a) Chiết lá Dừa cạn
5 kg bột lá Dừa cạn được trộn với hệ dung môi chiết: Dung dịch CH3COOH/etanol tỷ lệ 0,5/10 cho ngấm đều. Khối nguyên liệu nhão được nạp vào thiết bị chiết 80 lít, đổ thêm dung môi chiết tương ứng cho ngập hết nguyên liệu rồi ngâm qua đêm. Dịch chiết được rút kiệt ra khỏi thiết bị qua
đường van tháo dịch, bổ xung dung môi chiết vào thiết bị chiết và tiếp tục tiến hành chiết ngâm kiệt hai lần, dịch chiết không còn cho phản ứng dương tính
Sơđồ 2.3.1: Quy trình chiết, tách Vinca ancaloid
với thuốc thử Dragendorff – Munier. Các dịch chiết được gộp lại, cô loại dung môi dưới áp suất thấp (~100 mmHg) đến thể tích 1/10 rồi đem chiết phân bố với dung môi hữu cơ để thu nhận “ancaloid tổng sô”. Kết quả thu
được 3 lít dịch cô, các thông số kỹ thuật chi tiết như sau: - Lượng nguyên liệu: 5kg Lá Dừa cạn;
- Dung môi chiết: CH3COOH/etanol 90% = 0,5/10 (v/v);
- Lượng dung môi chiết sử dụng để trộn nguyên liệu trước khi chiết: 10 lít; Nguyên liệu Dừa cạn (Catharanthus roseus L.) Chiết Axít/Ancol Kiềm hóa Chiết loại chất béo và chất màu
Axít; dung môi ít phân cực Bazơ Chiết ancaloid Dung mối dẫn xuất Clo “Ancaloid tổng số” Phân tách sắc ký Các hoạt chất tinh khiết
- Lượng dung môi sử dụng cho mỗi lượng chiết: 10 lít; - Thời gian ngâm chiết của mỗi lượt chiết: 12 giờ; - Số lượt chiết: 3 lượt;
- Lượng etanol thu hồi (nồng độ 90%): 35 lít; - Lượng dịch cô thu nhận được sau khi chiết: 3 lít. b) Loại bỏ các chất béo, chất màu
Khuấy dịch cô trong thiết bị chiết với tốc độ 50 – 70 vòng/phút, bổ
sung n-Hexan vào dịch chiết đến tỷ lệ Dịch cô/n-Hexan = 3/1 theo thể tích. Tổng cộng đã sử dụng 1 lít n-Hexan. Tiếp tục khuấy trong 30 phút thì dừng lại, để tĩnh hỗn dịch trong 12 giờ ở nhiệt độ phòng. Bùn diệp lục và các chất màu không tan được tách ra khỏi hỗn dịch bằng lọc vắt ly tâm qua giấy lọc dầu với tốc độ ly tâm 1200 vòng/phút. Dùng phễu chiết tách lấy lớp dịch nước axít chứa ancaloid ra khỏi hỗn dịch lọc. Dịch chiết n-Hexan được cô kiệt để
thu hồi lại n-Hexan.
Các thông số kỹ thuật chủ yếu là:
- Lượng n-Hexan sử dụng để ngưng tụ keo và chất màu không tan: 1 lít;
- Màng lọc ly tâm: Giấy lọc dầu loại dày 1,5 – 3 mm; - Tốc độ lọc vắt ly tâm: 1200 vòng/phút;
- Lượng n-Hexan thu hồi: 0,8 lít;
- Lượng dịch nước axít chứa ancaloid: ~ 2 lít. c) Chiết thu nhận “ancaloid tổng số”
Dịch nước axít chứa ancaloid được trung hòa bằng NH4OH 40% đến pH ~10 để hoàn nguyên ancaloid rồi chiết bằng clorofoc nhiều lần cho đến khi dịch chiết thử không còn ancaloid thì dừng lại. Tổng cộng đã chiết 3 lần, mỗi lần với 2 lít clorofoc. Các dịch chiết được gộp lại, cô kiệt clorofoc, thu
được 49 g “Vinca ancaloid” – Ký hiệu là mẫu VAB, chiếm tỷ lệ ~1% so với nguyên liệu khô.
Các thông số kỹ thuật chủ yếu:
- Lượng clorofoc sử dụng cho mỗi lượng chiết: 2 lít; - Số lượt chiết phân bố: 3 lượt;
- Lượng clorofoc thu hồi; 4,5 lít;
- Lượng “ancaloid tổng số” thu được từ 5 kg Lá Dừa cạn: ~49 g.