- Để ghi tín hiệu phát hiện do Detector truyền sang
III.2 : Lựa chọn pha động
- Dựa vào các tài liệu ,Dược điển ,thành phần và tính chất của các chất cĩ
trong mẫu phân tích ...ta lựa chọn pha động phù hợp để cho quá trình rửa giải tách hồn tồn các chất cĩ trong mẫu đáp ứng đầy đủ các tiêu chuẩn của peak đã trình bày đồng
thời phải cĩ thời gian phân tiïch phù hợp nhằm tiết kiệm được dung mơi,hĩa chất,thời gian phân tích mẫu, giảm thiểu sự hoạt động của thiết bị .
- Pha động cĩ thể làm thay đổi : + Độ chọn lọc
+ Thời gian lưu
- Pha động cĩ thể làm thay đổi : + Hiệu năng tách của cột + Độ phân giải
+ Tính đối xứng của Peak
Do đĩ ,Trong một pha tĩnh đã chọn nếu ta chọn được pha động cĩ thành phần phù hợp thì ta sẽ cĩ hiệu suất tách sắc ký tốt nhất đối với hỗn hợp các chất cần phân
tích . Chính vì vậy pha động cần cĩ cầu yêu cầu sau :
+ Pha động phải trơ với pha tĩnh đã cĩ
+Pha động phải hịa tan được các chất phân tích thì mới rửa giải được chúng.( đặc biệt phải chú ý khi thay đổi pha động phải rửa cột bằng dung mơi phù hợp để khơng làm tủa các chất cĩ trong cột ,hay pha động cĩ sẵn trong cột vd : đệm phosphat rưả ngay bằng ACN hay MeOH sẽ bị kết tủa trên column)
+ Pha động phải bền vững theo thời
gian : càng bền lâu càng tốt nhưng ít nhất là chúng là pha động khơng bị phân hủy trong
suốt thời gia phân tích mẫu ).
+ Phải cĩ độ tinh khiết cao : dung mơi cho HPLC, hố chất tinh khiết phân tích .
+Phải nhanh đạt cân bằng trong quá trình sắc ký
+ Phải phù hợp với loại Detector : vd UV -
VIS thì dung mơi khơng được hấp thụ quang (vd
acid acetic ở bước sáng thấp < 220 nm) . Detector huỳnh quang thì dung mơi khơng được phát quang.
+ Phải kinh tế ,khơng quá hiếm và đắt Trong hệ sắc ký hấp phụ pha đảo ( RP - HPLC) pha động là dung mơi phân cực là :
Nước,ACN,MeOH ,acid hay Base hữu cơ và một vài Amin hay Aminoacid ..
+ Do sự thêm nước vào dung mơi hữu cơ tạo thành một pha động phân cực hơn chất hữu cơ nguyên một mình nĩ .Vd thêm nước vào ACN hay MeOH .. Sẽ tạo được pha động
+ Ngịai các dung mơi chính thì trong
thành phần pha động trong rất nhiều trường hợp tách RP- HPLC cịn cĩ thêm hỗn hợp đệm pH để ổn định pH.Chất tạo phức,tạo cặp ion để tạo ra sự rửa giải tốt nhất .
+ Khi chọn dung mơi ta thường dựa vào lực rửa rải E của dung mơi theo bảng sau:
BẢNG ĐỘ PHÂN CỰC CỦA MỘT SỐ DUNG MƠI