- Gà các lứa tuổi, ở các phương thức nuôi khác nhau.
- Mẫu bệnh phẩm (gan, manh tràng) của gà bị mắc bệnh đầu đen và gà khỏe.
* Hoá chất nghiên cứu:
- Dung dịch formaldehyd 5% - Cồn 90o
- Dầu bạch dương
- Hệ thống nhuộm HE (Hemotoxilin - Eosin) - Dung dịch Barbagallo
* Dụng cụ dùng trong nghiên cứu:
- Máy cắt tế bào Microtome
- Kính hiển vi quang học, kính lúp - Lam kính, lamen
- Bộ đồ mổ tiểu gia súc - Giá để tiêu bản
* Các hóa chất và dụng cụ thí nghiệm khác
3.2. Địa điểm, thời gian nghiên cứu
* Địa điểm nghiên cứu
- Đề tài được thực hiện tại các nông hộ, các trại chăn nuôi gia đình với qui mô khác nhau tại 4 xã: An Thượng, Tân Hiệp, Tam Hiệp, Tiến Thắng ở huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang.
24
- Địa điểm xét nghiệm mẫu:
+ Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
+ Bệnh viện đa khoa Trung ương Thái Nguyên
* Thời gian nghiên cứu
Từ 01/07/2014 - 16/12/2014
3.3. Nội dung nghiên cứu
3.3.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh đầu đen ở gà tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang.
3.3.1.1.Thực trạng công tác phòng chống dịch bệnh cho gà ở huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang.
3.3.1.2. Nghiên cứu tình hình nhiễm H. meleagridis ở gà qua mổ khám
- Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà tại các địa phương - Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà theo lứa tuổi
- Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà theo phương thức chăn nuôi - Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà theo kiểu nền chuồng nuôi - Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà theo điều kiện vệ sinh thú y
3.3.1.3. Nghiên cứu sự liên quan giữa bệnh đầu đen và bệnh giun kim ở gà
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm giun kim ở gà mổ khám
- Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis trong số gà nhiễm giun kim
- Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis trong số gà không nhiễm giun kim
- Sự ô nhiễm trứng giun kim ở nền chuồng, xung quanh chuồng và vườn chăn thả gà.
3.3.2. Sử dụng thuốc điều trị bệnh đầu đen cho gà
-Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh cho gà trên thực địa - Đề xuất một số biện pháp phòng trị bệnh đầu đen cho gà
25
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.1. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh đầu đen do H. meleagridis gây nên ở gà nuôi tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang.
3.4.1.1. Phương pháp điều tra công tác phòng chống dịch bệnh cho gà tại huyện Yên Thế, tỉnhBắc Giang.
Chúng tôi tiến hành hai phương pháp chủ yếu trong quá trình nghiên cứu, bao gồm:
- Trực tiếp quan sát: đến địa bàn nghiên cứu, quan sát đàn gà và khu vực chăn nuôi gà.
- Phỏng vấn và phát phiếu điều tra các hộ chăn nuôi gà để thu nhận thông tin.
3.4.1.2. Bố trí thu thập gà để mổ khám và phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà nuôi tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang
a) Bố trí lấy mẫu
Bố trí thu thập gà để mổ khám theo phương pháp lấy mẫu phân tầng. Ởhuyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang: chọn 4 xã, mỗi xã mổ khám 75 gà.
* Bố trí lấy mẫu gà mổ khám theo các địa phương nghiên cứu
Mổ khám gà tại các địa phươngtheo số lượng cụ thể như sau:
Địa phương (xã) Số gà mổ khám (con)
An Thượng 75
Tân Hiệp 75
Tam Hiệp 75
Tiến Thắng 75
Tính chung 300
* Bố trí lấy mẫu gà mổ khám theo tuổi gà.
