1. Kĩ thu t phân l p vi sinh v tậ ậ ậ
Trong t nhiên, ph n l n vi sinh v t t n t i l n v i nhau trong m t t p h p bao g m nhi u ự ầ ớ ậ ồ ạ ẫ ớ ộ ậ ợ ồ ề
vi sinh v t khác nhau. Đ có th nghiên c u tính ch t ho c ng d ng c a vi sinh v t, ậ ể ể ứ ấ ặ ứ ụ ủ ậ
thường ph i phân l p chúng ra thành nh ng vi sinh v t riêng r .ả ậ ữ ậ ẽ
Các phương pháp dùng đ phân l p vi sinh v t là phể ậ ậ ương pháp đ đĩa, phổ ương pháp dàn đ u và phề ương pháp c y ria.ấ
1.1 Phương pháp đ đĩaồ
Nguyên lý: m t lộ ượng nh vi sinh v t đã pha loãng đỏ ậ ược tr n đ u v i môi trộ ề ớ ường agar nóng ch y và đả ược đ vào h p petri đã vô khu n. Sau th i gian nuôi c y thích h p, vi sinh v t s ổ ộ ẩ ờ ấ ợ ậ ẽ
m c thành nh ng khu n l c riêng r . M i khu n l c s ch bao g m m t lo i vi sinh v t ọ ữ ẩ ạ ẽ ỗ ẩ ạ ẽ ỉ ồ ộ ạ ậ
thu n chùng.ầ
N u ch y 3 ng nghi m có ch a 19 ml môi trấ ả ố ệ ứ ường dinh dưỡng đ c, đ t vào b đi u ặ ặ ể ề
nhi t có nhi t đ 4550 oCệ ệ ộ
Hút 1ml dung d ch ch a h n h p vi sinh v t c n phân l p cho vào ng nghi m th nh t, ị ứ ỗ ợ ậ ầ ậ ố ệ ứ ấ
l c kĩ trên vortex, ta có đ pha loãng 1/20.ắ ộ
Hút 1ml dung d ch đ pha loãng 1/20 sang ng nghi m th 2, l c kĩ, ta có đ pha loãngị ở ộ ố ệ ứ ắ ộ 1/400.
Hút 1ml dung d ch đ pha loãng 1/400 sang ng nghi m th 3, l c kĩ, ta có đ pha ị ở ộ ố ệ ứ ắ ộ
loãng 1/8000.
Đ 3 ng nghi m vào 3 h p petri đã vô khu n, đ ngu i và nuôi c y v trí l t ngổ ố ệ ộ ẩ ể ộ ấ ở ị ậ ượ ởc nhi t đ thích h p.ệ ộ ợ
Sau th i gian nuôi c y, tách riêng t ng khu n l c riêng r .ờ ấ ừ ẩ ạ ẽ
1.2 Phương pháp dàn đ uề
Nguyên lý: m t lộ ượng nh vi sinh v t đã đỏ ậ ược pha loãng trước được dàn đ u lên trên bề ề m t đĩa petri có ch a môi trặ ứ ường dinh dưỡng thích h p.ợ
Đ môi trổ ường agar nóng ch y vào h p petri vô khu n và đ cho đ c l iả ộ ẩ ể ặ ạ
Hút 0,1ml dung d ch ch a h n h p vi sinh v t c n phân l p các đ pha loãng khác nhauị ứ ỗ ợ ậ ầ ậ ở ộ b ng pipetman vào đĩa petri và dàn đ u kh p b m t h p b ng que trang vô khu n.ằ ề ắ ề ặ ộ ằ ẩ
L t ngậ ược h p có ch a vi sinh v t, đ vào t m 35ộ ứ ậ ể ủ ấ ở oC trong 48 h Sau đó tách r i các khu n l c m c trên b m t môi trờ ẩ ạ ọ ề ặ ường đ c.ặ
1.3 Phương pháp c y riaấ
Nguyên lý: que c y đấ ượ ử ục s d ng đ c y ria nhi u l n h n h p vi sinh v t c n phân l p ể ấ ề ầ ỗ ợ ậ ầ ậ
trên kh p b m t môi trắ ề ặ ường đ c trong h p petri. Sau m i l n c y ria, vi sinh v t s b tách ặ ộ ỗ ầ ấ ậ ẽ ị
d n ra kh i h n h p và phát tri n thành m t khu n l c riêng r .ầ ỏ ỗ ợ ể ộ ẩ ạ ẽ
H đ que c y, làm ngu i và l y m t vòng que c y đ y h n h p vi sinh v t c n phân ơ ỏ ấ ộ ấ ộ ấ ầ ỗ ợ ậ ầ
l p.ậ
Nghiêng hé m h p petri, dùng que c y v ch nh ng đở ộ ấ ạ ữ ường song song m t ph n c a ở ộ ầ ủ
h p.ộ
H đ que c y, làm ngu i và g ch nh ng đơ ỏ ấ ộ ạ ữ ường song song ph n khác c a h pở ầ ủ ộ
L p l i bặ ạ ước trên.
L t ngậ ược h p petri có ch a vi sinh v t vào t m 35ộ ứ ậ ủ ấ ở oC trong 48h. Sau đó tách r i các ờ
khu n l c m c trên b m t môi trẩ ạ ọ ề ặ ường đ c.ặ
Nuôi c y trong môi trấ ường l ng:ỏ
Vi sinh v t có th phát tri n t t trong m t l p m ng môi trậ ể ể ố ộ ớ ỏ ường l ng ( 10% th tích bìnhỏ ể tam giác) đi u ki n nuôi c y tĩnh. V i l p ch t l ng dày h n (30% th tích) thì c n ở ề ệ ấ ớ ớ ấ ỏ ơ ể ầ
thêm không khí b ng cách l c hay s c khí.ằ ắ ụ
Nuôi c y trong môi trấ ường đ cặ
Nuôi c y vi sinh v t trong ng th ch nghiêng ho c th ch đĩa.ấ ậ ố ạ ặ ạ
Nuôi c y vi sinh v t vi hi u khíấ ậ ế
Vi sinh v t vi hi u khí là nhóm vi sinh v t phát tri n t t nh t trong môi trậ ế ậ ể ố ấ ường có hàm lượng khí CO2 l n và hàm lớ ượng khí O2 nh h n so v i trong khí quy n. Đ nuôi c y ỏ ơ ớ ể ể ấ
nhóm vi sinh v t này ngậ ười ta s d ng bình kín có đ t n n đ lo i tr Oử ụ ố ế ể ạ ừ 2 và tăng khí CO2
Nuôi c y vi sinh v t k khíấ ậ ị
S d ng môi trử ụ ường có tính kh , quá trình nuôi c y th c hi n trong t nuôi c y k khí, trongử ấ ự ệ ủ ấ ị đó không khí được hút h t ra ngoài b ng b m chân không, sau đó đế ằ ơ ược thay b ng COằ 2 ho c ặ