Mẫu nghiên cứu sau khi đã rửa sạch, phơi khô, thái nhỏ được ngâm chiết ba lần bằng dung môi methanol, sử dụng thiết bị chiết siêu âm ở 40oC trong vòng 3 giờ. Dịch chiết thu được lọc qua giấy lọc, gộp dịch lọc và cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cao toàn phần.
Phân tán cao chiết này trong hỗn hợp MeOH : nước (1:1, v/v) rồi chiết phân bố với các dung môi theo thứ tự tăng dần độ phân cực là n-hexan, dichloromethan và ethyl acetat. Các phân đoạn n-hexan, dichloromethan và ethyl acetat được cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cao từng phân đoạn tương ứng.
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
Phân đoạn nước Phân đoạn dichloromethan Phân đoạn ethyl acetat Phân đoạn n-hexan Cao tổng methanol Dịch chiết methanol Dược liệu
Phân đoạn nước Phân đoạn nước
Chiết với methanol
Phân tán trong MeOH : nước (1:1) Lắc phân đoạn với n-hexan
Thu hồi dung môi
Thu hồi dung môi
Lắc với dichloromethan
Lắc với ethyl acetat Thu hồi dung môi
Thu hồi dung môi
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
Lựa chọn phân đoạn có tiềm năng, tiến hành xử lý và phân lập. Quá trình nghiên cứu phân lập hợp chất từ các phân đoạn đã chọn chủ yếu sử dụng phương pháp sắc ký cột. Các phân đoạn trong quá trình phân lập được theo dõi bằng sắc ký lớp mỏng và sắc ký lớp mỏng điều chế.
Sắc ký cột (CC): được tiến hành với chất hấp phụ là silica gel pha thường và pha đảo, lựa chọn hệ dung môi có độ phân cực tăng dần. Silica gel pha thường cỡ hạt là 0,063-0,200 mm (Merck) và cỡ hạt 0,040-0,063 mm (Merck) với các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau.
Sắc ký lớp mỏng (TLC): được thực hiện trên bản mỏng nhôm tráng sẵn silica gel 60 F254 (Merck), độ dày 0,2 mm và RP-18F254s, độ dày 0,25 mm (Merck). Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm, sau đó được phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol và đốt nóng trên bếp điện từ.
Sắc ký lớp mỏng điều chế (pTLC): được thực hiện trên bản mỏng nhôm tráng sẵn silica gel 60G F254, độ dày 1,0 mm (Merck). Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol, đốt nóng trên bếp điện từ, ghép lại bản mỏng như cũ để xác định vùng chất bằng dung môi thích hợp.