Thu thập gà để mổ khám ở 4 lứa tuổi. Số lượng gà các lứa tuổi mổ khám được bố trí cụ thể như sau:
26
Lứa tuổi (tháng tuổi) Số gà mổ khám (con)
≤ 1 58
> 1 – 3 97
> 3 – 5 73
> 5 72
Tính chung 300
* Bố trí lấy mẫu gà mổ khám theo phương thức chăn nuôi
Tiến hành mổ khám gà với số lượng theo các phương thức chăn nuôi như sau:
Phương thức chăn nuôi Số gà mổ khám (con)
Chăn thả hoàn toàn 96
Bán chăn thả 118
Nuôi nhốt 86
Tính chung 300
* Bố trí lấy mẫu gà mổ khám theo kiểu nền chuồng nuôi
Mổ khám gà nuôi trên các kiểu nền chuồng với số lượng như sau:
Kiểu nền chuồng Số gà mổ khám (con)
Nền đất 129
Nền xi măng hoặc lát gạch 171
Tính chung 300
* Bố trí lấy mẫu gà mổ khám theo tình trạng vệ sinh thú y (VSTY) Đánh giá tình trạng vệ sinh theo 3 mức:
- VSTY tốt: chuồng trại cao ráo, thoáng mát, sạch sẽ, thường xuyên quét dọn chuồng nuôi và khu vực xung quanh chuồng nuôi, thu gom phân và chất độn chuồng để ủ, định kỳ khử trùng, tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, phát quang cây cỏ, khơi thông cống rãnh.
27
- VSTY trung bình: không thường xuyên quét dọn chuồng nuôi và khu vực xung quanh chuồng nuôi, chuồng nuôi không được làm khô ráo, còn có những vũng nước đọng; không thường xuyên tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi và phát quang cây cỏ; không thường xuyên khơi thông cống rãnh ở gần khu vực chăn nuôi.
- VSTY kém: chuồng gà làm ở chỗ đất trũng, trong chuồng và khu vực xung quanh chuồng rất ẩm thấp, có nhiều vũng nước đọng, có nhiều cỏ cây um tùm, không tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, không khơi thông cống rãnh.
Tiến hành mổ khám gà ở 3 tình trạng vệ sinh thú y theo số lượng sau:
Tình trạng VSTY Số gà mổ khám (con)
Tốt 92
Trung bình 134
Kém 74
Tính chung 300
b) Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà tại các địa phương
Tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà được xác định bằng sự kết hợp giữa các phương pháp sau:
* Quan sát triệu chứng lâm sàng * Mổ khám kiểm tra bệnh tích * Soi tươi manh tràng
* Làm tiêu bản tổ chức học theo quy trình tẩm đúc parafin, nhuộm Hematoxilin - Eosin manh tràng và gan.
Các phương pháp cụ thể như sau:
* Quan sát triệu chứng lâm sàng: triệu chứng toàn thân, mào tích, da vùng đầu và mép, phân (màu sắc và trạng thái phân).
28
* Mổ khám bệnh tích
Trước khi mổ khám, ghi nhật ký thí nghiệm các thông tin: chủ hộ, địa chỉ, ngày lấy mẫu, tuổi gà, phương thức chăn nuôi, điều kiện vệ sinh thú y, kiểu nền chuồng.
Phương pháp mổ khám gà: mổ khám gà theo phương pháp mổ khám toàn diện, quan sát bằng mắt thường và kính lúp các nội quan như thận, lách, tim, phổi, đặc biệt là gan và manh tràng để xác định những biến đổi đại thể, chụp ảnh vùng có bệnh tích điển hình.
* Phương pháp soi tươi manh tràng
Tiến hành mổ khám cơ quan tiêu hoá gà (Theo Trịnh Văn Thịnh, 1963 [10]; Phạm Văn Khuê và cs. 1996 [2]). Dùng dao mổ nạo nhẹ niêm mạc manh tràng, lấy một ít niêm mạc và chất chứa trong manh tràng (bằng hạt đỗ xanh) cho lên phiến kính đã có sẵn 1 giọt nước cất; dùng góc la men khuấy đều rồi đậy lamen lên để dàn thành một lớp mỏng; sau đó soi dưới kính hiển vi (10 x 20 hoặc 10 x 40) để phát hiện H. meleagridis qua sự di chuyển đơn bào nhờ sự vận động của roi.
