+ Máy phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR AM500 FT-NMR spectrometer.
+ Máy sắc ký lỏng cao áp ghép nối khối phổ (ESI) AGILENT 1100 LC-MSD Trap spectrometer.
+ Thiết bị đo điểm nóng chảy Kofler micro-hotstage. + Thiết bị đo độ quay cực JASCO.
2.5.Hoá chất
+ Silica gel 60 (0,04 - 0,063 mm) Merck.
+ Silica gel pha đảo ODS hoặc YMC (30- 50|Lim,FuJisilisa Chemical
Ltd).
+ Bản mỏng tráng sẵn pha thường DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715).
+ Bản mỏng tráng sẵn pha ngược RP18 F254s (Merck).
+ Bản mỏng điều chế pha thường DC-Alufolien 60 F254 (Merck). + Các loại dung môi hữu cơ như metanol, etanol, etyl axetate, cloroíòc, hexan, axetone... là loại hóa chất tinh khiết của Merck.
CHƯƠNG 3: THựC NGHIỆM
3.1.Thu mẫu thực vật và xử lý mẫu
Mau lá cây Đước vòi - Rhỉiophora stylosa (15 kg tươi), được rủa
sạch, phơi khô trong bóng râm, sau đó sấy bằng tủ sấy ở nhiệt độ 50°c, sau cùng đem nghiền nhỏ thành bột thu được 3,5 kg bột khô.
3.2.Phân lập các hợp chất
Rhiiophora styỉosa 3.5 kg kho
Chiết siêu ầm lợp lợi 3 lần với SíeOH ơ 27°c
Cao chiết MeOH 450 g
Hình 3.1. Sơ đồ chiết phân đoạn mẫu cây Đước vòi Mầu Đước vòi - Rhiiophora styỉosa (3.5 kg) được đem nghiền nhỏ sau đó được chiết với MeOH ba lần. Phần dịch chiết được quay khô dưới áp suất thấp để tạo thành cặn chiết MeOH (450 g). Phần cặn chiết sau đó được phân bố trong nước cất và phân lớp với dung môi /2-Hexan, Diclomethan thu được cặn chiết /Ĩ-Hexan (80g), CHCI3 (20 g), phần dịch nước (lOOg) và phần không tan.
Cặn chiết /Ĩ-Hexan (DV-H, 80g) và cặn chiết Cloroform (DV-C, 20 g) được kiểm tra trên bản mỏng TLC, nhận thấy hầu hết các vết giống nhau nên chúng tôi tiến hành gom chung 2 phần dịch chiết mục đích lấy lượng lớn, ký hiệu (DV-H, 100 g). Sau đó, phần dịch chiết được tiến hành phân tách thô trên sắc ký cột silicagel pha thường với hệ dung môi rửa giải gradient 11- Hexan /Axetone từ 0/1 đến 1/0 thu được 07 phân đoạn là DV-
H1, DV-H2, DV-H3, DV-H4, DV-H5, DV-H6, DV-H7. Phân tách phân đoạn DV-H5 (5.2 g) bằng sắc ký cột silica gel pha thường sử dụng hệ dung môi rửa giải CHCl3/MeOH 15/1 thu được 5 phân đoạn DV-H5A, DV-H5B,
Me0H/H20 1/1.5 thu được 2 phân đoạn DV-H5B1 và DV-H5B2. Tinh chế phân đoạn DV- H5B1 bằng sắc ký cột silica gel pha thường sử dụng hệ dung môi rửa giải CHCỈ3/Me0H/H20 20/1/0.1 thu được 2 hợp chất sạch
DV10 (3.5 mg) và DV12 (5.0 mg). Tiếp tục tinh chế phân đoạn DV-H5B2
bằng sắc ký cột silica gel sephadex sử dụng hệ dung môi rửa giải Me0H/H20 1/2 thu được 2 hợp chất sạch DV8A (3.0 mg).
Cao chiết DV-H (lOOg) CC: hệ HA gradien 10- 01 DV-H1 DV-H2 DV-H3 DY-H4 DV-H5 CC: CU 151 YMC: MW 1 1.5 - Hình 3.2. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cây Đước vòi
DV-H6 DV-H DV- DV- DV- DV- DV- YMC: DV- DV- H5 H5 H5 Seph aclex CC: cww DV12 DV8A (5.0 IĨ12) V J (3.0 ing) DY1 0 (3.5 mg)
4.1.Xác định cấu trúc của hợp chất DV8A: (7S,8R)- 3,3',5-Trimethoxy- 4',7-epoxy-8,5'- neolignan-4,9,9'- triol Hợp chat DV8A phân lập được từ phân đoạn CHCI3 của mẫu cây Đước vòi, có bột vô định hình, không màu. Các phổ NMR
của DV8A được đo trong dung môi MeOD. Phổ 'H-NMR của hợp chất này ở vùng trường yếu có các tín hiệu của 2 proton thơm thuộc một vòng benzen A thế đối xứng 4 vị trí cộng hưởng tại Ôh 6.70 (2H, s) và 2 proton thơm khác thuộc một vòng benzen B thế 4 lần tại các vị trí 1, 3,
tử còn có 3 nhóm methoxy, trong đó 2 nhóm thế đối xứng vào vòng thơm A cộng hưởng tại Ôh 3.83 (6H, s) và nhóm còn lại thế vào vòng thơm B cho tín hiệu tại Ôh 3.88 (3H, s). Bên cạnh đó phân tử còn có các nhóm oximetilen tại 3.78/3.85, 3.59 (2H, t,
J = 7.0 Hz), nhóm oximetin tại ÔH 5.52 (1H, d, J = 6.5 Hz), 2 nhóm metilen tại Ôh 1.84 và 2.65 ppm, một nhóm metin tại Ôh 3.49 (1H, m).
DV8A— MeOD—1H