Các thông số sắc ký cột phân đoạn H5: - Khối lượng cao phân đoạn: 3.5529 g - Khối lượng silica gel nạp cột: 150 g - Kích thước cột: 2.5 cm; chiều cao 27 cm
- Hệ dung môi rửa giải: H:EtOAc (7:3)
Sau khi khảo sát và lựa chọn hệ dung môi phù hợp bằng cách dùng sắc ký lớp mỏng, hệ dung môi được sử dụng SKC, silica gel là H:EtOAc (7:3) . Sau đó tiến hành sắc ký cột pha thường với cột sắc ký có đường 2.5 cm, được hứng bởi các ống nghiệm khoảng 5- 10 ml, cuối cùng sắc ký lớp mỏng với hệ giải ly phù hợp gom các phân đoạn giống nhau. Kết quả thu gồm 7 phân đoạn, ký hiệu H.5.1-H.5.7 được tóm tắt trong phụ lục 2.3. Tiếp tục sắc ký cột đi đến thu được các chất tinh sạch từ phân đoạn H5 được trình bày trên sơ đồ 2.3.
16 Chú thích: - CC : sắc ký cột - H:Ac : hexane:acetone - C:M : chlorofom:methanol - H:EA : hexane:ethylacetate H5.1 (0.76 g) H5.5 (0.34 g) H5.6 (0.48 g) H5.7 (0.36 g) H5.4 (0.3 g) H5.3 (0.38 g) H5.2 (0.34 g) H5.3.2 (250 mg) H5.3.2.3 (40 mg) H.5.3.2.3.2 (M1, 23.0 mg) CC, silicagel
Hệ dung môi H:EA (7:3)
CC, Sephadex Hệ dung môi C:M (1:4) H5.6.2 (50 mg) H5.6.3 (83.7 mg) H5.6.3.3 (43 mg) H.5.6.3.3.2 (M2, 17.2 mg) H.5.6.2.2.2 (M3, 4.0 mg) H5.6.2.2 20.0 mg) CC, silica gel, Hệ dung môi C:M (98:2) CC, silica gel, Hệ dung môi H:Ac (7:3)
(99:1) CC, silica gel Hệ dung môi C:M (98:2) CC, sephadex Hệ dung môi C:M(1:4) CC, silica gel, Hệ dung môi H:Ac (6:4) CC, silica gel,
Hệ dung môi H:Ac (8:2) CC, silica gel, Hệ dung môi C:M (99:1)
Sơ đồ 2.3 Quy trình cô lập hợp chất M1,M2,M3 từ phân đoạn H5
PHÂN ĐOẠN H5 (3.5529 g)
17
2.2.4.1 Trích ly và phân lập hợp chất M1
Khảo sát, cô lập các hợp chất của phân đoạn H5.3
- Khối lượng cao phân đoạn: 0.38 g - Khối lượng silica gel nạp cột: 20 g
- Kích thước cột: đường kính 1.5 cm; chiều cao 19.5 cm - Hệ dung môi chạy cột: C:M (99:1)
Sau khi khảo sát và lựa chọn hệ dung môi phù hợp bằng cách dùng SKLM hệ dung môi được sử dụng SKC silica gel pha thường là C:M (99:1). Sau đó tiến hành sắc ký cột pha thường với cột sắc ký có đường 1.5 cm, được hứng bởi các ống nghiệm khoảng 5 ml, cuối cùng SKLM với hệ giải ly phù hợp gom các phân đoạn giống nhau. Kết quả thu gồm 3 phân đoạn, ký hiệu H.5.3.1-H.5.3.3 được tóm tắt trong phụ lục 2.4.
Khảo sát, cô lập các hợp chất của phân đoạn H5.3.2
- Khối lượng cao phân đoạn: 250 mg - Khối lượng silica gel nạp cột: 20 g
- Kích thước cột: 1.5 cm chiều cao 19.5 cm - Hệ dung môi chạy cột: H:ACE (8:2)
Cao phân đoạn H5.3 được SKC silica gel với hệ dung môi H:ACE (8:2) với độ phân cực tăng dần, các phân đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 3 phân đoạn (H5.3.2.1-H5.3.2.3), kết quả được tóm tắt trong phụ lục 2.5.
