Một số quy trình kỹ thuật trong sinh học phân tử:

1. Quy trình tách chiết DNA từ huyết tương, huyết thanh dịch cơ thể của công ty Nam Khoa: của công ty Nam Khoa:

- Bước 1: 10µL IS+ 30 µL Silica + 900 µL Buffer vào ống eppendorf 1,5ml

- Bước 2: cho 100µL bệnh phẩm vào ống có chứa hỗn hợp trên, trộn đều bằng vortexlắc tay trong 10p

- Bước 3: vortex lần nữa trong 5s, ly tâm 13000v/15s. Hút bỏ phần nước nổi, để tránh mất Silica ta nên chừa lại khoảng 10µL trên lớp S

- Bước 4: rửa 2 lần, mỗi lần với 1ml L2 cho vào cặn Silica rồi vortex trong vài giây để hòa silica vào dung dịch, sau đó ly tâm 13000v/15s, hút bỏ phần nước nổi, chừa lại cặn silica

- Bước 5: rửa 2 lần, mỗi lần với 1ml ethanol cho vào cặn Silica rồi vortex trong vài giây để hòa silica vào dung dịch, sau đó ly tâm 13000v/15s, hút bỏ phần nước nổi, chừa lại cặn silica

- Bước 6: rửa 1 lần cuối cùng với 1ml Acetone cho vào cặn Silica rồi vortex trong vài giây để hòa silica vào dung dịch, sau đó ly tâm 13000v/15s, hút bỏ phần nước nổi, chừa lại cặn silica.

- Bước 7: làm khô Silica ở 56ºC trong 10p trong block nhiệt

- Bước 8: thêm 50µL TE 1X. Vortex cho đến khi silica tan hoàn toàn. Ủ ở 56ºC trong 10ply tâm 13000v/2p thu dịch nổi chính là sản phẩm tách chiết.

- Bước 9: 10µL dịch nổi+ 40µL TE1X Realtime PCR

2. Phản ứng khuếch đại gen (PCR)

 Kỹ thuật này được thực hiện trên hệ thống máy PCR rất hiện đại với mục đích từ 1 lượng AND rất ít ban đầu, sau khi thực hiện phản ứng PCR sẽ có 1 lượng lớn ADN để sử dụng chẩn đoán căn nguyên gây bệnh.

94ºC 94ºC

15p 15s 72ºC 72ºC 59ºC 30s 5p

30s 15ºC hot start ổn định giữ DNA

biến tính gắn mồi kéo dài 40T

PHẦN D:

Đánh giá kết quả đạt được

Sau đợt thực tập ở khoa xét nghiệm bệnh viện bệnh Nhiệt đới trung ương, bản thân em tự thấy đã thu được những kết quả đáng kể bao gồm cả 2 mảng lý thuyết và thực hành. Trong phần này, em sẽ trình bày 1 cách ngắn gọn về những gì em đã thu được trong phòng vi khuẩn và phòng miễn dịch-virus.

Phòng vi khuẩn Phòng miễn dịch- virus Củng cố

lý thuyết thực hành

- Các xét nghiệm đc thực hiện trên LS - Biết được các quy trình phân lập, xác định các loại vi khuẩn trong các bệnh phẩm khác nhau, xử lý Bp

- Quan sát được hình dạng khuẩn lạc, màu sắc của 1 số khuẩn lạc trên 1 số môi trường nuôi cấy.

+ liên cầu nhóm A : trên thạch máu sau 24h khuẩn lạc tròn trong, tan máu beta

+ Tụ cầu: thạch máu: khuẩn lạc dạng S, nhỏ, trắng, tan máu β.

-Hình thể của các vi khuẩn thường gặp:

+ E. coli: cầu trực khuẩn bắt màu gram âm.

+ Tụ cầu: Cầu khuẩn gram dương.

-Các xét nghiệm đc thực hiện -Hiểu được nguyên lý của 1 vài test miễn dịch, phản ứng ngưng kết và 1 số xét nghiệm khác trong phòng.

+test nhanh HIV, Dengue, Rickettsia, Leptospira: sắc ký miễn dịch

+Đếm số lượng CD4: Sử dụng phương pháp miễn dịch huỳnh quang 2 màu, đếm dòng chảy tế bào (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

-Cách đọc 1 test phản ứng, các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả test và các những chú ý khi tiến hành 1 test phản ứng

+ Lao: màu hồng đỏ trên nền xanh -Nắm vững cách làm kháng sinh đồ, cấy phân vùng, nhuộm gram

-Hiểu nguyên lý hoạt động máy trong phòng xét nghiệm (máy cấy máu) -Biết thêm 1 vài các kỹ thuật khác trong phòng xét nghiệm vi sinh: kỹ thuật lưu giữ chủng, kỹ thuật làm giá đường.

sớm quá hoặc muộn quá đều có thể dẫn đến kết quả không chính xác) +vạch chứng: màu rõ ràng, sắc nét +Test kit vẫn còn hạn sử dụng Hoạt động trong phòng- Tự đánh giá

-Kiến tập (đổ MT, cấy, đọc kết quả, làm KSĐ, giữ chủng…)

-Giúp đỡ nhân viên trong phòng -Đổ 1 số môi trường nuôi cấy, môi trường xác định tính chất sinh vật hóa học, môi trường giữ chủng. (thạch thường, Glycerol 15%, Skim Milk, Macconkey)

+Đảm bảo vô trùng

+kiểm tra chất lượng bằng cách để vào tủ ấm qua đêm, chủng chuẩn -Dàn tiêu bản, nhuộm Gram, soi +Thời gian nhuộm có thể khác trên lý thuyết do nồng độ thuốc nhuộm, yêu cầu về thời gian cũng như Labo nhưng vẫn không ảnh hưởng đến kết quả

+Những lỗi thường gặp: tiêu bản quá dày, không cố định, tẩy cồn không tốt, kỹ thuật sử dụng kính hiển vi chưa thuần thục

+Đánh giá: kỹ thuật thuần thục -Xử lý bệnh phẩm:

+Dịch não tủy: ly tâm, cấy vào môi

- kiến tập 1 số xét nghiệm (ELISA HIV, Serodia HIV, 1 số test nhanh hay được chỉ định ví dụ SD HIV, Dengue, chạy máy Cobas với 1 số xét nghiệm miễn dịch: định lượng HbsAg, HbeAg, Anti-HCV, HAV…) -Trực tiếp lấy mẫu ở phòng hành chính: kiểm tra thông tin bệnh nhân trên cả ống và giấy chỉ định, kiểm tra chất lượng bệnh phẩm, phân loại bệnh phẩm. Ly tâm, đánh số BP -Tham gia thực hành 1 vài test thường được chỉ định

+SD HIV1/2: 10 µL huyết thanh+ 4 giọt dd pha loãng vào giếng S, đọc kết quả sau 5-20p +SD Dengue NS1 Ag:100 µL huyết thanh, đọc kết quả sau 15-20p

+Phân:quan sát tính chất BP, lấy phân chỗ bất thường(có máu, nhày…) để cấy vào MC

Tự đánh giá

Kỹ thuật khá tốt nhưng chưa thuần thục

Kỹ thuật tốt

Quá trình thực tập ở khoa xét nghiệm bệnh viện Nhiệt đới Trung Ương kéo dài từ ngày 17/11/2013 đến ngày 12/12/2013 đã kết thúc tốt đẹp. Qua đây, em thấy được sự khác nhau giữa lý thuyết và lâm sàng. Em tự nhận thấy đợt học Vi sinh lâm sàng thực sự rất quan trọng và cần thiết với đối tượng Cử nhân kỹ thuật y học như chúng em, vừa giúp củng cố kiến thức thực hành đã được học ở trường, vừa bổ sung nhiều kiến thức lâm sàng mà thực tế mới có được để chúng em tránh được bỡ ngỡ khi ra trường. Tuy không được tiến hành nhiều kỹ thuật nhưng qua các hoạt động kiến tập và học tập các anh chị trong khoa, em đã rút ra được nhiều kinh nghiệm khi làm việc trong môi trường bệnh viện, nhất là khi làm việc trực tiếp với bệnh phẩm của người bệnh, đòi hỏi sự chính xác rất cao.Trong quá trình học và thực tập chúng em không được học về mảng kĩ thuật xét nghiệm vi khuẩn kị khí do điều kiện phức tạp ,đắt tiền về trang thiết bị , kĩ thuật . Em rất mong muốn bộ môn vi sinh và nhà trường nếu có điều kiện có thể thực hiện giảng dạy cho đối tượng chúng em.