3.3.1. Hợp chất HD1-CDCl3-1H
Tính chất: là một chất kết tinh ở dạng tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy: 188-189 oC, không tan trong nước, tan trong ether, EtOH, MeOH.
Phổ khối lượng ESI-MS:m/z427[M+H]+. Phổ NMR trình bày ở Bảng 3.2.
Bảng 3.2. Dữ liệu phổ NMR của hợp chất HD1-CDCl3-1H và chất so sánh L Vị trí C DEPT δC (L) ppm δC (1) ppm δH (1) ppm, J: Hz δH (L) ppm, J: Hz 1 CH2 38,7 38,8 2 CH2 27,5 27,4 3 CH 79,0 79,1 3,17 dd (11,5; 5,0) 3,18 dd (11,5; 5,0) 4 C 38,9 38,9 5 CH 55,3 55,4 6 CH2 18,3 18,4 7 CH2 34,3 34,4 8 C 40,9 40,8 9 CH 50,5 50,5 10 C 37,2 37,2 11 CH2 21,0 20,9 12 CH2 25,2 25,2 13 CH 38,1 38,1 14 C 42,9 42,8 15 CH2 27,5 27,4 16 CH2 35,6 35,6 17 C 43,0 43,1
18 CH 48,0 48,4 19 CH 48,3 48,1 2,38 ddd (11,0; 11,0; 6,0) 2,36 ddd (11,0; 11,0 ;6,0) 20 C 150,9 150,9 21 CH2 29,9 29,9 22 CH2 40,0 40,1 23 CH3 28,0 28,0 0,98 s 0,96 s 24 CH3 15,3 15,4 0,76 s 0,76 s 25 CH3 16,1 16,1 0,85 s 0,84 s 26 CH3 16,0 16,1 1,05 s 1,04 s 27 CH3 14,6 14,5 0,94 s 0,95 s 28 CH3 18,0 18,0 0,79 s 0,79 s 29 CH3 19,3 19,3 1,67 s 1,69 s 30 CH2 109,3 109,4 4,68 s 4,66 s
Ghi chú: δC (L),δH (L) của 3β-hydroxylup-20 (29)-en [13,15].
Hình 3.7. Phổ ESI-MS của HD1-CDCl3-1H
Phổ khối lượng ESI-MS (Hình 3.7) xuất hiện pic ion phân tử tại m/z 427 [M+H]+ cho phép xác định công thức phân tử là C30H50O (M=426). Phổ NMR chỉ ra rằng hợp chất này là hợp chất triterpenoid có khung lup-20(29)-en. Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu của 7 nhóm methyl CH3 cộng hưởng trong vùng trường mạnh, trong đó có 6 nhóm methyl bậc ba CH3 tại các giá trị δH 0,98 (3H, s, H-23); 0,76 (3H, s, H-24); 0,85 (3H, s, H-25); 1,05 (3H, s, H-26); 0,94 (3H, s, H-27); 0,79 (3H, s, H-28) và 1 tín hiệu CH3 tại (3H, br s, H-29) thuộc nhánh isopropenyl. Tín hiệu tại 3,38 (1H, dd, J = 11,5; 5,0 Hz, H-3) khẳng định sự có mặt của một nhóm oximethin (CHO). Tín hiệu 2 proton thuộc nhánh isopropenyl tại δH 4,68 (1H, d, J = 1,0 Hz, Ha-30) và 4,56 (1H, d, J = 1,0 Hz, Hb-30) (Hình 3.7).
Hình 3.8. Phổ 13C-NMR của hợp chất HDl-CDCl3-1H
Phổ 13C-NMR của 1 bao gồm tín hiệu của 30 nguyên tử carbon. Phân tích các tín hiệu trên phổ DEPT xác nhận được gồm 7 carbon methyl (CH3), 11 carbon methylen (CH2), 6 carbon methin (CH) và 6 carbon bậc bốn (C). Nhánh isopropenyl được xác nhận bởi các tín hiệu của 1 carbon methylen tại 109,4 (C- 29) cùng với tín hiệu của 1 carbon bậc bốn tại 150,9 (C-20) và 1 carbon methyl 19,3 (C-29). Ngoài ra, tín hiệu của 1 carbon oximethin tại 79,1 (C-3) cho phép xác nhận có 1 nhóm hydroxyl trong phân tử của hợp chất (Hình 3.8).
So sánh số liệu phổ NMR của hợp chất HDl-CDCl3-1H với số liệu của hợp chất triterpen khung lup-20(29)-en đã biết là 3β-hydroxylup-20(29)-en [13,15,21] nhận thấy có sự giống nhau ở các vị trí tương ứng (Bảng 4). Nhận định này được khẳng định thêm khi xét đến hằng số tương tác J của proton H- 3. Proton H-3 cộng hưởng tại 3,17 (dd, J=11,5; 5,0 Hz), tín hiệu doublet này cho thấy hằng số tương tác J lớn vì vậy H-3 ở vị trí axial (α) hay alpha dẫn tới OH tại C-3 là equatorial (e). Từ các phân tích nêu trên hợp chất HDl-CDCl3-1H được xác định là 3β-hydroxylup-20(29)-en.
3.3.2. Hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD
Hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD thu được dưới dạng tinh thể hình kim, không màu, không mùi, nhiệt độ nóng chảy: 155-157oC, [α]D25 = - 45o (c = 0,05 trong CHCl3). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3), δ (ppm): 5,35 (1H, d, J = 5 Hz, H-6), 5,11 (1H, dd), 5,03 (1H, dd), 3,52 (1H, m, H-3), 1,01(3H, s, H-19). 13C-NMR (100 MHz, CDCl3), δ (ppm): 140,6 (C-5), 138,5 (C-22), 129,2 (C- 23), 121,8 (C-6), 71,9 (C-3), 56,8 (C-14), 55,9 (C-17), 51,3 (C-9), 50,2 (C-24), 42,3 (C-4), 42,2 (C-12), 40,4 (C-20), 37,2 (C-7), 36,3 (C-1), 36,1 (C-13), 33,9 (C-25), 31,8 (C-8), 31,8 (C-13), 31,6 (C-16), 29,1 (C-2), 28,2 (C-28), 26,0 (C- 15), 24,2 (C-11), 21,3 (C-26), 21,0 (C-21), 19,4 (C-27), 18,7 (C-19), 12,2 (C- 29), 12,0 (C-18). Hình 3.9. Phổ 1H-NMR của hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD
Hình 3.10. Phổ 13
C-NMR của hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD
Trên phổ 1H-NMR và 13C-NMR cho thấy có ba proton olefinic ở δ 5,35 (1H, d, J = 5,0 Hz, H-6), 5,11 (1H, dd, H-22), 5,03 (1H, dd, H-23) ứng với ba cacbon ở δ 121,8 (C-6), 138,5 (C-22), 129,2 (C-23). Dựa vào dữ kiện lý hóa và so sánh phổ của stigmast-5,22-dien-3-β-ol đã công bố [16,18] thấy có sự trùng khớp vì vậy hợp chất HDl-CDCl3-Cl3CPD được xác định là stigmast-5,22- dien-3-β-ol.
Hình 3.11. Cấu trúc hóa học của hợp chất HD1-CDCl3-13CCPD
3.4. Bàn luận
So với các nghiên cứu trước đây về chi Dicliptera, khóa luận cũng đã mô tả chi tiết hơn về đặc điểm hình thái thực vật, đặc biệt về thân, lá, đặc điểm vi
phẫu, soi bột lá của loài Dicliptera chinensis (L.) Nees. Đồng thời khóa luận cũng tiến hành chiết xuất, phân lập và xác định thành phần hóa học trong lá cây Lá diễn. Các nghiên cứu về cấu tạo vi học của thân và lá cây Lá diễn có thể được sử dụng để làm tư liệu cho việc tiêu chuẩn hóa và kiểm nghiệm dược học, đồng thời các kết quả cũng góp phần phân biệt loài Dicliptera chinensis (L.)
Nees với các loài khác thuộc chi Dicliptera.
So với các loài khác trong chi Dicliptera, loài Dicliptera chinensis (L.)
Nees có những đặc điểm thực vật khác biệt: lá bắc của D. Chinensis hình trứng thuôn, không bằng nhau trong khi lá bắc của D. Clinopodia hình chữ nhật, D. resupinata hình trứng mỏng; hoa của D. Chinensis mọc thành cụm màu trắng hồng trong khi hoa của D. Suberecta mà đỏ, hoa của D.foetida mọc đơn độc màu tím nhạt, D.squarrosa màu vàng cam [2,4].
Về định tính, đã sử dụng các phương pháp hóa học và sắc ký lớp mỏng, là các phương pháp đang được sử dụng chủ yếu ở Việt nam để định tính các nhóm chất hóa học trong dược liệu. Kết quả định tính cho thấy trong lá cây Lá diễn có chứa các thành phần: acid amin, caroten, chất béo, saponin, tannin, acid hữu cơ, đường khử, flavonoid.
