D. Cu trúc ca thi tb đi nd
G.M tứs ứph ngứphápứthuứ h
DNA t ứagarose gel
1 Dùngứagaroseứcóứnhi tứđ ứnóngứch yứth p
M uứagaroseứgelứcóứnhi tứđ ứnóngứch yứth pứch aứ đo nứDNAứquanứtâmứđ cức tứraứkh iứb nứgelứvàứ choứvàoứtrongứđ mứv iứt ứl ứ1:1,ứb ứsungứmu iứđ nứ n ngứđ ứ0,5 M,ứsauứđóứđ cứnóngứch yứ ứばど墜系 đ ứ hòaứtanứhoànứtoànứtrongứđ m.ứ
Dung d chứgelứcóứDNAứđ cứchi tứb ngứ phenol/chloroformứvàứk tứt a.ứ
L uứ́: DNAứđ cứtáchứchi tứb ngứph ngứphápứnàyứ khôngứthíchứh pứchoứm iứph ngứth cứthaoứtácứti pứ theo,ứdoứs ứhi nứdi nức aứcácứnhânứt ứ cứch ứtrongứ
2. Ly tâm
M uứagaroseứgelứcóứch aứb ngứDNAứquanứtâmứđ cức tứ raứvàứchoứvàoứđ mứchi t,ứlàmứnóngứđ ứhòaứtanứhoànứ
toàn,ứsauứđóứchoứdungứd chứgelứlênứtrênứm tứl pứbôngứ th yứtinhứđãứsiliconứhóaứđ tứtrongứm tức tứl cứnh ứlo iứ
0,5 ml.
C tứnàyứđ cứchoứvàoứm tứtubeứviứlyứtâmứlo iứ1,5 mL và
đ cứlyứtâmứ ứt cứđ ứcaoứ10.000-15.000 rpm trong 10- 15 phút.
DNA s ứliênứk tứv iứmàngứcònứdungứd chứđ mứs ứđiứquaứ l pứbôngứth yứtinhứvàoứtubeứviứlyứtâm.ứ
Cho đ mứr aứvàoức tứvàứr aức tứvàiứl nứb ngứcáchứlyứ
tâm nhanh.
Thay tubeứviứlyứtâmứm i,ứchoứđ mứhòaứtanứDNAứvàoức tứ vàứlyứtâmứđ ứdungứlyứ(elution)ứDNAứraứkh iứmàngứvàoứ tube.ứDungứd chứDNAứthuứđ cứcóứth ứđ cứtinhứs chứ thêmứn uức n.ứ
C ngứcóứth ứđôngứl nhứm uứgelứtr cứkhiứdùngứph ngứ phápứlyứtâmứđ ức iứthi nứhi uứsu tứthuứh iứDNA.
3 i n di vào
• Cách 1:ứM tứcáiứrãnhứnh ứđ cức tứtrongứagaroseứgelứ ngayứphíaứtr cức aứb ngứDNAứquanứtâm.ứRãnhứnàyứ đ cứlàmứđ yứb ngứglycerolứvàứgelứđ cứđi nứdiứnhanhứ tr ứl iứđ ứchuy nứDNAứt ứgelứvàoứtrongứdungứd chứ
glycerolứ(quáứtrìnhứđi nứdi cóứth ứđ cứki mứsoátứb ngứ UV).ứDungứd chứglycerol-DNAứsauứđóứđ cứchi tứb ngứ
pipette.
• Cách 2: Sau khiứđi nứdi,ứm tứkheứnh ứđ cức tứtrongứgelứ ngayứphíaứtr cứb ngứDNAứquanứtâmứvàứđ tứtrongứkheứ m tứm uứgi yứlo iứNA-45.ứGelứsauứđóứđ cứđi nứdiứtr ứl iứ vàứb ngứDNAứquanứtâmứs ứd chứchuy nứvàoứtrongứm uứ gi y.ứM uứgi yứsauứđóứđ cứr aứvàứDNAứđ cứdungứlyứ trongứđ mứb ngứcáchứđunứnóngứm uứgi yứt iứばど待系. DNA
4 Dùng th y tinh
M uứgelứquanứtâmứđ cứhòaứtanứtrongứdungứd chứmu iứ NaIứ ứn ngứđ ứkho ngứ4 M.
Sau đó,ứcácứh tứth yứtinhứđ cứb ứsungứvàoứdungứd chứ đ ứliênứk tứhi uứqu ứv iứcácứđo nứDNAứđ cứphóngứthíchứ
ứn ngứđ ứđãứchoức aứNaI.ứ
RNA,ứproteinứvàứcácứt pứch tứkhácứkhôngứliênứk tứv iứcácứ h tứth yứtinh.ứ
Ti pứtheo,ứti nứhànhứr aứvàứk tứt aứti uứth ,ứDNAứtinhứ s chứđ cứdungứlyứkh iứh tứth yứtinhứtrongứđ mứmu iứ th p.ứ
Tuy nhiên,ứph ngứphápứnàyứm cứdùứnhanhứvàứhi uứqu ứ nh ngứl iứcóứph mứviứt iứ uứh p.ứThuứh iứcácứđo nứDNAứ nh ứ(500-800 bp)ứlàứkhôngứhi uứqu ứl mứvàứcácứđo nứ l n (>15 kb) có th liên k t v i các h t th y tinh khác nhau và các s i DNA có th b phá v trong su t các chu k r a.