Nồng độ chất nghiờn cứu được xỏc định bằng phương phỏp HPLC.
Nguyờn tắc của phương phỏp HPLC là dựa trờn sự hấp phụ và giải hấp phụ chọn lọc của cỏc hợp chất trong cột sắc ký với pha động nhất định trong điều kiện ỏp
suất cao. Nhờ đú người ta cú thể tỏch riờng từng cấu tử của hỗn hợp và sử dụng Detector UV hoặc Detector - Diode Array để đo phổ hấp thụ của cỏc cấu tử.
- Điều kiện đo:
+ Cột Hypersil C18 ( 200 x 4 mm )
+ Tỷ lệ pha động Axetonitril : H2O = 65 : 35 (theo thể tớch ) + Áp suất: 280 bar.
Cỏch tiến hành:
+ Sau khi đặt xong cỏc thụng số cần thiết, tiến hành rửa bơm, rửa cột, đợi đường nền và ỏp suất ổn định khoảng 30 - 45 phỳt.
+ Dựng micrụxilanh lấy 5 àl dung dịch phõn tớch đưa vào buồng mẫu. Mỏy sẽ tự động ghi cỏc thụng số: thời gian lưu (tR), chiều cao pic và tớnh diện tớch cũng như thành phần phần trăm (%) của từng cấu tử trong hỗn hợp.
- Nồng độ DNT trong dung dịch được xỏc định bằng phương phỏp HPLC ở điều kiện: + Tớn hiệu đo: λ = 245 nm
+ Tốc độ dũng: 0,42 ml/phỳt + Thể tớch bơm mẫu: 5,0àl
+ Thời gian lưu (tR), ứng với pic của DNT là 9,0 phỳt + Đơn vị đo: mg/l
- Nồng độ DNP trong dung dịch được xỏc định bằng phương phỏp HPLC ở điều kiện: + Tớn hiệu đo: λ = 365 nm
+ Tốc độ dũng: 0,35 ml/phỳt + Thể tớch bơm mẫu: 5,0àl
+ Thời gian lưu (tR), ứng với pic của DNP là 7,0 phỳt + Đơn vị đo: mg/l
- Nồng độ TNR trong dung dịch được xỏc định bằng phương phỏp HPLC ở điều kiện: + Tớn hiệu đo: λ = 420 nm
+ Tốc độ dũng: 0,35 ml/phỳt + Thể tớch bơm mẫu: 5,0àl
+ Đơn vị đo: mg/l