- Trình tự cặp mồi và mẫu dò phát hiện vi rút viêm mũi khí quản truyền nhiễm trong Bảng C.1 được tiêu chuẩn khuyến cáo sử dụng Các phòng thí nghiệm có thể sử dụng các cặp mồi, mẫu dò khác được Tổ chức Thú y thế giới (OIE) hoặc Phòng Thí
vi rút viêm mũi khí quản truyền nhiễm
Hiện nay có nhiều bộ kít ELISA phát hiện kháng thể BoHV có bán sẵn trên thị trường. Khi sử dụng phương pháp ELISA cần theo đúng hướng dẫn của nhà sản xuất. Ví dụ: có thể sử dụng bộ kít Infectious Bovine Rhinotracheitis virus (BHV1) gB Antibody Test Kit, hãng IDEXX4
H.1 Chuẩn bị nguyên liệu
- Nguyên liệu trong bộ kít để ở nhiệt độ phòng 30 min trước khi làm phản ứng.
- Pha loãng dung dịch rửa: pha dung dịch nước rửa đặc với nước cất khử ion (4.3.2) theo tỷ lệ 1:10. Tính thể tích dung dịch nước rửa cần pha: 300 µl/giếng x 3 lần rửa x 2 bước rửa x số giếng sử dụng. - Thiết lập sơ đồ bố trí mẫu: trong sơ đồ bố trí mẫu phải có đối chứng âm (Negative Control – NC), đối chứng dương (Positive Control – PC)
H.2 Cách tiến hành
1. Nhỏ 50 µl dung dịch nước rửa đã chuẩn bị tại F1 vào các giếng; Nhỏ 50 µl Positive Control vào hai giếng A1 và B1
Nhỏ 50 µl Negative Control vào hai giếng C1 và D1
Nhỏ 50 µl huyết thanh cần kiểm tra (7.4.1) vào các giếng còn lại, vỗ nhẹ vào cạnh đĩa, tránh đọng mẫu trên thành giếng
2. Đậy nắp đĩa và ủ trong tủ ấm (5.3.2) ở nhiệt độ 37 oC ± 2 oC trong 2 h hoặc ủ ở 2 oC - 8 oC qua đêm (12 - 18 h) trong khay ẩm.
3. Đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa bằng cách thêm 300 µl dung dịch nước rửa vào các giếng, rồi đổ bỏ đi. Lặp lại từ 5 lần, tránh làm khô đĩa giữa các lần rửa.
4. Nhỏ 100 µl dung dịch Conjugate vào các giếng. 6. Ủ đĩa thí nghiệm ở nhiệt độ 18 oC - 26 oC trong 1 h.
7. Đổ bỏ dung dịch trong đĩa; Rửa đĩa bằng cách thêm 300 µl dung dịch rửa 1X vào các giếng, rồi đổ bỏ đi. Lặp lại từ 5 lần, tránh làm khô đĩa giữa các lần rửa
8. Nhỏ 100 µl dung dịch TMB Subtrate N.12 vào các giếng.
9. Ủ đĩa thí nghiệm ở nhiệt độ 18 oC - 26 oC trong 10 min (tránh ánh sáng).