quả Nhận xĩt 1
Flavonoid p.ư Cyanidin + Xuất hiện mău nđu úa
p.ư với NH3 +
p.ư với FeCb 5% + Mău văng, ânh xanh
p.ư với NaOH ++ Mău văng cam
2
Coumarin p.ự diazo - Chuyển sang mău
văng nhạt p.ư đóng mở vòng lacton - Cho nước không xuất hiện tủa p.ư huỳnh quang -
3
Tan in p.ưvới FeCb 5% + Ânh xanh
p.ư với đồng acetat ++ Xanh ngọc
p.ư với chỉ acetat + ít tủa
ST Rf X 100 r
Mău săc
Kết luận: Kết quả định tính so bộ câc nhóm chất hoâ học chính trong cắn c nhận thấy: Có tanin* 40
Bảng 3.6: Ket quả đỉnh tính cắn D
Ket luận: Kết quả định tính sơ bộ câc nhóm chất hoâ học chinh trong cắn D nhận thấy: có ílavoloiđ vă tanin.
*> Định tính bằng sắc ký ỉởp mỏng
- Dịch chấm sắc ký: cắn từng phđn đoạn hòa tan trong MeOH.
Bản mỏng: Silicagel GF254 (MERCK) trâng sẵn, được hoạt hóa ở !10°c trong lh. Đẻ nguội vă bảo quản trong bình hút ẩm.
- Hệ dung môi khai triển: Tiến hănh thăm dò trín câc hệ dung môi:
Tiến hănh: Chấm dịch chiết methanol ở trín lín bản mỏng, sấy nhẹ cho khô, 41
khỏi bình, sấy nhẹ 15 phút cho bay hơi hết dung môi. Quan sât vĩt dưới ânh sâng thường (ĂST), ânh sâng uv ở 2 bước sóng 366nm, 254nm.
* Định tính cắn A: tiến hănh chạy SKLM một chiều cắn A vói câc hệ dung
môi sau:
Hệ I: Toluen : EtOAc : Acid formic (5:6:1)
Hệ II: Toluen : EtOAc : Acid formic (5:7:1)
Hệ III: Toluen : Diethyl ether (1:1) bêo hòa acid acetic 10%
Hệ IV:ChIoroform: MeOH (9:1)
Ket quả: Quan sât câc vết dưới ânh sâng thường, ânh sâng UY 254nm, 365nm, hiện mău băng hơi MTb đặc thấy hệ III cho kết quả tâch tốt nhất. Giâ trị Rf, mău sắc câc vết, độ đậm vết được thể hiện trong hình 3.14 vă bảng 3.7:
3 27,50 Đen
4 33,75 Xanh dương Xanh dương
5 48,75 Xanh dương Đen Xanh dương
6 61,25 Xanh dương Đen Xanh dương
7 63,75 Xanh dương
STT Rf X 100 Mău sắc Độ đậm 1 4,39 Xanh dương + 2 11,40 Xanh dương + 3 14,91 Văng ++ 4 20,18 Văng +++ 5 25,44 Văng + 6 36,84 Xanh dương +++ 7 41,23 Xanh sâng +++ 8 49,12 Xanh dương ++ 9 52,63 Xanh dương ++ 10 63,16 Xanh dương ++ 11 73,68 Xanh dương +++ 12 76,32 Xanh sảng +++ 13 85,96 Xanh dương +++ ST T Rf X 100 7--- uv366nm UV254„n, 1 11,11 Xanh dưong 2 20,00 Xanh đen 3 30,00 Xanh dương 4 35,56 Xanh đen 5 37,78 Xanh dương 6 43,33 Xanh đen
7 47,78 Xanh dương Xanh đen
8 61,11 Xanh đen 9 83,33 Xanh dương ST T Rf X 100 ĩ--- uv^ốnm IJV254nm 1 4,55 Xanh dương 2 18,18 Xanh dương Nhận xĩt: Trín bản mỏng Silicagel nhận thấy:
+ Khi chưa hiện mău băng NTb:
- Ânh sâng tử ngoại bước sóng 254nm: Có 3 vĩt. 42
- Ânh sâng tử ngoại bước sóng 366nm: Có 6 vết.
+ Khi phun hiện mău bằng NH3:
- Ânh sâng tủ ngoại bước sóng 366nm: Có 7 vết.
Trong câc vết nhận thấy: Câc vết 4,5,6,8 rất đậm vă rõ nĩt khi soi dưới ânh sâng tử ngoạỉ 366nm, trong vểt 6 rất to, vĩt 5,6 rỗ nĩt khi soi dưới cả 2 bước sóng tử ngoại 254nm vă 366nm. *
*Đinh tính cắn B: tiến hănh chạy SKLM cắn B với câc hệ dm sau:
Hệ I: Toluen : EtOAc : Acid íormic (5:6:1) Hệ II: Toluen : EtOAc : Acid íòrmic (5:4:1)
Hệ III: Toluen : Diethyl ether (1:1) bêo hòa acid acetic 10% Hệ IV: EtOAc :Chloroform : Acid formic (3:3:1)
Kết quả: Quan sât câc vết dưỏi ânh sâng thường, ânh sâng ƯV ở 2 bước sóng 254nm, 365nm, hiện mău băng hơi NH3 đặc nhận thấy hệ I cho kết quả tâch tốt nhất,câc vết tâch khâ tốt,mău sắc rõ. Giâ trị Rf, mău sâc, độ đậm câc vết được thể hiện trín bảng 3.8 vă hình 3.15:
43
Ẩ r 1
Bảng 3.8: Kễt quả đinh tính căn B băng SKLM ở bước sóng 366nm
Chú thích: +: rất mờ ++: mờ; -H-+: rõ
Nhận xĩt: Trín bản mỏng Silicagel nhận thấy: Quan sât dưới ânh sâng tử ngoại 3ốónm có 13 vết, trong đó câc vết 4, 6, 7, 11, 12, 13 to, đậm vă rõ nĩt* *
* Định tính cắn C: tiến hănh chạy SKLM một chiều cắn c với câc hệ dung môi sau:
Hệ I: Toluen : EtOÂc : Acid íormic (5:6:1) Hệ II; Toỉuen ; EtOAc : Acid formic (4:6:1) Hệ III: Toluen : EtQAc : Acid formic (5,5:5:0,5) Hệ IV: Chlorỏbrm : MeOH (9:1)
44
Hệ V: Toluen : Diethyl ether (1:1) bêo hòa acid acetic 10%
Hệ VI: Chloroform : EtOAc : Acid íòrmic (3:3; 1)
Ket quả: Quan sât câc vểt dưới ânh sâng thường, ânh sâng uv ở 2 bước sóng 254nm, 3ó5nm, hiện mău bằng hơi NH3 đặc nhận thấy hệ III cho kết quả tâch tốt nhất, câc vểt tâch khâ tốt,mău sắc rổ. Giâ trị Rf, mău sắc, độ đậm câc vết được thể hiện trín bảng 3.9 vă hình 3.17.
Nhận xĩt: Trín bản mỏng Silicgel nhận thấy:
- Ânh sâng tử ngoại có bước sóng 254nm: Có 5 vĩt. - Ânh sâng tử ngoại có bước sóng 366nm: Có 5 vết.
* f V p
Trong câc vít đó nhận thđy: Vít 7 xuđt hiện rõ nĩt khi soi dưới 2 bước sóng. 45
* Định tính cắn D: tiến hănh chay SKLM một chiều cắn D với câc hệ dung môi sau:
Hệ I: Toluen : EtOAc : Acid íòrmic (5:6:1)
Hệ II: Toluen : EtOAe : Acíd íòrmie (4:6:1)
Hệ III: Toluen : EtOAc : Acid formic (5,5:5:0,5)
Hệ IV: Tolưen : EtOAc : Acid formic ( 5,5:6:0,5)
Hệ V: Toluen : Diethyl ether (1:1) bêo hồa acid acetic 10%
Hệ VI: Chlorỏorm : EtOAc : Acid formic( 3:3:1)
Hệ VII: Chlọrọíọrm : MeOH (9:1)
Kết quả; Quan sât câc vết dưới ânh sâng thường, ânh sâng ƯV ờ 2 bước sóng 254nm, 365nm, hiện mău bằng hơỉ NH3 đặc. Nhận thấy hệ IV cho kết quả tâch tốt nhất với 4 vết soi ờ bước sóng 366nm, 5 vết soi ở bước sóng 254nm,câc vết tâch khâ tốt,mău sắc rõ. Giâ trị Rf, mău sắc, độ đậm câc vết
6 60,91 Xanh đen
7 67,27 Xanh đương
Nhận xĩt: Trín bản mỏng Silicagel nhận thấy: 46
- Ânh sâng tử ngoại có bước sóng 254nm : Có 5 vết, - Ânh sâng tử ngoại có bước sóng 36ónm : Có 4 vết.
Hình 3.14.sắc ký đồ cắn  vói
ƯV254 UV366
Hình 3.16.sâc ký đồ cắn D vối hệ
dung môi IV
NHb/AST UV366 UV254
Hình 3*15, Sắc ký đồ cấn B vói
ƯV254 ƯV366
48
3,2.3. Băn Luận
• « •
Ngưu băng lă loại cđy có nguồn gốc ở vùng ôn đới ấm. Ở Việt Nam, từ năm 1959, Ngưu băng đê được trồng ở Bắc Hă (Lăo Cai) vă Sìn Hồ (Lai Chđu) mang tính chất giữ giống. Từ năm 2004 Ngưu băng được trồng với số lượng lớn tại bêi giữa sông Hồng với hạt giống được nhập từ úc, cđy không những phât triển tốt mă còn cho năng suất cao, rễ to vă dăi, Mặt khâc theo như những người dđn trồng Ngưu băng tại bêi giữa sông Hồng thì hạt Ngưu băng (Ngưu băng tử) dùng trong đông y, được bân phố biến trín thị trường hiện nay, khi đem gieo trồng trong cùng điều kiện, thời gian, rễ cđy không phât triển. Phải chăng, Ngưu băng lấy hạt vă ngưu băng lấy rễ lă 2 loăi hoăn toăn khâc nhau?
Từ năm 2006 đến nay, đả có một số công trinh nghiín cứu về đặc điểm thực vật của dược liệu năy, tuy nhiín chỉ dừng lại ở kiểm định tín khoa hoc
cho mẫu nghiín cứu vă tiến hănh vi nghiín cứu phẫu rễ.
Kết quả kiểm định tín khoa học cho thấy câc mẫu Ngưu băng đê vă đang nghỉín cứu cùng lă một loăi mặc dù nguồn gốc thu hâi khâc nhau. Câc mẫu đê nghiín cứu bao gồm rễ Ngưu băng nhập từ Trung Quốc, rễ Ngưu băng trồng tại Sapa, rễ Ngưu băng bân trín thị trường Hă Nội (thu mua từ nhiều nguồn khâc nhau), Đối với mẫu Ngưu băng thu hâi tại bêi giữa sông Hồng, bín cạnh việc kiểm định lại tín khoa học, mẫu nghiín cứu còn được tiến hănh giải phẫu hoa, vi phẫu thđn, lâ, mă câc đề tăi trước chưa thực hiện được. Hiện nay, chúng tôi cũng đang tiến hănh theo dõi quâ trình sinh trưởng vă phât triển của loăi năy, câc kết quả ban đầu cho thấy, mặc dù cùng một loăi
cạnh đó, như trín đê nói, cũng theo những người dđn bêi giữa sông Hồng cho biết, hạt Ngưu băng (Ngưu băng tử) vẫn được dùng trong YHCT khi đem gieo trồng trong cùng điều kiện, thời gian, thì thấy rễ cđy không phât triển.
Vì vậy, với những kết quả khảo sât ban đầu về mặt thực vật vă sinh thâi, chúng tôi nhận thấy cần có sự theo dối vă nghiín cứu sđu hom về loăi dược liệu năy về điều kiện sinh trưởng phât triển, cũng như việc khẳng định lại tín khoa học của loăi Ngưu băng hiện đang trồng tại bêi gỉữa sông Hồng nhằm góp phần lăm phong phú kho tăng cđy thuốc Việt Nam.
về mặt hóa học:
Đê tiến hănh nghiín cửu thănh phần hóa học vă tâch câc nhóm chất trong câc phđn đoạn khâc nhau bao gồm n-hexan, chlorỏbrm, ethyl acetat vă n-butanol. Kĩt quả nghiín cứu ban đău cho thấy, hău như không thấy có sự thay đổi về thănh phần ở mẫu Ngưu băng Hă Nộỉ so với câc mẫu Ngưu băng đê nghiín cứu trước đđy. Việc so sânh năy vẫn mang tính chất tương đốỉ, do câc mẫu cỏ thời gian thu hâi lă khâc nhau, điều kiện thực nghiệm hóa học cũng khâc nhau. Trong câc mẫu đều thấy có mặt tanin, ílavonoid, coumarin, acid hữu cơ, chất bĩo, phytosterol, poỉysaccharid, đường khử, acid amin. Tuy nhiín, chất lượng cũng như hăm lượng cắn toăn phần, cắn câc phđn đoạn qua thực nghiệm sơ bộ cho thấy có sự khâc nhau giữa câc mẫu. Như vậy, đế có thể so sânh vă đưa ra kết luận chính xâc hơn, thì việc thu hâi ngưu băng nín được thực hiện tại nhiều thòi điếm khâc nhau cho tất cả câc mẫu, đặc biệt lă nín chọn đúng thời kỳ thu hâi theo lý thuyết, vă tiến hănh câc thực nghiệm hóa học trong cùng điều kiện. Đđy lă việc đề tăi có thể tiếp tục triển khai.
Sự có mặt của câc nhóm chất đặc biệt lă câc nhóm polyphenol, cũng lần nữa khẳng định tâc dụng của cđy thuốc, vị thuốc trong chế phẩm “canh dường sinh’1.
50
3.3. KẺT LUĐN: *
Sau thời gian lăm thực nghiệm, chúng tôi đê thu được một số kết quả sau:
về
thực vạt;
+ Đê mô tả đuợc đặc điểm thực vật, mô tả chi tiết đặc điểm vỉ học vă chụp ânh của bột rễ, ảnh vi phẫu thđn, gđn lâ, rễ ngưu băng.
+ Đê xâc định được ngưu băng thuộc Họ Ăsteraceae, Chi Arctium L. có tín khoa học lă Arctium ỉappa L., Âsteraceae
về
măt hỏa học:
+ Ngưu băng cỏ: tlavonoiđ, courmarin, tannin, chất bĩo, phytosterol, đường khử, acid hữu cơ, acid amin, polysaccharid,
+ Đê định tính bằng SKLM cắn câc phđn đoạn n-hexan, CHCỈ3, EtOAc, BuOH, hiện mău bằng NH3 cho thấy:
• Cắn ở phđn đoạn n-hexan cho 6 vết khỉ quan sât ở uv366 nrn , 3 vết
khi quan sât ở ƯV254nm?câc vết có giâ trị Rf, mău sẳc vă độ đậm nhạt khâc nhau.
• Cắn ở phđn đoạn clorỏorm cho 13 vết có giâ trị Rf, mău sắc vă độ
đậm nhạt khâc nhau khi quan sât ở UV366 run ^
• Cắn ở phđn đoạn ethylacetat cho 5 khi quan sât ở ƯV254 nm, 5 vết khi quan sât ở ƯV366 nm J câc vết có giâ trị Rf, mău sắc vă độ đậm nhạt khâc nhau
• Cắn ở phấn đoạn n-BuOH cho 4 vết khi quan sât ở uv366 nm , 5 vết khi quan sât ở ƯV2;54nm> câc vết có giâ trị Rf, mău sắc vă độ đậm nhạt khâc nhau
3.4. ĐĨ XƯẢT
Do thời gian có hạn, những kết quả nghiín cứu chúng tôi thu được mới chỉ lă bước đầu. Chúng tôi có một số đề xuất:
> Tiếp tục nghiín cứu về thănh phần hoâ học câc phđn đoạn chiết xuất của rễ Ngưu băng,
> Tiến hănh nghiín cứu tâc dụng sinh học câc phđn đoạn chỉết xuất từ rễ Ngưu băng,
> Nghiín cứu dạng băo chế để cỏ thể đưa văo thử lđm săng nhằm sử đụng nguồn nguyín liệu năy một câch hợp lý, góp phần lăm phong phú thím kho tăng cđy thuốc Việt Nam,
Tăi liíu tham khảo
4
Tăi liệu tiếng Việt:
1. Nguyễn Tỉín Bđn, câm nang tra cứu vă nhận biết câc họ thực vật hạt kín ở Việt Nam, Nhă xuất bản Nông Nghiệp, tr.495.
2. Lí Kim Biín (2007), Thực vật chỉ Việt Nam, Nhă xuất bản Khoa học vă Kỹ thuật, Tập 7, tr.535-536.
3. Bộ môn Dược Liệu - Trường Đại học Dược Hă Nội (1998), Băi giảng Duợc liệu, Tập 1.
4. Bộ môn Dược Liệu - Trường Đại học Dược Hă Nội (2003), Thực tập Duợc liệu, Phần kiểm nghiệm Dược liệu băng phương phâp hiển vi.
5* Bộ mòn Dược Liệu - Trường Đại học Dược Hă Nội (1999), Thực tập Duợc liệu, phần hoâ học.
6. Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dược Hă Nội (2005), Thực tập thực vật vă nhận biết cđy thuắc , tr. 1-4, 54-66.
7. Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dược Hă Nội (2005), Thực vật học,
tr.318-320.
8. Bộ môn Dược học cồ truyền - Trường Đại học Dược Hă Nội (2000), Dược học cổ truyền, Nhă xuất bản y học, tr. 181.
9. Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam III, PL - 129, PL - 143.
10.Võ Vên Chi (1997), Từ điển cđy thuốc Việt Nam, Nhă xuất bản Y học, tr.855 - 856.
14.Nguyễn Văn Đăn - Nguyễn viết Tựu (1985), Phương phâp nghiín cứu hoả học cây thuểc, Nhă xuất bản Y học Hă Nội, Hă Nội.
15.Nguyễn Thị Lan Hương (2006), Nghiín cứu đặc điím vi học vă thănh phần hoả học của rễ Ngưu băng, Khoâ luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đạỉ học Dược Hă Nội, Hă Nội.
16.Đỗ Tất Lợi (1999), Những cđy thuốc vă vị thuốc Việt Nam, Nhă xuất bản Y học Hă Nội, tr.624 - 625.
17.Hoăng Thị Sản - Hoăng Thị Bĩ (2003), Thực hănh phđn ìoại thực vật,
Nhả xuất bản Giâo Dục, Hă Nội.
18-H ă Đăng Th ănh (2007), Nghiín cừu đặc điểm thực vật vă thănh phần hoâ học của rễ Ngưu băng thu hâi tại Sapa, Khoâ luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hă Nội, Hă Nội.
19.Trần Thi Thu Trang (2007), Nghiín cứu đặc điểm vi học, thănh phần hóa học của vị thưôc Ngưu băng căn thu mua trín thị trường Hă Nộ ỉ, Khoâ luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học, Trường Đại học Dược Hă Nội, Hă Nội.
20.Viện Dược Liệu (2004), Cđy thuốc vă động vật lăm thuốc ở Việt Nam, Nhă xuất bản Khoa học vă kỹ thuật, tr.426 - 430.
21 .Quâch Tuấn Vĩnh (2005), Dùng cđy thuốc, Nhả xuất bản Y học vă Quản đội Nhđn Dđn, tr.218-219.
Tăi liệu nước ngoăi:
Tăi liệu tiếng Anh:
24.Awale s. Lu J. et al (2006)/’ Identiícảon of arctigenin as an antiumor agent having the ability to eliminate the tolerance of cancer cells to nutrien starvation”, Cancer Res, 66(3), P: 1751-7.
25.Cho MK, et al (2004); “Arctigenin, a phenylpropanoid dibenzylbutyrolactone lignan, inhibits MAP kinases and AP - 1 activation via potent MKK inhibition: the role in TNF - alpha inhibition”, lìĩt Immunopharmacoỉ, 4(10 - 11), P: 1419 - 29.
26 .Kardosova A. et al (2003),”A biologicaỉly active fructan from the rootsof Arctium lappa L., var. Herkules”, ỉnt JBioỉ Macromol, 33(1- 3), P: 5 - 40.
27.Leonart ss. Keil D. et al (2006),” Essiac tea; scavengỉng of reactive oxygen species and effect on DNA damage”, JEthnopharmacoỉ, 103(2), P: 288 - 96. Epub 2005 Oct.
28.Linn cc. Lu JM. et al (1996), “Aníị - inílammatory and radical scavenge effects of Arctỉum lappa”, Đm J Chín Med, 24(2), P: 127 - 37.
29.Lin sc. et al (2002),Hepatoprotective effect of Ăretium lappaLinne on