Để khảo sát quá trình hấp phụ trên cột nhựa, tiến hành thí nghiệm nhƣ ở mục 2.3.5.1 với các thông số đã lựa chọn.
29
Hình 3.3: SKLM biểu diễn sự xuất hiện các vết theo thể tích dịch nạp Chú thích: 3,6…24: thời điểm hấp phụ (BV)
M: dịch ban đầu
Nhận xét: Dựa trên hình ảnh các vết trên SKLM thấy rằng, các vết của dịch chè xanh bắt đầu xuất hiện vào thời điểm 18 BV. Kết quả này cũng hoàn toàn phù hợp với kết quả định lƣợng bằng HPLC trên hình 3.4.
Tại 3 BV đầu tiên, theo kết quả định lƣợng bằng HPLC, nồng độ EGCG trong dịch ra khỏi cột là 10,0 µg/ml. Tuy nhiên, hình ảnh trên SKLM lại không hiện vết. Điều này có thể do nồng độ dịch quá loãng nên lƣợng chất rắn đƣa lên bản mỏng không đủ để hiện vết dƣới ánh sáng tử ngoại 254nm. Sau đó từ thời điểm 6 BV đến 15 BV, kết quả định lƣợng EGCG các mẫu đều bằng 0 µg/ml. Điều này cho thấy EGCG đã bị hấp phụ hoàn toàn trên cột nhựa HPD826. Thời điểm 3 BV đầu tiên, EGCG vẫn xuất hiện trong dịch ra khỏi cột. Do trong giai đoạn này, dòng chảy có thể chƣa ổn định, các catechin trong đó có EGCG chƣa đủ thời gian để hấp phụ trên cột nhựa, tuy nhiên hàm lƣợng EGCG mất mát cũng không đáng kể (10,0 µg/ml) . Từ 18 BV trở đi, nồng độ EGCG trong dịch chảy khỏi cột bắt đầu tăng mạnh đến thời điểm 33 BV và không đổi kể từ đó. Hiện tƣợng này có thể là do sự hấp phụ trên cột nhựa đang gần đạt tới trạng thái
EGCG Cafein
30
bão hòa, khả năng hấp phụ EGCG trên cột giảm dần và bắt đầu tại thời điểm 33 BV, cột nhựa không còn khả năng hấp phụ thêm EGCG nữa.
Hình 3.4: Biểu diễn nồng độ EGCG theo thể tích dịch nạp
Theo tài liệu [18], điểm “leakage point” đƣợc định nghĩa là điểm mà tại đó nồng độ EGCG trong dịch ra khỏi cột bằng 10% nồng độ dịch hấp phụ ban đầu. Điểm “leakage point” trong thí nghiệm này nằm gần với thời điểm 18 BV và trƣớc thời điểm 21 BV. Khi càng tăng thể tích dịch nạp, khả năng hấp phụ EGCG lên nhựa không tăng nhiều mà bên cạnh đó lại tăng sự hấp phụ của các tạp chất trong dịch chè. Hình ảnh sắc ký đồ cũng thể hiện tại 18BV, vết của EGCG bắt đầu xuất hiện nhƣng các vết tạp khác vẫn chƣa xuất hiện chứng tỏ cafein vẫn tiếp tục đƣợc hấp phụ lên cột nhựa macroporous HPD826. Vì vậy, để giảm lƣợng tạp chất trong sản phẩm thì thể tích dịch ban đầu nạp lên cột tối đa đƣợc chọn là 18 BV .