Tanshinon IIA là thành phần hoạt chất chính của đan sâm và trên cơ sở tham khảo các tài liệu và thực nghiệm, chúng tôi đã xây dựng được quá trình phân lập tanshinon IIA như hình 2.2 với các bước chiết xuất và phân lập sắc ký.
Tanshinon IIA thu được được nhận dạng trên cơ sở đầy đủ đặc điểm vật lý, phương pháp phổ và so sánh tương quan với dữ liệu trong tài liệu tham khảo về điểm chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân; đó là cơ sở cho bộ dữ liệu nhận dạng trong thiết lập chất chuẩn đối chiếu của tanshinon IIA.
3.6.2. Về phân tích HPLC
Tanshinon IIA thu được có độ tinh khiết cao trên cơ sở khảo sát SKLM và đặc biệt là sắc kí lỏng hiệu năng cao HPLC. Phương pháp phân tích HPLC thành phần này đã được khảo sát bao gồm khoảng tuyến tính, tính thích hợp hệ thống, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng và độ chính xác.
Nghiên cứu này thu được tanshinon IIA có độ tinh khiết cao và có thể phù hợp phát triển thành chất chuẩn đối chiếu. Trong nghiên cứu này chúng tôi khảo sát định lượng tanshinon IIA trong các mẫu đan sâm ở Sapa, Lào Cai. Kết quả thu được
31
là thành phần tanshinon IIA có hàm lượng 0,279%, cao hơn so với quy định theo Dược điển Trung Quốc (hàm lượng tanshinon IIA ≥ 0,2% trong dược liệu khô kiệt), kết quả này khá tương ứng với các công bố khảo sát về thành phần tanshinon IIA của Viện Dược liệu [9,16]. Kết quả thu được đóng góp thêm cơ sở khoa học về thành phần hóa học của dược liệu đan sâm trồng ở Việt Nam hiện nay.
Trong nghiên cứu tiếp theo chúng tôi đặt mục tiêu xây dựng tanshinon IIA phân lập được làm chất chuẩn. Các kết quả này làm tiền đề cho nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi.
32
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Theo mục tiêu nghiên cứu đề ra và thực hiện đầy đủ nội dung nghiên cứu chúng tôi thu được kết quả như sau:
- Phân lập và xác định được cấu trúc tanshinon IIA sử dụng các phương pháp sắc ký và các phương pháp phổ. Dữ liệu nhận dạng của tanshinon IIA bao gồm đặc điểm vật lý, dữ liệu phổ khối và phổ cộng hưởng từ.
- Xây dựng phương pháp phân tích thành phần tanshinon IIA sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao.
- Phân tích thành phần tanshinon IIA trong mẫu dược liệu đan sâm thu hái ở Sapa sử dụng trong nghiên cứu.
Các kết quả thu được làm tiền đề cho các nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi bao gồm:
- Xây dựng qui trình chiết và tinh chế tanshinon IIA làm chất chuẩn và nghiên cứu hóa học và dược lý.
- Khảo sát các tiêu chí và thẩm định để phát triển thành chất chuẩn đối chiếu tanshinon IIA phục vụ đánh giá chất lượng dược liệu đan sâm và các chế phẩm của đan sâm.
TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT
1. Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Cây thuốc và động vật
làm thuốc ở Việt Nam, tập I, Nxb. Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội, tr. 732-738.
2. Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007), Thực vật học, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 390- 400.
3. Bộ Y tế, Vụ khoa học và đào tạo (2006), Dược học cổ truyền, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 231-232.
4. Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (2007), Đảm bảo chất lượng
thuốc và một số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr. 107 – 113, tr. 216-250.
5. Bộ Y tế, Vụ khoa học và đào tạo (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y học, tr. 79-82, 84-110.
6. Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 751-752, PL 129-PL 131, PL- 239.
7. Bộ Y tế (2011), Dược liệu học I, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 255-256.
8. Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học
cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr. 8-99, 162-196, 234-242.
9. Đỗ Thị Hà, Lê Thị Loan, Nguyễn Minh Khởi, Trần Thị Hồng Phương (2016). Xây dựng phương pháp định lượng tanshinon IIA trong dược liệu đan sâm trồng ở Việt Nam bằng HPLC-DAD. Tạp chí Dược liệu 21, 50-54.
10. Nguyễn Thị Minh Hằng (2001), Nghiên cứu tác dụng chống đông máu và hạ lipid máu của đan sâm và bài thuốc sinh hóa thang, Đại học Dược Hà Nội. 11. Nguyễn Thị Thu Hòa (2012), Nghiên cứu tiêu chuẩn cao đặc hỗn hợp hoàng kỳ
và đan sâm, Luận văn thạc sĩ dược học, Đại học Dược Hà Nội.
12. Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tập II, Nxb. Trẻ, tr. 865-866.
13. Vũ Thị Thăng Long (2007), Nghiên cứu định lượng Tobramycin nguyên liệu bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ đại học.
14. Đỗ Tất Lợi (2005), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 818-820.
15. Ngô Quốc Luật, Trần Danh Việt, Đào Văn Núi (2014). Nghiên cứu di thực cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) tại Việt Nam. Tạp chí Dược học 54 (4), 687-691.
16. Ngô Quốc Luật, Trần Danh Việt, Lê Tiến Vinh, Phương Thiện Thương (2014). Đánh giá chất lượng dược liệu đan sâm di thực trồng tại Việt Nam. Tạp chí
Dược học 455, 47-51.
17. Thái Phan Quỳnh Như (2001), Phương pháp phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu
năng cao (HPLC), Viện kiểm nghiệm Bộ y tế.
18. Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất bảnkhoa học và kỹ thuật tr. 199 – 222; 493 – 685.
19. Trường Đại học Dược Hà nội, Bộ môn hoá phân tích (2006), Hoá phân tích II, tr. 17, 99-146, 173-222.
20. Hoàng Duy Tân, Trần Văn Nhủ (2001), Từ điển phương thang đông y, Nhà xuất bản Đồng Nai.
21. Phương Thiện Thương, Nguyễn Thị Kim An, Nguyễn Minh Khởi, Fumiaki Ito (2013). Các tanshinon phân lập từ rễ cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) di thực và trồng ở Việt Nam. Tạp chí Dược học 53 (1), 44-47.
22. Nguyễn Hữu Tùng, Nguyễn Thanh Hải, Vũ Đức Lợi, Bùi Thanh Tùng, Nguyễn Tiến Vững, Bùi Hồng Cường (2016). Một số hợp chất phân lập từ rễ cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) trồng ở huyện Bắc Hà, tỉnh Lào Cai. Tạp chí Dược học 56 (4), 43-47.
23. Nguyễn Hữu Tùng, Vũ Đức Lợi, Bùi Thanh Tùng, Lê Quốc Hùng, Dương Thị Ly Hương, Nguyễn Thanh Hải (2016). Thành phần triterpene năm vòng khung ursane phân lập từ rễ cây Đan sâm trồng ở Việt Nam. Tạp chí Khoa học
ĐHQGHN: Khoa học Y Dược 32 (2), 33-36.
24. Vũ Phương Xuân (2000), Thực vật chí Việt Nam, tập II, Nxb. Khoa học và kỹ thuật, tr. 115-126.
25. Đỗ Thị Xuyến, Vũ Xuân Phương (2013), "Bổ sung loài Salvia japonica
Thunberg (họ BẠc Hà- Lamiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam", Tạp chí sinh học (35), tr. 41-44.
TIẾNG ANH
26. Wang BQ (2010). Salvia miltiorrhiza: Chemical and pharmacological review of a medicinal plant. Journal of Medicinal Plants Research 4 (25), 2813-2820.
27. Dai Hui, Xiao Chaoni, Liu Hongbing, Tang Huiru (2009), "Comnined NMR and LC- MS Analysis Reveals the Metanonomic Changes in Salvia miltiorrhiza
Bunge Induced by Water Depletion", Journal of Proteome Research, 9(3), pp. 1460-1475.
28. Li Min Hui, Li Qian Quan, Liu Yan Ze, Cui Zhan Hu, Zhang Na, Huang Lu Qi, Xiao Pei Gen (2013), "Pharmacophylogenetic Study on Plants of Genus Salvia
L. from China", Chinese Herbal Medicines, 5(3), pp. 164-181.
29. Zhou L, Zuo Z, Chow MS (2005). Dansen: An overview of its chemistry, pharmacology, pharmacokinetics, and clinical use. The Journal of Clinical
Pharmacology 45 (12), 1345-1359.
30. Chase Mark W.(2009), "An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG III",
Botanical Journal of the Linnean Society, 161, pp. 105-121.
31. Kintzios Spiridon E (2003), Sage: the genus Salvia, CRC Press, pp. 9-18, 55- 66,143-174.
32. Nicolin Vanessa, Fancellu Giovanni, Valentini Roberto (2014), "Effect of tanshinone II on cell growth of breast cancer cell line type MCF-7 and MD- MB-231", IJAE, 119(1), pp. 38-43.
33. Xu Yan Yan, Wan Ren Zhong, Lin Yan Ping, Yang Ling, Chen Yong, Liu Chang Xiao (2007), "Recent advance on research and atrlication of Salvia miltiorrhiza", Asian Journal of Pharmacodynamics and Pharmacokinetics, 7(2), pp. 99-130.
34. Ikeshiro Yasumasa, Mase Izumi, Tomita Yutaka (1989), "Abietane type diterpenoids from Salvia miltiorrhiza", Phytochemistry, 28(11), pp. 3139-3141. (8)
35. Lu Yinrong, Yeap Foo L. (2002), "Polyphenolics of Salvia—a review",
Phytochemistry, 59(2), pp. 117-140.
36. Xu YY et al. (2007). Recent advance on research and atrlication of Salvia miltiorrhiza.
PHỤ LỤC
Phụ lục 1 Phổ ESI-MS của tanshinon IIA
Phụ lục 2 Sắc ký đồ HPLC – UV của tanshinon IIA
Phụ lục 3 Sắc ký đồ khảo sát khoảng tuyến tính của đường chuẩn
Phụ lục 4 Sắc ký đồ thử tính thích hợp hệ thống của phương pháp
Phụ lục 5 Sắc ký đồ cao dược liệu đan sâm Sa Pa, Lào Cai
Phụ lục 6: Một số hình ảnh sắc ký lớp mỏng của tanshinon IIA