung môi giải Hex:ACE 7:3, 6:4. Các thông số chi tiết được trình bày trong phần Phụ lục 2.1.Kết quả tách thành 6 phân đoạn (Phụ lục 2.4).
Sơ đồ 2.5: Quy trình phân lập hợp chất Y01
SKC silica gel Hex:ACE 7:3 Thu được 6 phân đoạn
SKC silica gel Hex:ACE 9:1 Thu được 3 phân đoạn
H6.5+H6.6+H6.7.3 1.0675 g (H6.5+H6.6+H6.7.3).3 0.2082 g Y01 6 mg
28
CHCl3:ACE 9:1 CHCl3:ACE 9:1
Hình 2.3: SKLM (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).3 (hình trái) và Y01 ( hình phải) hiện vết bằng vanilin/H2SO4
Từ phân đoạn (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).3 thực hiện sắc ký cột silica gel, Hệ dung môi lên cột CHCl3:ACE 9:1. Giải ly với hệ CHCl3:ACE 9:1. Các thông số chi tiết được trình bày trong phần Phụ lục 2.1. Kết quả thu được chất sạch có ký hiệu tên là Y01.
2.2.4.2 Phân lập hợp chất Y02
A A4 A4.2 A4.2.2 Y02
Hex:EtOAc CHCl3: AcCE CHCl3: AcCE CHCl3: AcCE CHCl3: AcCE
6:4 95:5 9:1 8:2 85:5
29
Từ phân đoạn (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).2 có khối lượng là 0.3589 g, thực hiện sắc ký cột pha thường, pha đảo, sắc ký lớp mỏng điều chế và sắc ký lọc gel qua hạt sephadex (Phụ lục 2.5) đã phân lập được chất có ký hiệu tên là Y02 với khối lượng là 10 mg.
Sơ đồ 2.6: Quy trình phân lập hợp chất Y02
2.2.4.3 Trích ly và phân lập hợp chất Y03
Từ phân đoạn (H6.5 + H6.5 + H6.7.3).4 có khối lượng là 0.2716g, thực hiện sắc ký cột pha thường, sắc ký cột pha đảo, sắc ký lớp mỏng điều chế và sắc ký lọc gel qua hạt sephadex LH 20 (Phụ lục 2.6) đã phân lập được chất có ký hiệu tên là Y03 với khối lượng là 20 mg.
SKC silica gel Hex:EtOAc 6:4 Thu được 4 phân đoạn
A: 0.3589 g A4: 0.2782 g A4.2: 0.1466 g A4.2.2.2: 0.0161 g g A4.2.2.2: 0.0262g A4.2.2: 0.0575g
SKC silica gel CHCl3:ACE 95:5 Thu được 4 phân đoạn
SKC Rp-18 ACE:H2O 8:2 Thu được 4 phân đoạn SKC sephadex LH 20
SKC silica gel CHCl3:ACE 85:15
Y02 10 mg
SKLM điều chế
30
Hình 2.5:Các bảng mỏng trong quá trình phân lập Y03
Sơ đồ 2.7:Quy trình phân lập hợp chất Y03 B: 0.2716 g B2: 0.1325 g B2.2.3: 0.0284 g B2.2: 0.0668 g B2.2.3: 0.0328g
SKC silica gel CHCl3:ACE 9:1 Thu được 4 phân đoạn SKC silica gel CHCl3:ACE 8:2
Thu được 3 phân đoạn SKC Fp 18 MeOH:H2O 8:2
Thu được 4 phân đoạn SKC sephadex LH 20
Y03 20 mg
SKC silica gel CHCl3:ACE 75:25
Với B là phân đoạn H6.5 + H6.5 + H6.7.3).4
CHCl3:ACE 9:1 CHCl3:ACE 8:2 CHCl3:MeOH 8:2 CHCl3:ACE 85:15 CHCl3:ACE 85:15
31
2.2.4.4 Trích ly và phân lập hợp chất Y04
Từ phân đoạn H6.8 + H6.7.5 có khối lượng là 1.1566g, thực hiện sắc ký cột pha thường, sắc ký lớp mỏng điều chế và sắc ký lọc gel qua hạt sephadex LH 20 (Phụ lục 2.7) đã phân lập được chất có ký hiệu tên là Y04.
Hình 2.6:Các bảng mỏng trong quá trình phân lập Y04
Sau khi phân lập và làm bay hơi dung môi, sau 10 ngày họp chất Y04 được thực hiện sắc ký lớp mỏng, hiện vết trên sắc ký lớp mỏng không còn là một vết mà xuất hiện nhiều vết (Hình 2.7).
Hình 2.7:Hợp chất Y04 sau 10 ngày
Hex:EtOAc 5:5 CHCl3:MeOH 97:3 Hex:ACE 7:3 Hex:ACE 6:4 Hex:ACE 7:3 Hex:ACE 7:3
32
Sơ đồ 2.8:Quy trình phân lập hợp chất Y04
Với C là phân đoạn H6.8 + H6.7.5 C: 1.1566 g
C3: 0.4555 g
C3.3: 0.1323 g
C3.3.2: 0.1215 g
SKC silica gel Hex: EtOAc 5:5 Thu được 4 phân đoạn
SKC silica gel CHCl3: MeOH 97:3 Thu được 4 phân đoạn
C3.3.2: 0.1186 g
C3.3.2.2: 0.0205 g
SKC sephadex LH 20 CHCl3: MeOH 1:4
SKC silica gel CHCl3: MeOH 97:3 Thu hoàn toàn các phân đoạn
SKC silica gel Hex:ACE 6:4
Thu được 3 phân đoạn SKLM điều chế
Hex:ACE 6:4
33
CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN