2.3.6. Phương pháp định tính acid lactic và một số acid khác trong dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri khuẩn L. reuteri
a. Định tính acid lactic
*Nguyên tắc: Dựa trên các phản ứng màu đặc trưng của acid lactic với một số hợp chất khác nhau để xác định sự có mặt của chúng trong quá trình lên men lactic. Khi tác dụng với acid lactic thuốc thử Uferman sẽ đổi màu xanh tím sang màu vàng. Quan sát sự đổi màu của thuốc thử ta có thể xác định được khả năng tạo acid lactic của vi khuẩn.
*Cách tiến hành: Ly tâm thu dịch ngoại bào. Hút 3 ml thuốc thử uferman cho vào ống nghiệm. Hút tiếp 3 ml dung dịch nuôi cấy vừa thu được ở trên cho vào ống nghiệm. Quan sát và nhận xét sự thay đổi màu của thuốc thử. Nếu thuốc thử đổi màu từ xanh tím sang vàng rơm thì chứng tỏ vi khuẩn L. reuteri có sinh acid lactic.
b. Định tính acid acetic
*Nguyên tắc: Dựa trên phản ứng màu đặc trưng của muối acetat với thuốc thử FeCl3
để xác định sự có mặt của acid acetic. Khi muối acetat tác dụng với dung dịch FeCl3 sẽ
xuất hiện màu đỏ hồng của acetat sắt (III).
*Cách tiến hành: Ly tâm thu dịch ngoại bào, thêm quá thừa bột CaCO3, lắc kỹ cho hết
sủi bọt, lọc. Nhỏ vài giọt thuốc thử FeCl3 vào dịch lọc. Quan sát và nhận xét hiện tượng. Nếu xuất hiện màu đỏ hồng chứng tỏ dịch nuôi cấy có chứa acid acetic.
c. Định tính acid citric
*Nguyên tắc: Dựa trên phản ứng tạo tủa có màu đặc trưng của muối citrate với thuốc thử CaCl2 để xác định sự có mặt của acid citric. Muối citrate tạo tủa trắng với thuốc thử CaCl2 khi đun nóng.
19
*Cách tiến hành: Ly tâm thu dịch ngoại bào, chuyển dạng acid về dạng muối citrate
bằng NaOH. Thêm dung dịch CaCl2 rồi tiến hành đun sôi trên ngọn lửa đèn cồn. Quan
sát và nhận xét hiện tượng. Nếu xuất hiện tủa có màu trắng thì chứng tỏ dịch nuôi cấy có chứa acid citric.
20
CHƢƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BẢN LUẬN