Qua quá trình khảo sát hệ dung môi chạy bằng sắc ký lớp mỏng, đã xác định điều kiện sắc ký phù hợp để định tính, đồng thời đây cũng là bước làm cơ sở cho quá trình phân lập và tiến tới xây dựng tiêu chuẩn của vị thuốc lá cây Lá diễn trồng ở Việt Nam. Tuy nhiên, khóa luận mới tiến hành chấm sắc ký bằng dịch chiết n-hexan, ethylacetat để có thể cung cấp thông tin đầy đủ hơn về điều kiện sắc ký phục vụ quá trình phân lập cũng như tiêu chuẩn hóa vị thuốc thì cần tiến hành trên các dịch chiết khác như MeOH, EtOH hay dịch chiết phân đoạn các dung môi hữu cơ cụ thể khác.
Về chiết xuất và phân lập: phương pháp chiết xuất bằng n-hexan, ethylacetat và phân lập các chất bằng sắc ký cột được tham khảo ở các nghiên cứu trước đó. Sau khi phân lập được 2 hợp chất và so sánh với các chất đã biết, kết quả là đã xác định được 2 hợp chất trong lá cây Lá diễn. Hai hợp chất đó là 3β-hydroxylup-20 (29)-en và Stigmast-5,22-dien-3-β-ol.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận
- Đã mô tả được đặc điểm thực vật, đặc điểm vi phẫu và xác định được tên khoa học của mẫu cây Lá Diễn thu hái tại huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định là Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees, họ Acanthaceae (họ Ô rô).
- Xác định được cấu trúc một số thành phần phân lập được từ lá của loài
Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees: Thông qua kết quả đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ tử ngoại - khả kiến, phổ khối, và phổ cộng hưởng hạt nhân, đã xác định được cấu trúc 2 hợp chất vừa phân lập được, đó là: 3β-hydroxylup-20 (29)-en và Stigmast-5,22-dien-3-β-ol.
Kiến nghị
- Triển khai phân lập các hợp chất khác từ loài Dicliptera chinensis
(Linnaeus) Nees.
- Dựa trên kết quả đã nghiên cứu về thành phần hóa học, cần nghiên cứu tác dụng sinh học của loài này về tác dụng bảo vệ gan và các tác dụng sinh học khác.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt
1 Nguyễn Bá (2014), Từ điển bách khoa thực vật học Viê ̣t Nam, NXB Giáo du ̣c Viê ̣t Nam, tr 393.
2 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2011), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập III, Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội, tr. 479-480.
3 Nguyễn Văn Chi, Trần Hơ ̣p (1999), Cây cỏ có ích ở Việt Nam, tâ ̣p I, NXB Giáo du ̣c, tr 214-215.
4 Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, tâ ̣p I, NXB Khoa ho ̣c và kỹ thuâ ̣t, tr. 957.
5 PGS.TS. Lưu Đàm Cư, Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật,Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, (2005), “Nghiên cứu chiết tách nhuộm màu thực phẩm từ kinh nghiệm sử dụng thực vật của đồng bào dân tộc thiểu số”, Trung tâm hỗ trợ nghiên cứu Châu Á, Đại học Quốc gia Hà Nội.
6 Nguyễn Thượng Dong (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, NXB Khoa học và Kỹ thuật.
7 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1990), Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thuốc, NXB y học chi nhánh thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Dược.
8 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tâ ̣p III, Nhà xuất bản trẻ, tr.73-74.
9 Đỗ Tất Lợi (2001), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr.518-520.
10 Nguyễn Chí Tôn (2015), Đông Nam Dược-2000 vi ̣ thuốc chữa bê ̣nh, tâ ̣p I, NXB Y ho ̣c, tr 542.
11 Viện Dược Liệu (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam,
NXB Khoa học và Kỹ thuật, tr.432-438.
12 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc từ thảo dược, NXB Khoa học và kỹ thuật, tr. 139-141.
Tài liệu Tiếng Anh
13 Abdullahi, S.M, Musa, A.M, Abdullahi, M.I, Sule M.Iand Sani, Y.M.(2013), “Isolation of Lupeol from the Stem-bark of Lonchocarpus sericeus (Papilionaceae)”, Scholars Academic Journal of Biosciences (SAJB), 1(1):18-19.
14 Ahmad B1, Khan MR, Shah NA, Khan RA (2013) “In vitro antioxidant potential of Dicliptera roxburghiana.” BMC Complement Altern Med, 13:140.
