-75ºC ba tháng (HE x1000) - Biến đổi cấu trúc và- 123docz.net

Hình 2.5. Mô hình nghiên cứu.

40 mẫu xương (hình viên bi)

Lô 3: 10 mẫu (Lô đối chứng)

Lô 1: 15 mẫu Lô 2: 15 mẫu

Đông khô Tươi -75ºC ba tháng

10 khô

5 khô 5 khô 5 khô 5 khô 10

khô Tiêu bản

mô học Tiêu bản

mô học

Ghép Ghép Tiêu bảnmô học Ghép

So sánh cấu trúc mô xương Đánh giá biến đổi cấu trúc mô

xương Lấy mẫu xương sau

ghép 1 tháng

Tiêu bản mô học

So sánh cấu trúc vùng mô liên kết

2.5. Chỉ tiêu cần nghiên cứu

2.5.1. Các chỉ tiêu về hình thái, cấu trúc các mẫu xương không ghép

 Biến đổi chất căn bản của mô xương?

 Biến đổi số lượng các loại tế bào (tạo cốt bào, cốt bào, hủy cốt bào) trên mẫu xương?

 Hốc tủy đã được làm sạch tế bào máu hay chưa?

2.5.2. Các chỉ tiêu về hình thái, cấu trúc của vùng ghép, vùng mô xung quanh mảnh ghép

 Tình trạng vết mổ: khô, tiết dịch hay viêm đỏ?

 Tổ chức mô liên kết xung quanh xương ghép (tính từ nơi tiếp giáp giữa xương ghép với mô liên kết đến vị trí cách bề mă ôt xương 1mm):

Hình 2.6. Mô phỏng quan sát hình ảnh vi thể vùng nghiên cứu với các đô ê phóng đại khác nhau.

1. HE x100; 2. HE x250; 3. HE x1000

+ Thâm nhiễm các loại tế bào (tế bào lympho, tương bào, đại thực bào, bạch cầu đa nhân trung tính, hủy cốt bào): (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

1 2 3

 Chúng tôi quy định các mức đô ô thâm nhiễm lympho bào như sau: Mức đô ô Ít: Trung bình số lympho bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu dưới 300 lympho bào.

Mức đô ô Trung bình: Trung bình số lympho bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu từ 300 đến 400 lympho bào.

Mức đô ô Nhiều: Trung bình số lympho bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu trên 400 lympho bào.

 Chúng tôi quy định các mức đô ô thâm nhiễm tương bào như sau: Mức đô ô Ít: Trung bình số tương bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu dưới 30 tương bào.

Mức đô ô Trung bình: Trung bình số tương bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu từ 30 đến 49 tương bào.

Mức đô ô Nhiều: Trung bình số tương bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu trên 49 tương bào.

 Chúng tôi quy định các mức đô ô thâm nhiễm đại thực bào như sau: Mức đô ô Ít: Trung bình số đại thực bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu dưới 20 đại thực bào.

Mức đô ô Nhiều: Trung bình số đại thực bào của 3 tiêu bản/ 1 mẫu từ 20 đại thực bào trở lên.

 Thâm nhiễm bạch cầu đa nhân trung tính: có hay không?

 Hủy cốt bào còn trên bề mă ôt xương ghép (nơi tiếp giáp giữa mô liên kết và xương ghép) hay không?

+ Có tăng sinh mạch máu, tăng sinh collagen, tăng sinh nguyên bào sợi và tăng sinh tế bào sợi hay không?

2.6. Phương pháp xử lý số liệu

Các số liê ôu được làm sạch trước khi nhâ ôp vào máy tính. Xử lý số liê ôu bằng phần mềm chương trình SPSS 22.0 với các test thống kê thích hợp trong y học:

Tính tỉ lê ô phần trăm.

