kiểm định như B. subtilis và B. cereus đại diện cho vi khuẩn gram (+), E. coli đại diện cho vi khuẩn gram (-). Đây là một đặc điểm không thường gặp ở các vi khuẩn acid lactic. Do đó, vi khuẩn của các chủng Lactobacillus reuteri phân lập từ sữa mẹ biểu hiện hoạt tính kháng khuẩn chống lại các mầm bệnh lâm sàng phổ biến. Nó cũng thể hiện tính chất của một loại Probiotic tốt. Tiến hành so sánh vòng ức chế tạo bởi reuterin trong dịch nuôi cấy của L. reuteri trên B. subtilis, B. cereus vàE. coli. Kết quả cho thấy về mặt định tính, vòng ức chế của L. reuteri trên B. subtilis và B. cereus
trong, to, và rõ hơn so với E. coli.
Lactobacillus reuteri có thể được coi là một tác nhân trị liệu sinh học trong ức chế mầm bệnh đường ruột. Điều chỉnh vi sinh vật bằng probiotic đã được chứng minh là điều chỉnh chức năng miễn dịch và tăng cường sự đa dạng lợi khuẩn chống lại mầm bệnh. Do đó, việc bổ sung men vi sinh sữa mẹ phù hợp vào sữa bột có thể là một biện pháp thay thế mới để bắt chước một số tác dụng chức năng của sữa mẹ ở trẻ em không được bú sữa mẹ. Vì vậy một yếu tố góp phần khác là sự quan tâm đang phát triển trong các ứng dụng có thể có của sự can thiệp của vi khuẩn như là một chiến lược để ngăn ngừa một số bệnh truyền nhiễm.
Tóm lại, L. reuteri sản xuất ra có hoạt tính ức chế đối với các vi khuẩn kiểm định như B. subtilis và B. cereus đại diện cho vi khuẩn gram (+), E. coli đại diện cho vi khuẩn gram (-). Vòng ức chế tạo bởi reuterin trong dịch nuôi cấy của L. reuteri trên B. subtilis và B. cereus trong, to và rõ hơn so với E. coli.
3.2.2. Khảo sát khả năng sinh acid lactic và một số acid khác của vi khuẩn L. reuteri reuteri
L. reuteri thuộc nhóm vi khuẩn acid lactic cho nên acid lactic là sản phẩm chuyển hóa cuối cùng trong quá trình lên men trao đổi chất. Các acid lactic được sản xuất bởi L. reuteri thông qua quá trình lên men glucose là rất quan trọng vì acid lactic đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát pH đường ruột, từ đó hạn chế sự phát triển của nhiều vi khuẩn gây bệnh. Giúp duy trì cân bằng hệ vi sinh đường ruột, bảo vệ cơ thể khỏi những tác nhân xâm nhập và bảo vệ đường ruột, tăng cường chức năng miễn dịch … Do đó việc xác định khả năng sinh acid lactic cũng như một số các acid khác của vi khuẩn L. reuteri cũng là là một tiêu chí quan trọng trong đề tài.
29
Mục đích: Xác định khả năng sinh acid lactic và một số acid khác: acid acetic, acid citric trong dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri.
3.2.2.1. Định tính acid lactic
Quan sát hiện tượng nếu dung dịch chuyển từ màu xanh tím sang màu vàng chứng tỏ dung dịch có chứa acid lactic.
Kết quả:
Hình 3.6: Kết quả định tính acid lactic trong dịch nuôi cấy L. reuteri
Ống 1 và 2 làm đổi màu thuốc thử Ufermann từ xanh tím sang vàng rơm chứng tỏ dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri có chứa acid lactic.
3.2.2.2. Định tính acid acetic
Quan sát hiện tượng, nếu ống nghiệm nào xuất hiện màu đỏ hồng thì chứng tỏ có chứa acid acetic.
Kết quả:
30
Sau khi nhỏ thuốc thử FeCl3 vào dịch lọc: Ống 1 và 2 có xuất hiện màu đỏ hồng còn
ống 3 thì không đổi màu chứng tỏ trong dịch nuôi cấy có chứa acid acetic.
3.2.2.3. Định tính acid citric
Quan sát hiện tượng, nếu ống nghiệm 2 xuất hiện kết tủa màu trắng thì chứng tỏ dịch nuôi cấy có chứa acid citric.
Kết quả:
Hình 3.8: Kết quả định tính acid citric trong dịch nuôi cấy L. reuteri
-Ống 1: xuất hiện kết tủa trắng.
-Ống 2: không xuất hiện kết tủa trắng.
Chứng tỏ trong dịch nuôi cấy không chứa acid citric. *Nhận xét và bàn luận:
Từ kết quả tìm thấy ở trên, có thể kết luận sơ bộ rằng dịch nuôi cấy vi khuẩn L.
reuteri có chứa acid lactic, acid acetic và không chứa acid citric. Kết quả thực nghiệm xác định sự có mặt của acid lactic và acid acetic này cũng phù hợp với nghiên cứu đã có về khả năng sản xuất acid lactic và một số acid hữu cơ khác cụ thể acid acetic của vi khuẩn L. reuteri. Trong nghiên cứu này tác giả đã ghi nhận sự có mặt của acid lactic và acid acetic trong dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri. Vi khuẩn L. reuteri là vi khuẩn thuộc nhóm vi khuẩn lactic, sản xuất đa sản phẩm cuối cùng (heterofermentic) do đó acid lactic là sản phẩm cuối cùng của quá trình lên men trao đổi chất [17] [26].
31
Tuy nhiên, kết quả định tính các acid lactic có trong dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri của đề tài chỉ mới ghi nhận sự có mặt của acid lactic và acid acetic, và không có mặt của acid citric. Điều này có thể giải thích như sau: Không ngoại trừ khả năng acid citric có thể có mặt trong dịch nuôi cấy nhưng là sản phẩm phụ với một lượng nhỏ mà các phản ứng định tính này không nhận ra được, hoặc các acid này có thể phản ứng với acid lactic hoặc ethanol có trong dịch nuôi cấy để tạo thành ester, do đó mà kết quả định tính ra âm tính. Mặt khác lượng sản phẩm tạo ra phụ thuộc nhiều vào chủng giống, điều kiện nuôi cấy: môi trường, pH…
Tóm lại, trong phạm vi đề tài này, do chưa có đủ điều kiện để thử nghiệm các phương pháp định tính khác cũng như điều kiện nuôi cấy khác, việc xác định sự có
mặt của các acid trong dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri tạm dừng lại ở việc kết luận:
dịch nuôi cấy vi khuẩn L. reuteri có chứa acid lactic, acid acetic và không chứa acid
citric.
Kết luận kết quả của mục 3.2 (khảo sát một số đặc tính probiotic của vi khuẩn L.
reuteri) trong dịch nuôi cấy của vi khuẩn có sản xuất ra chất kháng khuẩn có tác dụng ức chế trên các vi khuẩn B. subtilis, B. cereus và E. coli và có chứa acid lactic acid acetic nhưng không có acid citric.
32