3. Ý nghĩa lí luận và thực tiễn của đề tài
1.3.2 Nghiên cứu về nuôi trồng cây lan Dendrobium sau nuôi cấy mô
1.3.2.1 Ảnh hưởng của giá thể
Giá thể có nghĩa quan trọng đối với nuôi trồng cây lan, đặc biệt là trong giai đoạn vƣờn ƣơm. Sử dụng giá thể phù hợp sẽ giữ ẩm giữ cho cây sinh trƣởng, phát triển tốt.
Nhiều tác giả Trung Quốc đã quan tâm nghiên cứu về ảnh hƣởng của giá thể đến sinh trƣởng, phát triển của cây lan Dendrobium. Gong Jian-ying và cộng sự
(2007) [28] nhận thấy giả thể gồm đá núi lửa+ xơ dừa+ than củi theo tỷ lệ 1: 2: 1 thích hợp cho trồng lan Dendrobium.
Theo Pan Chun-xiang và cộng sự (2009) [31] các loại giá thể vỏ cây, mùn cƣa, gạch vụn,... đã ảnh hƣởng đến cấu trúc rễ của cây D.chrysanthum. Kết quả cho thấy các cây trồng trên giá thể gạch vụn có số tế bào chóp rễ nhiều hơn và thành của các tế bào nhu mô tùy và nhu mô mạch của rễ lại dày hơn so với trồng trên các loại giá thể khác.
Fan Min Fu Yulan (2008) [27] cho rằng giá thể phù hợp để trồng D. nobile là vỏ cây+ rong biển (dớn). Trong khi Pan Chun-xiang (2009) [31] lại kết luận, sau khi ra cây trên 6 loại giá thể khác nhau lại khẳng định giá thể tốt nhất cho cây D. nobile
cấy mô là xơ dừa.Một số tài liệu cho rằng mùn cƣa là giá thể tốt hơn cho D. nobile so với vỏ cây, rêu hay đất mùn.
1.3.2.2 Ảnh hưởng của dinh dưỡng
Trong giai đoạn vƣờn ƣơm. Cây lan cấy mô đƣợc cung cấp dinh dƣỡng dƣới dạng phun dung dịch phân bón lên toàn bộ bề mặt cây. Theo cây lan Dendrobium
cấy mô sau khi ra cây 2 tuần mới cần cung cấp dinh dƣỡng và tỷ lệ phân bón N: P: K phù hợp là 3: 1: 1 hoặc 3: 1: 2 với chu kỳ phun là 01 lần tuần, khi cây chuyển sang chậu đơn thì dùng tỷ lệ phân bón N: P: K là 14: 14: 12.
Fan Min Fu Yulan (2008) [27] cũng nhận đƣợc kết quả tốt nhất khi dùng tỷ lệ phân bón N: P: K là 1: 1: 1 với nồng độ 0,7% cho cây lan D. nobile một năm tuổi. Bên cạnh phân bón, một số chế phẩm sinh học cũng đã đƣợc sử dụng để k ch th ch sinh trƣởng, phát triển của lan Dendrobium.
Leena Kechacupt (1987) [30] đã phun Triacontanol cho cây Dendrobium Hepa tám tháng tuổi và kết luận rằng dung dịch Triacontanol nồng độ 1mg l t đã làm tăng số lƣợng cành hoa cây và làm cây ra hoa sớm hơn đối chứng.
Uthairatanakij (2008) [32] và cộng sự đã sử dụng dung dịch Chitosan với nồng độ từ 200 đến 600mg l t để làm tăng khối lƣợng cành hoa, k ch thƣớc cánh hoa của lan Dendrobium Sonia.
CHƢƠNG 2. ĐỐI TƢỢNG,VẬT IỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 Đối tƣợng, vật liệu nghi n cứu
2.1.1 Đối tượng
Loài lan bản địa Hoàng Thảo Thạch Hộc (Dendrobium nobile Lindl.) thuộc chi Hoàng Thảo (Dendrobium) đƣợc cung cấp bởi phòng th nghiệm chuyên ngành Sinh l thực vật, khoa Nông học, trƣờng Đại học Nông Nghiệp Hà Nội.
Hình 2.1. Cây con invitro lan Hoàng Thảo Thạch Hộc chuẩn bị ra vƣờn ƣơm
2.1.2 Vật liệu
+ Các giá thể: Bột xơ dừa, xơ dừa, dớn.
+ Các chế phẩm dinh dƣỡng: Antonic, Komix, Đầu Trâu 501 ( uất xứ , thành phần, cách sử dụng đƣợc trình bày tại phần 2 của phụ lục).
+ Các chế phẩm sinh học: Zineb 80 WP, VINEEM 1500 EC, Bacillus thuringienis (Bt) và dịch chiết gừng, tỏi, ớt ( uất xứ, thành phần đƣợc trình bày tại phần 2 của phụ lục)
2.2 Địa điểm và thời gian nghi n cứu
2.2.1 Địa iểm
Các th nghiệm đƣợc tiến hành tại vƣờn ƣơm th nghiệm của khoa Nông học trƣờng Đại học Nông Nghiệp Hà Nội.
2.2.2 Thời gian
Thời gian thực hiện các th nghiệm từ 01 03 2013 tới 01/11/2013
2.3 Nội dung phƣơng pháp nghi n cứu
Tiến hành 5 th nghiệm theo d i và thu thập số liệu, tổng kết đánh giá
Th nghiệm 1: ác định ảnh hƣởng của thời vụ ra cây đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm.
Th nghiệm đƣợc tiến hành trên 3 công thức sau: CT1: Vụ xuân : Tháng 3
CT2: Vụ hè : Tháng 6 CT3: Vụ thu : Tháng 9
Tiến hành bố tr ra cây vào các thời vụ khác nhau để từ đó lựa chọn thời vụ ra cây hợp l nhất. Th nghiệm trên nguồn giống cây nuôi cấy mô, đƣợc bố tr trên 3 công thức, mỗi công thức bố tr trên 10 cây, 03 lần lặp lại công thức. Chọn cây nuôi cấy mô có cùng: chiều cao 4cm, 4 lá, 3 rễ. Các cây đƣợc trồng trên cùng một loại giá thể, đƣợc tƣới giữ ẩm hàng ngày, đảm bảo độ ẩm giá thể luôn khoảng 40%-60%.
Theo d i và thu kết quả sau 8 tuần nuôi trồng.
Th nghiệm 2: ác định ảnh hƣởng của các loại giá thể trồng đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm.
Thí nghiệm đƣợc tiến hành trên 4 công thức sau: CT1: Bột xơ dừa;
CT2: ơ dừa xé chỉ; CT3: Dớn;
CT4:½ Bột xơ dừa+½ ơ dừa
Th nghiệm trên nguồn giống cây nuôi cấy mô, đƣợc bố tr trên 4 công thức, mỗi công thức bố tr trên 10 cây, 03 lần lặp lại công thức. Chọn cây nuôi cấy mô có cùng: chiều cao 4cm, 4 lá, 3 rễ. Cây đƣợc trồng vào vụ xuân đƣợc trồng trên giá thể theo từng công thức và đƣợc tƣới nƣớc hàng ngày. Theo d i và thu kết quả sau 8 tuần nuôi trồng.
Th nghiệm 3: ác định ảnh hƣởng của ẩm độ giá thể đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm.
Th nghiệm đƣợc tiến hành trên 4 công thức sau: CT1: 40%;
CT2: 50%; CT3: 60%; CT4: 70%
Th nghiệm trên nguồn giống cây nuôi cấy mô có cùng chiều cao 4cm, 4 lá, 3 rễ, đƣợc bố tr trên 4 công thức, mỗi công thức bố tr trên 10 cây, 03 lần lặp lại công thức. Cây đƣợc trồng vào vụ xuân trên cùng giá thể bột xơ dừa. Theo d i và thu kết quả sau 8 tuần nuôi trồng.
Th nghiệm 4: ác định ảnh hƣởng của các loại chế phẩm dinh dƣỡng đến khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm.