15 Ankita Wal, Pranary Wal, A.K. Rai, Kanwal raj (2010), “Isolation and modification of pseudohybrid plant (Lupeol)”, J.Pharm. Sci. & Res.
Vol.2(1),13-25.
16 Bibhu Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn: Isolation of Stigmast-5, 22-dien-3-β-ol from ethanolic extra of stem bark and study of antimicrobial activity, Journal of Chemistry and chemical Sciences, Vol.6(6), 574-585.
17 Charoenchai P1, Vajrodaya S, Somprasong W, Mahidol C, Ruchirawat S, Kittakoop P (2010), Antiplasmodial, cytotoxic, radical scavenging and antioxidant activities of Thai plants in the family Acanthaceae,Chulabhorn Research Institute, Bangkok, Thailand, 76(16), 1940-1943.
18 Farina Mujeeb, Preeti Bajpai, and Neelam Pathak (2014), “Phytochemical Evaluation, Antimicrobial Activity, and Determinnation of Bioactive Components from Leaves of Aegle marmelos”, BioMed Research International Vol 2,pp.1-11.
19 Gao Ya, Zhong Mingli, Zhong Jialiang, Zhang Kefeng (2014) “Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus and Justicia insularis”, Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 6, 953-956.
20 Gao YT, Yang XW, Ai TM. (2006), “Studies on the chemical constituents in herbs of ethanolic extract from herbs of Dicliptera chinensis”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 31(12), 985-987.
21 P.S. Jain, S.B. Bari (2010), “Isolation of Lupeol, Stigmatsterol and campesteron from petrolium ether extract of woody stem of Wrightia tinctoria tinctoria”, Asian Journal of plant Sciences, 9(3): 1-5.
22 Takhtajan A.L. (1997), Diversity and Classification of Flowering Plants, Columbia University Press, New York, USA.
23 Telefo PB1, Moundipa PF, Tchana AN, Tchouanguep Dzickotze C, Mbiapo FT (1998),”Effects of an aqueous extract of Aloe buettneri, Justicia insularis, Hibiscus macranthus, Dicliptera verticillata on some physiological and biochemical parameters of reproduction in immature female rats”, J Ethnopharmacol, 63(3):193-200.
24 Telefo PB1, Moundipa PF, Tchouanguep FM (2002),“Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus
and Justicia insularis”, Fitoterapia, 73(6):472-8.
25 Yinggang Luo, Chun Feng, Yajuan Tian, Guolin Zhang (2002), “Glycosides from Dicliptera riparia Phytochemistry”, 6(4), 449-454 26 Zhang K, Gao Y, Zhong M, Xu Y, Li J, Chen Y, Duan X, Zhu H(2016),
“Hepatoprotective effects of Dicliptera chinensis polysaccharides on dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis rats and its underlying mechanism”, J Ethnopharmacol, 179, 38-44.
27 ZhangK, ZhuH, GaoY(2010), “Research on active extracts of Diclipterachinensis on liver protection”, ZhongguoZhong Yao ZaZhi, 35(4): 497-498.
28 Zhang X1, Zhang J2, Jia L3, Xiao S4 (2016), “Dicliptera Chinensis
polysaccharides target TGF-β/Smad pathway and inhibit stellate cells activation in rats with dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis”.
PHỤ LỤC
Phụ lục 1: phiếu giám định tên khoa học của loài thực vật
VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT
PHÒNG THỰC VẬT
CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự do-Hạnh phúc
KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC MẪU THỰC VẬT Kính gửi: TS.Vũ Đức Lợi, Khoa Y Dược, ĐHQGHN
Chúng tôi gồm: ThS.Bùi Hồng Quang ThS. Đỗ Văn Hải
Nhận được đề nghị giám định tên khoa học một mẫu tiêu bản thực vật được thu hái tại TT.Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định mang số hiệu (Vũ Đức Lợi 09). Mẫu tiêu bản gửi đến là mẫu tiêu bản ở dạng cây tươi (có ảnh chụp chi tiết dạng sống, hoa, lá...). Mẫu tiêu bản có đủ tiêu chuẩn để giám định tên khoa học bao gồm cả cơ quan sinh dưỡng và cơ quan sinh sản. Kết quả giám định mẫu tiêu bản mang số hiệu: Vũ Đức Lợi 09
Tên khoa học: Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees. - Cây lá diễn; cây gan heo
Thuộc họ: Ô Rô: Acanthaceae