* Phương pháp làm tiêu bản tổ chức học theo quy trình tẩm đúc parafin, nhuộm Hematoxilin - Eosin.
Các bước tiến hành:
+ Lấy mẫu bệnh phẩm (gan, manh tràng): cắt phần bệnh phẩm có nhiều tổn thương.
+ Cố định bệnh phẩm bằng dung dịch formon 10%.
+ Rửa nước 12 - 24 h (rửa dưới dòng nước chảy nhẹ) để bệnh phẩm trôi hết formol.
+ Khử nước: dùng cồn tuyệt đối để rút nước từ trong bệnh phẩm ra + Làm trong bệnh phẩm: ngâm bệnh phẩm qua hệ thống xylen để làm trong bệnh phẩm
29
+ Tẩm parafin: ngâm bệnh phẩm đã làm trong vào các cốc đựng paraffin nóng chảy, để ở tủ ấm nhiệt độ 500C.
+ Đổ Block: rót parafin nóng chảy vào khuôn giấy rồi đặt miếng tổ chức (bệnh phẩm) đã tẩm parafin vào. Khi parafin đông đặc hoàn toàn thì bóc khuôn. Sửa lại Block cho vuông vắn.
+ Cắt và dán mảnh: cắt bệnh phẩm trên máy cắt Microcom, độ dày mảnh cắt khoảng 3 - 4 µm. Dán mảnh cắt lên phiến kính bằng dung dịch Mayer (lòng trắng trứng 1 phần, glyxerin 1 phần; 1 ml hỗn hợp trên pha trong 19 ml nước cất).
+ Nhuộm tiêu bản bằng phương pháp Hematoxilin - Eosin
+ Gắn lamen bằng Baume canada, dán nhãn và đọc kết quả dưới kính hiển viquang học độ phóng đại 150 - 600 lần.
3.4.1.3. Phương pháp nghiên cứu sự liên quan giữa bệnh đầu đen và bệnh giun kim ở gà
* Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm giun kim gà qua mổ khám
- Phương pháp mổ khám, thu thập giun kim
Mổ khám gà theo phương pháp mổ khám không toàn diện cơ quan tiêu hoá. Lấy toàn bộ chất chứa trong manh tràng và ruột già để xét nghiệm bằng phương pháp lắng cặn Benedek (1943), thu thập toàn bộ số giun kim có trong mỗi gà.
Những mẫu có giun kim được đánh giá là có nhiễm, ngược lại là không nhiễm.
- Phương pháp xác định cường độ nhiễm giun kim
Cường độ nhiễm được xác định bằng đếm số lượng giun kim ký sinh/gà: ≤ 100 giun kim/gà: nhiễm nhẹ
> 100 - 500 giun kim/gà: nhiễm trung bình
30
* Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở những gà nhiễm giun kim và gà không bị nhiễm giun kim
Kết hợp quan sát triệu chứng lâm sàng, soi tươi manh tràng, làm tiêu bản tổ chức học theo quy trình tẩm đúc parafin, nhuộm Hematoxilin - Eosin manh tràng và gan của gà mổ khám (những gà này đã xác định được là nhiễm hoặc không nhiễm giun kim). Những gà có H. meleagridis được đánh giá là có nhiễm, ngược lại là không nhiễm.
* Phương pháp nghiên cứu sự ô nhiễm trứng giun kim ở khu vực nền chuồng, xung quanh chuồng nuôi và vườn chăn thả gà.
- Phương pháp thu thập mẫu
+ Mẫu cặn nền chuồng: tại mỗi ô chuồng lấy mẫu cặn ở 4 góc và ở giữa ô chuồng, trộn đều được một mẫu xét nghiệm có khối lượng 100 g/mẫu. Mỗi mẫu được để riêng trong túi nilon có ghi nhãn: tên chủ hộ, địa điểm, thời gian lấy mẫu. Mẫu được xét nghiệm ngay trong ngày.
+ Mẫu đất bề mặt xung quanh chuồng nuôi: trong khoảng bán kính 5 m xung quanh chuồng gà, cứ 10 m2 lấy một mẫu đất bề mặt. Một mẫu có khối lượng 100 g, được trộn đều bởi 4 mẫu ở 4 góc và 1 mẫu ở giữa. Mỗi mẫu được để riêng trong túi nilon có ghi nhãn: tên chủ hộ, địa điểm, thời gian lấy mẫu.
+ Mẫu đất ở vườn chăn thả gà: cứ 10 m2 lấy một mẫu đất bề mặt. Một mẫu có khối lượng 100 g, được phối hợp bởi 4 mẫu ở 4 góc và 1 mẫu ở giữa. Mỗi mẫu được để riêng trong túi nilon có ghi nhãn: tên chủ hộ, địa điểm, thời gian lấy mẫu.
Để xác định sự ô nhiễm trứng giun kim ở khu vực nền chuồng, xung quanh chuồng nuôi và vườn chăn thả gà, tôi đã tiến hành kiểm tra 225 mẫu cặn nền chuồng, xung quanh chuồng nuôi và vườn chăn thả gà.
31
Loại mẫu Số mẫu kiểm tra (mẫu)
Nền chuồng 75
Xung quanh chuồng nuôi 75
Vườn chăn thả 75
Tính chung 225
- Phương pháp xét nghiệm mẫu: áp dụng phương pháp Gefter để phát hiện trứng giun kim.
Phương pháp Gefter: là phương pháp được sử dụng để xét nghiệm trứng giun trong đất.
Cách làm: Cho NaOH 5% vào mẫu đất theo tỉ lệ: 1,5 phần NaOH : 1 phần đất, đưa vào máy lắc 3 - 5 phút để tách trứng giun ra khỏi đất, sau đó đưa vào máy ly tâm tốc độ 3000 vòng/phút 2 - 3 phút. Gạn bỏ phần nước phía trên, giữ phần cặn có trứng giun, cho dung dịch NaNO3 bão hòa vào, trứng giun kim có tỉ trọng nhỏ hơn sẽ nổi lên trên, dùng vòng thép vớt trứng hoặc dùng lam kính cho tiếp xúc với bề mặt của dung dịch sẽ thu được trứng giun.
3.4.2. Phương pháp sử dụng thuốc điều trị bệnh đầu đen cho gà ở huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang
3.4.2.1. Sử dụng phác đồ điều trị bệnh đầu đen cho gà
- Sử dụng 02 phác đồ điều trị bệnh đầu đen cho gà, mỗi phác đồ gồm có:
+ Thuốc diệt đơn bào.
+ Thuốc điều trị triệu chứng.
+ Thuốc nâng cao thể trạng và sức đề kháng.
- Để xác định hiệu lực của phác đồ điều trị, chúng tôi sử dụng để điều trị bệnh đầu đen cho gà ngoài thực địa. Kiểm tra hiệu lực của từng phác đồ.
32
3.5. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu được được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học Theo tài liệu của Nguyễn Văn Thiện, 2008 [9], phần mềm Excel 2003 và một số công thức tính toán cụ thể như sau:
Tỷ lệ nhiễm (%) = Số gà nhiễm x 100 Số gà mổ khám
Tỷ lệ cường độ nhiễm (%) = Số gà nhiễm ở mỗi cường độ x 100 Số gà nhiễm
33
Phần 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Đặc điểm dịch tễ bệnh do đơn bào H. meleagridis ở gà tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang
4.1.1. Kết quảđiều tra thực trạng phòng chống dịch bệnh cho gà tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang
Công tác phòng chống dịch bệnh là một việc làm hết sức quan trọng nhằm hạn chế thấp nhất sự phát sinh và phát triển của dịch bệnh. Được sự giới thiệu của Trạm thú y huyện Yên Thế, chúng tôi đã đến khảo sát, phỏng vấn và phát phiếu điều tra các hộ gia đình tại 4 xã có quy mô chăn nuôi gà khác nhau. Kết quả điều tra được trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Thực trạng phòng chống dịch bệnh cho gà tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang Biện pháp sử dụng Số hộ điều tra (hộ) Số hộ áp dụng Tỷ lệ (%)
Vệ sinh chuồng trại và khu vực xung quanh chuồng trại
245
149 60,82 Định kỳ sát trùng chuồng trại và khu
vực chăn thả gà 102 41,63
Tẩy giun, sán định kỳ cho gà 156 63,67 Sử dụng vắc xin và thuốc phòng bệnh 126 51,43
Bảng 4.1 cho thấy: thực trạng công tác phòng chống dịch bệnh cho gà với các biện pháp khác nhau của các hộ gia đình tại huyện Yên Thế ở mức trung bình.Tỷ lệ hộ gia đình áp dụng các biện pháp vệ sinh chuồng trại và khu vực xung quanh chuồng trại đạt 60,82%, tỷ lệ số hộ chăn nuôi thực hiện việc sát trùng chuồng trại định kì và khu vực chăn thả gà đạt 41,63%. Tẩy giun,
34
sán định kỳ cho gà được thực hiện với tỷ lệ 63,67% trong tổng số hộ gia đình, việc sử dụng vắc xin và thuốc phòng bệnh đạt tỷ lệ 51,43%. Các con số trên thể hiện người chăn nuôi trên địa bàn đã ý thức được tầm quan trọng của công tác phòng chống dịch bệnh cho đàn gà, tuy nhiên có nhiều hộ vẫn chưa thực hiện tốt. Qua quá trình tiếp cận với thực tiễn ở cơ sở, chúng tôi nhận thấy phần lớn các hộ gia đình đã thực hiện đầy đủ quy trình phòng bệnh cho đàn gà, song vẫn còn những hộ gia đình môi trường chăn nuôi không đảm bảo: có nhiều cây cối um tùm, nhiều vũng nước lầy bẩn, phân và chất thải nằm trong khu chăn nuôi không được xử lý, sân vườn không được rắc vôi, tiêu độc, không khơi thông cống rãnh… Những điều kiện này là điều kiện thuận lợi cho các ký chủ trung gian truyền bệnh phát triển, ảnh hưởng đến sự an toàn dịch bệnh của vật nuôi.
4.1.2. Tình hình nhiễm đơn bào H. meleagridis ở gà tại huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang
4.1.2.1. Tỷ lệ nhiễm đơn bào H. meleagridis ở gà tại một số địa phương của huyện Yên Thế
Để có kết quả về tỷ lệ nhiễm H. meleagridis ở gà, chúng tôi đã tiến hành mổ khám ngẫu nhiên 300 con gà tại 4 xã của huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang gồm: xã An Thượng, xã Tân Hiệp, xã Tam Hiệp và xã Tiến Thắng. Kết quả được trình bày ở bảng 4.2.
Bảng 4.2. Tỷ lệ nhiễm H. meleagridisở gà tại một số địa phương của huyện Yên Thế
Địa phương (xã, thị trấn) Số gà mổ khám (con) Số gà nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) An Thượng 75 31 41,33 Tân Hiệp 75 21 28,00 Tam Hiệp 75 25 33,33 Tiến Thắng 75 27 36,00 Tổng 300 104 34,67
35
Kết quả bảng 4.2 cho thấy: gà ở các địa phương nghiên cứu đều nhiễm đơn bào H. meleagridis. Nhìn chung, tỷ lệ nhiễm đơn bào H.