Th nghiệm đƣợc tiến hành trên 3 công thức sau: CT1: Phun chế phẩm Antonic
CT2: Phun chế phẩm Komix CT3: Phun chế phẩm Đầu Trâu
Ghi chú: Phun định kỳ 1 lần/tuần
Th nghiệm trên nguồn giống cây nuôi cấy mô. Chọn cây nuôi cấy mô có cùng: chiều cao 4cm, 4 lá, 3 rễ. đƣợc bố tr trên 3 công thức, mỗi công thức bố tr trên 10 cây, 03 lần lặp lại công thức. Các cây đƣợc trồng vào vụ xuân , trên cùng một giá thể bột xơ dừa. Các cây đƣợc tƣới giữ ẩm bằng nƣớc lã trong 01 thángđảm bảo độ ẩm giá thể luôn khoảng 40%- 50%. Sau 01 tháng sử dụng các loại chế phẩm dinh dƣỡng, định kỳ 01 lần tuần theo từng công thức th nghiệm. Nồng độ pha của từng loại chế phẩm dinh dƣỡng đều theo chỉ dẫn ghi trên bao bì, phun ƣớt toàn bộ thân lá, lƣợng phun khoảng 100ml lần khay trồng 30 cá thể. Các ngày không tƣới chế phẩm dinh dƣỡng đảm bảo độ ẩm của giá thể trồng bằng nƣớc lã. Theo d i và thu kết quả sau 8 tuần nuôi trồng.
Th nghiệm 5: ác định ảnh hƣởng của các loại chế phẩm sinh học trong phòng trừ sâu bệnh đến khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile
Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm.
Th nghiệm đƣợc tiến hành trên 4 công thức: CT1: Zineb 80WP
CT2: VINEEM 1500 EC
CT3: Chế phẩm Bacillus thuringienis (Bt)
CT4: Chế phẩm sinh học ủ với dịch chiết (gừng, tỏi, ớt). Ghi chú: Phun định kỳ ½ tháng một lần.
Th nghiệm trên nguồn giống cây nuôi cấy mô, đƣợc bố tr trên 4 công thức, mỗi công thức bố tr trên 10 cây, 03 lần lặp lại công thức. Chọn cây nuôi cấy mô có cùng: chiều cao 4cm, 4 lá, 3 rễ. Các cây đƣợc trồng trên bột xơ dừa, đƣợc tƣới giữ ẩm hàng ngày, đảm bảo độ ẩm giá thể luôn khoảng 40%- 50% và phun chế phẩm Komix 0,5ml l t 1 lần tuần. Theo d i và thu kết quả sau 8 tuần nuôi trồng.
2.4 Các chỉ ti u theo dõi
Trong quá trình cấy đánh gá về tỉ lệ sống của cây con, chất lƣợng của cây con (màu lá, bộ rễ, chiều cao cây, số lá, số rễ)
- Chiều cao cây (cm): ác định bằng phƣơng pháp đo trực tiếp từ cổ rễ đến đỉnh sinh trƣởng.
- Số lá: Đƣợc xác định bằng phƣơng pháp đếm tổng số lá trên cây - Số rễ: Đƣợc xác định bằng phƣơng pháp đếm tổng số rễ trên cây
2.5 Phƣơng pháp xử lí số liệu
Số liệu đƣợc xử l theo chƣơng trình IRRSTART4.0 và phần mềm Excel 2003
Tổng số cây sống
Tổng số cây đƣa ra trồng ngoài vƣờn ƣơm
x 100%
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO UẬN
3.1 Ảnh hƣởng của thời vụ trồng đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của loài lan Dendrobium nobile indl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm loài lan Dendrobium nobile indl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm
Mỗi mùa trong năm ở miền Bắc nƣớc ta lại có các đặc điểm về nhiệt độ, ánh sáng, biên độ nhiệt ngày… khác nhau do đó phần nào mùa vụ sẽ ảnh hƣởng đến tỉ lệ sống và chất lƣợng cây con. Ch nh vì vậy chúng tôi đã tiến hành ra cây theo các thời điểm khác nhau để từ đó lựa chọn thời vụ ra cây hợp l nhất
Kết quả thu đƣợc sau 8 tuần nuôi trồng trình bày ở bảng 3.1:
Bảng 3.1. Ảnh hƣởng của thời vụ trồng đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của loài lan Dendrobium nobile Lindl. Nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn
ƣơm. Công thức Tỷ lệ sống (%) Chiều cao cây (cm) Số lá /cây (lá) Số rễ /cây (rễ) Hình thái cây con CT1: Tháng 3 93,33 5,15 5,57 4,89 Cây xanh đậm, ra rễ mới CT2: Tháng 6 66,67 4,65 5,30 4,80 Cây xanh, ra rễ mới CT3: Tháng 9 73,33 4,97 5,23 4,82 Cây xanh, ra rễ mới
Hình 3.1. Ảnh hƣởng của thời vụ ra cây đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn
ƣơm. (Sau 8 tuần nuôi trồng)
Bảng 3.1 và hình 3.1 cho thấy, CT1 ra cây vào tháng 3 (mùa xuân) cho các chỉ số sinh trƣởng phát triển cây con in vitro đạt cao nhất: tỷ lệ sống đạt 93,33%; chiều cao cây TB: 5,15 cm; số lá /cây là 5,57 lá; số rễ cây đạt 4,89 rễ và chất lƣợng cây con tốt nhất.