Khảo sát, cô lập các hợp chất của phân đoạn H5.3.2.3
Khối lượng cao phân đoạn: 0.4 g
Sắc ký cột sephadex cho phân đoạn H5.3.2.3 bằng hệ dung môi CHCl3:MeOH (1:4), cột có kích thước 1.5 cm, hứng phân đoạn khoảng 3-5 ml thu được bốn phân đoạn H5.3.2.3.1- H5.3.2.3.4. trong đó ở phân đoạn H.5.3.2.3.2 là phân đoạn sạch nhất, tiến hành làm bay môi dung môi thu được 23 mg chất sạch ký hiệu M1. Các phân đoạn được tóm tắt trong phụ lục 2.6.
18
Hình 2.2 Hợp chất M1 được cô lập từ phân đoạn H5
Hệ dung môi giả ly : H:EA (7:3); CHCl3:MeOH(98:2), H:ACE (7:3)
2.2.4.2 Trích ly và phân lập hợp chất M2
Khảo sát, cô lập các hợp chất của phân đoạn H5.6
- Khối lượng cao phân đoạn: 0.48 g - Khối lượng silica gel nạp cột: 35 g
- Kích thước cột: 1.5 cm; chiều cao 19.5 cm - Hệ dung môi chạy cột: H:ACE (7:3)
Cao phân đoạn H5.6 được SKC pha thường với hệ dung môi Hexane:Acetone (7:3) các phân đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 3 phân đoạn (H5.6.1-H5.6.4), kết quả được tóm tắt trong phụ lục 2.7.
Khảo sát, cô lập các hợp chất của phân đoạn H5.6.3
- Khối lượng cao phân đoạn: 83.7 g - Khối lượng silica gel nạp cột: 20 g
- Kích thước cột: 1.5 cm; chiều cao 19.5 cm - Hệ dung môi chạy cột: CHCl3:MeOH (98:2)
Cao phân đoạn H5.6.3 được SKC pha thường với hệ dung môi CHCl3:M (98:2) , các phân đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 4 phân đoạn (H5.6.3.1- H5.6.3.4), kết quả được tóm tắt trong phụ lục 2.8.
19
Khảo sát, cô lập các hợp chất của phân đoạn H5.6.3.3
- Khối lượng cao phân đoạn: 43 g - Khối lượng silica gel nạp cột: 15 g
- Kích thước cột (burete): 1.0 cm; chiều cao 25 cm
Cao phân đoạn H5.6.3.3 được SKC silica gel với hệ dung môi H:ACE (6:4) , các phân đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 3 phân đoạn (H5.6.3.3.1- H5.6.3.3.3), trong đó thu được 17.3 mg chất sạch ký hiệu M2 kết quả được tóm tắt trong phụ lục 2.9.
Hình 2.3 Hợp chất M2 được cô lập từ phân đoạn H5 Hệ dung môi giải ly H:EtOAc (5:5); C:M( 98:2); H:ACE (6:4)
2.2.4.3 Trích ly và phân lập hợp chất M2
Khảo sát và cô lập hợp chất từ phân đoạn H.6.2
- Khối lượng cao phân đoạn: 50.0 mg - Khối lượng silica gel nạp cột: 20 g
- Kích thước cột: 1.5 cm; chiều cao 19.5 cm - Hệ dung môi chạy cột: CHCl3:MeOH (98:2)
Sau khi khảo sát và lựa chọn hệ dung môi phù hợp trên SKLM, hệ dung môi được sử dụng SKC silica gel pha thường là CHCl3:MeOH (98:2) . Sau đó tiến hành SKC silica gel với cột sắc ký có đường 1.5 cm, được hứng bởi các ống nghiệm khoảng
20
5 ml, cuối cùng SKLM với hệ dung môi giải ly CHCl3:MeOH (97:3) gom các phân đoạn giống nhau. Kết quả thu gồm 3 phân đoạn, ký hiệu H.5.6.2.1-H.5.6.2.3 được tóm tắt trong phụ lục 2.10.
Khảo sát và cô lập hợp chất từ phân đoạn H.6.2.2
- Khối lượng cao phân đoạn: 20.0 mg - Khối lượng sephadex nạp cột: 20 g - Kích thước cột: 1.5 cm; chiều cao 30 cm - Hệ dung môi chạy cột: C:M (1:4)
SKC sephadex với cột sắc ký có đường 1.5 cm, hứng bởi các ống nghiệm khoảng 2 ml, cuối cùng SKLM với hệ dung môi giải ly H:ACE (6:4) gom các phân đoạn giống nhau. Kết quả thu được gồm 3 phân đoạn, ký hiệu H.5.6.2.21- H.5.6.2.2.3, trong đó thu được 10 mg chất sạch ký hiệu là M3 và được tóm tắt trong phụ lục 2.11.
21
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN