3.1.5.1 Nguyên tắc của phương pháp
PSP trong mẫu được ly trích hai lần bằng dung dịch acid acetic 0,03M, sau đó được lọc qua màng lọc mẫu. Dịch trích sau lọc được dùng để phân tích PSP trên thiết bị UPLC-MS/MS.
3.1.5.2 Đồng hóa mẫu
Nghêu được rửa sạch vỏ bên ngoài trước khi mở vỏ. Nhúng nhanh thịt nghêu trong nước để loại bỏ cát sạn và các tạp chất khác. Khi lấy thịt nghêu ra khỏi vỏ cần tránh làm hư hại thịt nghêu.
Cân 1 lượng khoảng 150 g thịt nghêu và cho lên rây có cỡ số 5, để yên trong 5 phút để loại bỏ hết nước. Thịt nghêu sau đó được nghiền trong máy nghiền cho đến khi đồng nhất hoàn toàn.
3.1.5.3 Chuẩn bị mẫu
Chuẩn bị mẫu trắng (mẫu dùng để xác định độ nhiễu nền mẫu):
Mẫu trắng là mẫu không chứa các độc tố thuộc nhóm PSP.
Cân lần lượt 10 mẫu nghêu trắng, mỗi mẫu 2,00 gam ± 0,1 gam vào các ống ly tâm nhựa 15ml. Sau đó tiến hành xử lý mẫu theo hướng dẫn ở mục xử lý mẫu.
Dịch trích của các mẫu này được dùng để phân tích trên UPLC- MS/MS, sau đó xác định độ nhiễu nền của mẫu nghêu trắng.
Chuẩn bị mẫu thêm chuẩn (mẫu dùng để xác định LOD, độ thu hồi, độ lặp lại và độ tái lặp của phương pháp):
Cân lần lượt 8 mẫu trắng, mỗi mẫu 2,00 gam ± 0,1 gam vào các ống ly tâm nhựa 15ml. Hút lần lượt các dung dịch chuẩn cho vào các ống nghiệm chứa mẫu trắng, lắc kỹ các ống nghiệm trên máy lắc và để yên ít nhất 30 phút cho các chuẩn thấm vào mẫu. Sau đó tiến hành xử lý mẫu theo hướng dẫn ở mục xử lý mẫu.
Dịch trích của các mẫu này được dùng để phân tích trên UPLC- MS/MS, sau đó xác định các giá trị LOD, độ thu hồi, độ lặp lại và độ tái lặp.
Chuẩn bị mẫu để đánh giá độ nhiễu của nền mẫu đến chất phân tích:
Cân lần lượt 3 mẫu mẫu trắng, mỗi mẫu 2,00 gam ± 0,1 gam vào các ống ly tâm nhựa 15ml. Sau đó tiến hành xử lý mẫu theo hướng dẫn ở mục xử lý mẫu. Mẫu được định mức đến 10 ml bằng dung dịch 0,03M Acetic acid. Dung dịch này được dùng để pha dung dịch chuẩn ở mức LOD.
Hút lần lượt 100 µL (STX 1 µg/ml , NEO 1 µg/ml) và 400 µL (GTX1,4 1 µg/ml, GTX2,3 1 µg/ml) các dung dịch chuẩn vào 3 bình định mức 10 ml và định mức đến vạch bằng 3 dung dịch mẫu đã chuẩn bị ở trên. Sau đó, các dung dịch chuẩn này được phân tích trên UPLC-MS/MS cùng với các dung dịch chuẩn được pha trong hóa chất tinh khiết. So sánh tỉ lệ đáp ứng của chuẩn pha trong dịch trích của mẫu và chuẩn pha trong hóa chất tinh khiết, từ đó đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu đến chất phân tích.
3.1.5.4 Xử lý mẫu