Nhƣ vậy, thời vụ th ch hợp nhất để trồng cây con in vitro ngoài vƣờn ƣơm là tháng 3 (vụ xuân).
CT1 CT2
3.2 Ảnh hƣởng của các loại giá thể trồng đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm
Giá thể (chất trồng) trồng cây hoa lan rất quan trọng, liên quan đến suốt quá trình sinh trƣởng và phát triển của cây. Các loại giá thể trồng lan đƣợc biết đến bao gồm than củi, xơ dừa, gỗ, than, dớn, rêu, rễ bèo, dƣơng xỉ, ... Nhƣng đối với cây lan con nuôi cấy mô thì giá thể nào sẽ phù hợp để cây có tỷ lệ sống cao, chất lƣợng cây con tốt? Để trả lời cho câu hòi này chúng tôi đã tiến hành th nghiệm nghiên cứu ảnh hƣởng của giá thể đến tỷ lệ sống và chất lƣợng cây con ngoài vƣờn ƣơm của giống lan Hoàng thảo Dendrobium nobile Lindl. với 4 loại giá thể: xơ dừa xé chỉ, bột xơ dừa, dớn, ½ Bột xơ dừa+½ ơ dừa.
Sau 8 tuần theo d i cho kết quả qua bảng 3.2:
Bảng 3.2. Ảnh hƣởng của các loại giá thể trồng đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô
giai đoạn vƣờn ƣơm
Công thức Tỷ lệ sống (%) Chiều cao cây (cm) Số lá /cây (lá) Số rễ /cây (rễ) Hình thái cây con CT1: Bột xơ dừa 96,67 5,34 5,48 5,34 Lá xanh, ra rễ mới CT2: ơ dừa xé chỉ 66,67 4,54 4,30 3,55 Lá xanh nhạt, không ra rễ mới CT3: Dớn 73,33 5,18 5,18 4,95 Lá xanh, ra rễ mới CT4: ½ Bột xơ dừa+½ ơ dừa 90,0 5,27 5,26 5,22 Lá xanh, ra rễ mới
Hình 3.2. Ảnh hƣởng của giá thể đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm.
Theo kết quả bảng 3.2 và hình 3.2, cây con trồng trong các giá thể ơ dừa xé chỉ (CT2) và Dớn (CT3) cho tỷ lệ sống (66,67%; 73,33%) và các chỉ tiêu theo d i thấp, cây con không ra hoặc ra t rễ mới. Tiếp theo, cây con trồng trong giá thể có ½ Bột xơ dừa+½ ơ dừa (CT4) có tỷ lệ sống cũng nhƣ các chỉ tiêu theo d i khá cao (tỷ lệ sống 90,0%; chiều cao cây 5,27cm; số lá /cây: 5,26 lá; số rễ cây đạt 5,22 rễ). Các cây con trồng trong giá thể Bột xơ dừa (CT1) tạo điều kiện thuận lợi nhất cho sinh trƣởng phát triển của cây (tỷ lệ sống là 96,67%; chiều cao cây TB đạt 5,34 cm; số lá /cây là 5,48 lá; số rễ cây đạt 5,34 rễ), cây có màu sắc xanh tƣơi, ra nhiều rễ mới.