Kiểm định kết quả thu được bằng thuâ ôt toán khi bình phương ( ) khi so sánh 2 tỉ lê ô quan sát:

Oi : Tần số quan sát Ei : Tần số lý thuyết

So sánh 2 tỉ lê ô % bằng cách so sánh 2 khoảng tin câ ôy bằng giả thuyết H0 (H không). Tính khoảng tin câ ôy của tỉ lê ô phần trăm theo công thức:

 P ≤ 1,96

mức tin câ ôy là 95% (p = 0,05) P : Khoảng tin câ ôy

W: Tỉ lê ô quan sát n: Mẫu quan sát

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

Sau khi tiến hành nghiên cứu thực nghiê ôm trên chuô ôt ở Labo bảo quản mô của bô ô môn Mô-Phôi trường Đại học Y Hà Nô ôi, chúng tôi thu được kết quả sau:

3.1. Cấu trúc mô xương chuô Ât cống trắng không ghép

3.1.1. Cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản đông khô

Quan sát dưới kính hiển vi quang học 15 tiêu bản (từ 5 mẫu viên bi xương được bảo quản đông khô, 3 tiêu bản /1 mẫu), chúng tôi có được nhâ ôn xét sau:

Các mẫu nghiên cứu không đồng nhất, đều có sụn, 2 mẫu chỉ có xương xốp, 3 mẫu có cả xương xốp và xương đă ôc.

Chất căn bản xương mịn, không có cấu trúc.

Trên mô xương không còn tạo cốt bào và hủy cốt bào, phần lớn các ổ xương không còn tế bào xương.

Tất cả các mẫu xương đều chưa được làm sạch hoàn toàn tế bào máu trong các hốc tủy. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Hình 3.1. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản đông khô (HE x100).

1. Chất căn bản xương; 2. Hốc tủy

Hình 3.2. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản đông khô (HE x250).

Hình 3.3. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản đông khô (HE x1000).

1. Chất căn bản xương; 2. Lá xương; 3. Ổ xương; 4. Cốt bào; 5. Hốc tủy

3.1.2. Cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng

Quan sát dưới kính hiển vi quang học 15 tiêu bản (từ 5 mẫu viên bi xương sau bảo quản lạnh ở -75ºC ba tháng, 3 tiêu bản /1 mẫu), chúng tôi có được nhâ ôn xét sau:

Các mẫu nghiên cứu không đồng nhất, đều có sụn, 1 mẫu chỉ có xương xốp, 4 mẫu có cả xương xốp và xương đă ôc.

Chất căn bản xương mịn, không có cấu trúc.

Trên mô xương không còn tạo cốt bào và hủy cốt bào, phần lớn các ổ xương không còn tế bào xương.

4 trong 5 mẫu vẫn còn tế bào máu trong hốc tủy của mô xương.

Hình 3.4. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng (HE x100).

Hình 3.5. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng (HE x250).

1. Chất căn bản xương; 2. Hốc tủy; 3. Ổ xương

Hình 3.6. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương không ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng (HE x1000).

3.1.3. Cấu trúc mô xương tươi không ghép

Quan sát dưới kính hiển vi quang học 15 tiêu bản (từ 5 mẫu viên bi xương tươi, 3 tiêu bản /1 mẫu), chúng tôi có được nhâ ôn xét sau:

Các mẫu nghiên cứu không đồng nhất, đều có sụn, 4 mẫu chỉ có xương xốp, 1 mẫu có cả xương xốp và xương đă ôc.

Chất căn bản xương mịn, không có cấu trúc.

Trên mô xương có rất nhiều tạo cốt bào (>100 tạo cốt bào trên mỗi vi trường), hầu hết các ổ xương đều có chứa tế bào xương.

3 mẫu có hủy cốt bào trên mô xương, 2 mẫu không có hủy cốt bào. Tất cả các mẫu vẫn còn tế bào máu trong hốc tủy của mô xương.

Hình 3.7. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương tươi không ghép (HE x100).

Hình 3.8. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương tươi không ghép (HE x250).

Hình 3.9. Hình ảnh vi thể cấu trúc mô xương tươi không ghép (HE x1000).

1. Chất căn bản xương; 2. Lá xương; 3. Cốt bào; 4. Tạo cốt bào; 5. Hủy cốt bào; 6. Ổ xương; 7. Hốc tủy; 8. Tế bào máu

3.1.4. So sánh cấu trúc mô xương của ba lô xương không ghép Bảng 3.1. So sánh cấu trúc mô xương của ba lô xương không ghép

Chỉ tiêu so sánh

Lô xương không ghép Xương tươi

(n = 5 mẫu)

Xương được bảo quản đông khô (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

(n = 5 mẫu)

Xương được bảo quản ở -75ºC

ba tháng (n = 5 mẫu) Chất căn bản

của mô xương

Chất căn bản mịn, không có cấu trúc

Chất căn bản mịn, không có cấu trúc Tạo cốt bào

trên mô xương

Rất nhiều tạo cốt bào Không còn tạo cốt bào Không còn tạo cốt bào Tế bào xương

trên mô xương

Hầu hết các ổ xương đều có

chứa tế bào xương

Phần lớn các ổ xương không

còn tế bào xương

Phần lớn các ổ xương không

còn tế bào xương Hủy cốt bào

trên mô xương Có ở 3 trong 5 mẫu

Không có ở mẫu nào

Còn tế bào máu trong hốc tủy của mô xương

Tất cả các mẫu Tất cả các mẫu Còn ở 4 trong 5 mẫu

3.2. Hình thái, cấu trúc của vùng ghép, vùng mô xung quanh mảnh ghép

3.2.1. Cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản đông khô

- Về đại thể:

Sau ghép 7 ngày, tất cả đều liền da kỳ đầu, vết mổ khô, không tiết dịch, không có viêm tấy đường mổ.

Sau ghép 1 tháng, vết mổ liền sẹo hoàn toàn, vết mổ không tiết dịch, không có viêm tấy đỏ. Xung quanh xương ghép không có dịch tiết.

Hình 3.10. Vết mổ sau 7 ngày ghép xương được bảo quản đông khô.

1. Vết mô

Hình 3.11. Vết mổ sau 1 tháng ghép xương được bảo quản đông khô.

Hình 3.12. Hình ảnh đại thể vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép sau 1 tháng ghép xương được bảo quản đông khô. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

1. Xương ghép; 2. Mô liên kết dưới da; 3. Cân cơ lưng

Hình 3.13. Hình ảnh đại thể vùng mô xung quanh xương ghép sau 1 tháng ghép xương được bảo quản đông khô.

- Về vi thể:

Quan sát vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản đông khô dưới kính hiển vi quang học trên 30 tiêu bản (từ 10 mẫu, 3 tiêu bản/ 1mẫu), chúng tôi có được nhâ ôn xét sau:

Về thâm nhiễm lympho bào: 5 mẫu ở mức đô ô trung bình, 5 mẫu ở mức đô ô nhiều.

Về thâm nhiễm tương bào: 3 mẫu ở mức đô ô ít, 7 mẫu ở mức đô ô trung bình.

Về thâm nhiễm đại thực bào: 8 mẫu ở mức đô ô ít, 2 mẫu ở mức đô ô nhiều. Không còn hủy cốt bào xuất hiê ôn trên bề mă ôt xương ghép, nơi tiếp giáp giữa xương ghép và mô liên kết.

Không có thâm nhiễm bạch cầu đa nhân trung tính.

Tất cả các mẫu có vùng mô liên kết càng sát mảnh xương ghép có sự phân bố mạch máu, nguyên bào sợi, tế bào sợi và sợi collagen càng nhiều. Chứng tỏ tất cả các mẫu có sự tăng sinh mạch máu, nguyên bào sợi, tế bào sợi, sợi collagen.

Hình 3.14. Hình ảnh vi thể cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản đông khô (HE x100).

1.Xương ghép; 2. Mô liên kết xung quanh xương ghép; 3. Hốc tủy

Hình 3.15. Hình ảnh vi thể cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản đông khô (HE x250).

1. Xương ghép; 2. Hốc tủy; 3. Mô liên kết xung quanh xương ghép; 4. Vi mạch máu; 5. Sợi collagen

Hình 3.16. Hình ảnh vi thể cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản đông khô (HE x1000).

1. Xương ghép; 2. Mô liên kết xung quanh xương ghép; 3. Vi mạch máu; 4. Sợi collagen; 5. Lympho bào; 6. Tương bào; 7. Đại thực bào; 8. Nguyên bào sợi; 9. Tế bào sợi

3.2.2. Cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng

- Về đại thể:

Sau ghép 7 ngày, tất cả đều liền da kỳ đầu, vết mổ khô, không tiết dịch, không có viêm tấy đường mổ.

Sau ghép 1 tháng, vết mổ liền sẹo hoàn toàn, vết mổ không tiết dịch, không có viêm tấy đỏ. Xung quanh xương ghép có ít dịch tiết ra. Dịch trong suốt, không có máu, không có mủ.

Hình 3.17. Vết mổ sau 7 ngày ghép xương được bảo quản ở -75ºC ba tháng.

1. Vết mô

Hình 3.18. Vết mổ sau 1 tháng ghép xương được bảo quản ở -75ºC ba tháng.

1. Vết mô; 2. Xương ghép

Hình 3.19. Hình ảnh đại thể vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép sau 1 tháng ghép xương được bảo quản ở -75ºC ba tháng.

Hình 3.20. Hình ảnh đại thể vùng mô xung quanh xương ghép sau 1 tháng ghép xương được bảo quản ở -75ºC ba tháng.

1. Xương ghép; 2. Mô liên kết dưới da; 3. Da

- Về vi thể:

Quan sát vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng dưới kính hiển vi quang học trên 27 tiêu bản (từ 9 mẫu, 3 tiêu bản/ 1mẫu), chúng tôi có được nhâ ôn xét sau: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Về thâm nhiễm lympho bào: cả 9 mẫu ở mức đô ô ít

Về thâm nhiễm tương bào: 6 mẫu ở mức đô ô ít, 3 mẫu ở mức đô ô nhiều. Về thâm nhiễm đại thực bào: 8 mẫu ở mức đô ô ít, 1 mẫu ở mức đô ô nhiều.

Không còn hủy cốt bào xuất hiê ôn trên bề mă ôt xương ghép, nơi tiếp giáp giữa xương ghép và mô liên kết.

Không có thâm nhiễm bạch cầu đa nhân trung tính.

Hình 3.21. Hình ảnh vi thể cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng (HE x100).

1. Xương ghép; 2. Mô liên kết xung quanh xương ghép; 3. Khoảng gian bào giãn rô êng chứa dịch tiết; 4. Hốc tủy

Hình 3.22. Hình ảnh vi thể cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng (HE x250).

1. Xương ghép; 2. Hốc tủy; 3. Mô liên kết xung quanh xương ghép;

Hình 3.23. Hình ảnh vi thể cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép được bảo quản ở -75ºC ba tháng (HE x1000).

3.2.3. Cấu trúc vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép tươi

- Về đại thể:

Sau ghép 7 ngày, tất cả đều liền da kỳ đầu, vết mổ khô, không tiết dịch, không có viêm tấy đường mổ.

Sau ghép 1 tháng, vết mổ liền sẹo hoàn toàn, không tiết dịch, không có viêm tấy đỏ. Xung quanh xương ghép có nhiều dịch tiết ra. Dịch trong suốt, không có máu, không có mủ.

Hình 3.24. Vết mổ sau 7 ngày ghép xương tươi.

1. Vết mô

Hình 3.25. Vết mổ sau 1 tháng ghép xương tươi.

Hình 3.26. Hình ảnh đại thể vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép sau 1 tháng ghép xương tươi.

1. Xương ghép; 2. Mô liên kết dưới da; 3. Cân cơ lưng

Hình 3.27. Hình ảnh đại thể vùng mô xung quanh xương ghép sau 1 tháng ghép xương tươi.

1. Xương ghép; 2. Mô liên kết dưới da; 3. Da; 4. Khoang chứa dịch tiết

- Về vi thể:

Quan sát vùng ghép, vùng mô xung quanh xương ghép tươi dưới kính hiển vi quang học trên 15 tiêu bản (từ 5 mẫu, 3 tiêu bản/ 1mẫu), chúng tôi có được nhâ ôn xét sau:

Về thâm nhiễm lympho bào: cả 5 mẫu ở mức đô ô nhiều.

Về thâm nhiễm tương bào: 2 mẫu ở mức đô ô ít, 2 mẫu ở mức đô ô trung bình, 1 mẫu ở mức đô ô nhiều.

Tất cả các mẫu còn hủy cốt bào trên bề mă ôt xương ghép, nơi tiếp giáp giữa xương ghép và mô liên kết.

Không có thâm nhiễm bạch cầu đa nhân trung tính. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Tất cả các mẫu có vùng mô liên kết càng sát mảnh xương ghép có sự phân bố mạch máu, nguyên bào sợi, tế bào sợi và sợi collagen càng nhiều.