Nhƣ vậy, giá thể th ch hợp nhất để trồng cây con in vitro D. nobile ngoài vƣờn ƣơm là giá thể bột xơ dừa (CT1).
CT3 CT4
3.3 Ảnh hƣởng của ẩm độ giá thể đến tỷ lệ sống và chất lƣợng cây con loài loài lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm
Dendrobium cũng nhƣ đa số các giống lan khác phát triển tốt trong điều kiện không kh ẩm nhƣng thoáng kh . Loại giá thể quá khô hoặc quá ẩm và úng sẽ là điều kiện bất lợi cho sự sinh trƣởng của giống Dendrobium. Vậy ẩm độ của giá thể khoảng bao nhiêu thì đảm bảo cho Dendrobium phát triển tốt? Chúng tôi đã tiến hành th nghiệm 4 trên 4 mức độ ẩm giá thể khác nhau: 40%, 50%, 60%, 70%.
Ghi chú: kiểm tra ẩm độ giá thể bằng máy đo, cung cấp nước cho giá thể vào sáng sớm hoặc chiều muộn (sáng trước 9h, chiều sau 16h).
Sau 8 tuần theo d i ta có bảng thu hoạch:
Bảng 3.3. Ảnh hƣởng của ẩm độ giá thể trồng đến tỷ lệ sống, khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô
giai đoạn vƣờn ƣơm
Công thức Tỷ lệ sống (%) Chiều cao cây (cm) Số lá /cây (lá) Số rễ/cây (rễ)
Hình thái cây con
CT1: 40% 96,67 5,42 5,66 5,00 Lá xanh, ra rễ mới
CT2: 50% 86,67 5,62 5,54 5,19 Lá xanh, ra rễ mới
CT3: 60% 60,00 4,80 4,50 4,32 Lá xanh nhạt, ra rễ mới
CT4: 70% 43,33 4,72 4,69 3,85 Lá xanh nhạt, không ra
rễ mới
Theo số liệu bảng 3.3 thì với độ ẩm 60% - 70% cây con in vitro có tỷ lệ chết cao (40 – 56,67%), các chỉ tiêu sinh trƣởng đều thấp, cây có lá xanh nhạt và mọc rễ t hoặc không mọc. Ở độ ẩm 40% - 50%, tỷ lệ sống của cây con rất cao (86,67% - 96,67%), các chỉ tiêu sinh trƣởng đều cao và tƣơng đƣơng nhau
(chiều cao cây: 5,42 cm và 5,62 cm; số lá /cây là 5,54 lá và 5,66 lá; số rễ /cây đạt 5,0 rễ và 5,19 rễ), cây xanh tƣơi và ra rễ mới nhiều.
Nhƣ vậy, độ ẩm th ch hợp của giá thể cho nuôi trồng cây lan D. nobile in vitro ngoài vƣờn ƣơm là bột xơ dừa với ẩm độ 40% - 50%.
3.4 Ảnh hƣởng của các loại chế phẩm dinh dƣỡng đến khả năng sinh trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn trƣởng của cây lan Dendrobium nobile Lindl. nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm
Trƣớc khi đƣợc đƣa ra vƣờn ƣơm, cây con in vitro sống trong môi trƣờng nhân tạo hoàn toàn thuận lợi cho sinh trƣởng. Vì vậy, cần phải tạo điều kiện tốt cho cây con th ch nghi với môi trƣờng bên ngoài. Chúng tôi đã tiến hành th nghiệm 2 và tìm đƣợc giá thể phù hợp với cây ngoài vƣờn ƣơm là mùn xơ dừa cho cây có tỷ lệ sống cao và ổn định. Tuy nhiên, không thể không kể đến yếu tố dinh dƣỡng, bởi dinh dƣỡng đóng vai trò quan trọng trong việc sinh trƣởng phát triển thân lá và mỗi giai đoạn sinh trƣởng cây cần một lƣợng phân bón khác